刺梨原汁提取和保存新方法

<正> 刺梨原是生长在我国西南、华中地区荒山僻壤的野果,目前已探明它有极高的营养价值和医药功能。其维生素含量特别丰富,据测定100克刺梨鲜果含维生素 C1800～2500毫克,比号称维生素 C 含量之王的猕猴桃还高5～10倍,还含维生素 D2800毫克、维生素 E 2.4～     

从感染叶片中提取柑橘衰退病毒总核酸3种方法的比较

用分光光度计检测微量抽提法、Trizol法和氯化锂法提取的CTV总核酸,再用RT-PCR和实时RT-PCR法检测,结果表明：3种抽提方法均可以获得CTV的总核酸,其中Trizol法获得的总核酸质量最好,平均浓度为329.3521（μg/mL）,A260/A280平均值为1.8052;进行RT-PCR反应后电泳条带亮度最强;实时RT-PCR显示其Ct值最小.氯化锂法与微量抽提法获得的总核酸质量差异不大,但是微量抽提法更为简便快捷.     

刺梨中黄酮的超声提取及HPLC测定

采用超声波辅助提取刺梨(Rose roxburghii Tratt.)中总黄酮,利用正交试验进行工艺优化,初步建立了刺梨中黄酮的HPLC测定方法。结果表明,超声功率、提取时间和温度均对刺梨中黄酮提取结果影响显著,确定超声辅助提取刺梨黄酮的最佳工艺条件为超声功率300 W,50%乙醇,温度40℃,提取时间为40 min。在此条件下,刺梨黄酮的得率为1.862%。与常规回流提取方法相比,黄酮得率有所增加,同时缩短了提取时间。HPLC法测定结果表明,刺梨中含有芦丁和槲皮素。HPLC法简便、快捷、灵敏、结果准确,可用于刺梨中黄酮成分含量的检测。     

CTAB法用于染病烟草植株中烟草丛顶病毒RNA的提取

 CTAB法是一种广泛用于从染病植物中提取总核酸,并用于后续相关病原物PCR检测的核酸提取法,已普遍运用于DNA病毒、植原体、细菌、真菌侵染植物的总DNA提取和病原检测。本文尝试将CTAB法用于一种由RNA病毒（烟草丛顶病毒）引起的烟草丛顶病染病组织总核酸的提取,以总核酸进行烟草丛顶病毒的RT-PCR检测,并与常规RNA病毒核酸提取法——Trizol法作比较。结果表明CTAB法和Trizol法提取的核酸用于烟草丛顶病毒RT-PCR检测时,均能扩增到目的条带,检测结果一致。在对复合侵染材料进行检测时发现,CTAB法提取的染病植物组织总核酸既包括DNA也包含RNA,有利于对DNA和RNA病原物同时进行检测;CTAB法所用试剂较Trizol法便宜,毒性小,且提取的核酸量较多、保存时间较长。因此CTAB法是一种高效、简便、经济的从烟草丛顶病染病组织中提取烟草丛顶病毒RNA的方法。     

从感染叶片中提取柑橘衰退病毒总核酸3种方法的比较

用分光光度计检测微量抽提法、 Trizol法和氯化锂法提取的CTV总核酸, 再用RT-PCR和实时RT-PCR法检测, 结果表明: 3种抽提方法均可以获得CTV的总核酸, 其中Trizol法获得的总核酸质量最好, 平均浓度为329.352 1(μg/mL), A260/A280平均值为1.805 2; 进行RT-PCR反应后电泳条带亮度最强; 实时RT-PCR显示其Ct值最小. 氯化锂法与微量抽提法获得的总核酸质量差异不大, 但是微量抽提法更为简便快捷.     

动植物总核酸提取试验

依据最简单的核酸提取3步骤:细胞裂解、去除杂质、沉淀核酸的原理设计了一种普适性的动植物核酸提取方法(简称PS法),并对包括裸子植物门的银杏纲、苏铁纲、松柏纲,被子植物门的双子叶植物纲和单子叶植物纲的20种植物材料以及动物界的5纲5种材料进行了提取试验.结果表明,用PS方法提取动植物总核酸均能取得较理想的提取效果.所提取的总核酸分别用RNase和DNase进行消化,可分离纯化出高纯度的DNA和RNA.     

刺梨总黄酮的提取、纯化及其在卷烟中的应用

为了开发天然烟用香原料,利用刺梨富含黄酮类化合物的特点,用乙醇提取刺梨总黄酮,用大孔树脂分离纯化,并优化了提取工艺和纯化工艺,同时将其应用于卷烟中。结果表明,刺梨总黄酮的最佳提取工艺:75%的乙醇提取6h、提取温度为70℃,料液比为1∶6(W/V,100g∶L);最佳纯化工艺:AB-8型树脂吸附时间2.0 h,上样速率1.5 mL/min,解吸液80%的乙醇,洗脱液体积为4倍的柱容量,洗脱速率为1.5mL/min;经纯化的刺梨总黄酮用于卷烟中明显优于粗提取液,具有柔和烟气、改善口感的作用。     

利用CTAB法提取红掌不同部位基因组DNA

采用CTAB法,对红掌的叶、叶柄、肉穗花序、佛焰苞、根等5个部位进行基因组DNA提取,利用紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法和RAPD扩增法检测DNA的质量,结果表明,CTAB法适合红掌根和叶的基因组DNA提取,没有蛋白质、酚及色素等杂质的污染,佛焰苞的DNA中有少量蛋白质污染,叶柄DNA中含有较多的蛋白质、酚等杂质,而从肉穗花序中没有提取到基因组DNA。     

动植物总核酸提取试验

依据最简单的核酸提取3步骤:细胞裂解、去除杂质、沉淀核酸的原理设计了一种普适性的动植物核酸提取方法(简称PS法),并对包括裸子植物门的银杏纲、苏铁纲、松柏纲,被子植物门的双子叶植物纲和单子叶植物纲的20种植物材料以及动物界的5纲5种材料进行了提取试验.结果表明,用PS方法提取动植物总核酸均能取得较理想的提取效果.所提取的总核酸分别用RNase和DNase进行消化,可分离纯化出高纯度的DNA和RNA.     

利用改良CTAB法提取小麦干种子总DNA

利用改良CTAB法提取小麦干种子总DNA,总DNA样品经紫外光谱吸收、琼脂糖凝胶电泳、PCR和酶切检测,证实该法是提取小麦总DNA的有效方法,其总DNA样品质量可满足下游分子生物学实验要求。     

刺梨叶片中总黄酮和水溶性多糖的提取工艺

采用水煮浸提法综合提取刺梨叶片中的总黄酮和水溶性多糖,通过单因素实验筛选对提取有显著影响的因素进行正交实验,分析获得较优工艺参数。结果表明,综合提取总黄酮和水溶性多糖的较优的工艺参数为：固液比1：30,温度90℃,pH=10。提取液通过炭粉吸附法获得粗多糖的纯度为21．37％,粗黄酮的纯度为53．26％。提取液通过大孔吸附树脂法获得粗多糖的纯度为18．27％;粗黄酮的纯度为36．27％。用水煮浸提法,对刺梨叶片中黄酮和多糖共同进行提取是可行的,并通过大孔树脂或活性炭将二者初步分离。     

几种木本果树DNA的有效提取

提取高质量的ＤＮＡ是有效开展分子生物学研究的前提。多糖污染是木本植物ＤＮＡ提取中最常遇到的问题。多糖污染的ＤＮＡ呈粘稠的胶状 ,不但给实验操作带来不便 ,更重要的是多糖对反应体系中的酶活性产生抑制作用 ,严重影响分子生物学研究的下游工作[1～3] 。很多多年生木本果树 ,即使其幼嫩组织多糖的含量也明显高于大田作物 ,所以 ,常规的ＤＮＡ提取方法因不能有效除去多糖而在木本果树应用中受到限制。经典的ＣｓＣｌ梯度离心能有效除去柑桔等木本果树的多糖而得到高纯度的ＤＮＡ ,但由于梯度离心设备昂贵 ,涉及ＥＢ ,操作不便 ,且ＤＮ…     

改良CTAB法提取高质量香蕉叶片总RNA

以巴西香蕉叶片为试验材料,采用改良CTAB法提纯香蕉叶片总RNA.结果表明,改良CTAB法提取的香蕉叶片总RNA的28S、18SrDNA条带清晰、整齐,A260/A280值大于2.0,无需任何纯化处理即可用作香蕉MuACTIN基因的扩增模板,经RT-PCR扩增获得了带型清晰的目的条带,说明利用此法分离的RNA纯度和浓度符合RT-PCR的要求;而CTAB法提取的总RNA产量较低,且纯度不高.说明改良CTAB法能有效从富含多酚和多糖的香蕉叶片中提取高质量的总RNA.     

三种暖季型草坪草基因组DNA的提取方法

采用改进CTAB法分别提取狗牙根(Cynodon dactylon)、结缕草(Zoysia spp.)、假俭草(Eremorchloa ophiuroides)3种暖季型草坪草基因组DNA.得到的DNA经核酸蛋白含量测定仪测得A260/A280值处于1.74～1.98之间、A260/A230集中处于1.74～1.99,经琼脂糖凝胶电泳检测各样品具有一条明亮主带并无拖尾现象.表明改进CTAB法提取得到的DNA完整性好,纯度高,适用于分子生物学的研究.     

刺梨叶化学成分研究

刺梨叶(Folium Rosae roxburghii)为蔷薇科蔷薇属植物的单瓣缫丝花的晒干叶[1],其酸、涩、平、归脾胃经,功能主治健胃消食,用于治疗积食饱胀、疥痛金疮,主要分布于云南、四川、贵州等地,为贵州少数民族用药.     

一种适用于甘蔗SSR-PCR的DNA快速提取方法

以不同甘蔗品种幼苗期幼嫩叶片为材料,以改良SDS法和DNA快速提取法对甘蔗基因组DNA进行提取,并以SSR-PCR检测比较两者的扩增效果。结果表明,两种方法提取获得的基因组DNA条带基本一致,条带较为清晰,重复性好且稳定,均可满足SSR-PCR扩增的需要。但DNA快速提取法简化了SDS改良法,具有高通量、操作方便、简单、快速、成本低、DNA存放时间较长等优点,能在较短时间内完成大量样品的DNA提取。     

一种简便的同步提取烟草叶片DNA和总RNA的方法

以野生型和转几丁质酶烟草株系叶片为材料,采用改进的CTAB法对其DNA和总RNA进行同步提取和DNA中RNA的消化以及总RNA中DNA的消化,并分别进行了电泳检测、含量测定和相应的PCR和RT-PCR检测.结果表明:用该法提取的DNA条带清晰、无降解,所提取的DNA浓度在109.20～245.46 μg/mL,OD26...     

龙眼组织总RNA提取与纯化方法的研究

针对龙眼组织富含多糖、单宁、色素及酚类物质的特点,采用改良的SDS法和CTAB法进行龙眼顶芽、叶片和茎皮3种组织总RNA的提取与纯化研究。结果表明。两种方法提取的总RNA均具有28、18、5S3条清晰、完整的条带,且无降解现象;A260／A280均介于1．8-2．0之间。A260／A230均大于2．0。说明改良的SDS法和CTAB法提取的总RNA具有很高的纯度。可以满足后续分子生物学研究的要求。     

刺梨RNA的有效提取及Actin基因片段的克隆

[目的]为刺梨的分子生物学研究奠定技术基础。[方法]分别采用改进的CTAB-LiCl法和CTAB法提取刺梨果实中的总RNA和基因组DNA。对刺梨总RNA进行反转录,生成cDNA第1链。根据GenBank上的蔷薇科肌动蛋白(Actin)基因保守序列设计1对跨内含子引物Actin1和Actin2,以cDNA第1链和基因组DNA为模板进行RT-PCR扩增。将含有目的片段的凝胶进行回收纯化,克隆到PMD18-T载体上,转化大肠杆菌TG1感受态细胞,选取带有目的片段的重组质粒进行测序和序列分析。[结果]将目的片段回收后克隆于T载体,可获得298 bpActin基因的cDNA序列。克隆所得核苷酸序列与蔷薇、桃和葡萄的核苷酸序列相似性达83%,与富士苹果、甜菜等的相似性也超过80%。刺梨Actin基因编码的氨基酸序列与梨的相似性最高(达97%),其次是葡萄、花生、大豆、棉花和马铃薯,而与水稻、拟南芥等的相似性也达90%以上。[结论]Actin基因跨内含子,用该Actin基因片段作内标可以减少DNA污染。     

水稻单粒种子DNA提取及RAPD程序优化研究

本文用水稻单粒干种子作材料，进行了DNA提取方法和RAPD程序优化程序。结果表明：CTAB法微量提取水稻干种子DNA可获得理想的扩增结果，最佳的反应体系和条件昌：随机引物浓度100～400ug/L、Mg^2 浓度2～4mmol/L、dNTPs浓度100～400umol/T、Taq酶IU。变性94℃30s，退火38℃30s，延伸72℃1min，40个循环。为了节约时间和成本，可不进行予变性处理，反应体积可降至12.5ul，扩增效果一样。