呼和浩特地区牛羊布鲁菌流行株种及生物型鉴定

应用常规细菌学方法,对呼和浩特部分地区疑似布鲁菌病的牛、羊流产胎儿病料进行了布鲁菌分离,共分离到4株布鲁菌.进一步根据细菌形态、培养特性、生化特性以及平板凝集试验等对分离到的细菌进行种型鉴定.结果表明,其中3株为羊种布鲁菌生物3型,1株为牛种布鲁菌生物3型.本研究结果为内蒙古地区布鲁菌病的防控奠定了病原学基础.     

布鲁菌疫苗株A19全基因组测序及功能分析

采用Illumina Hiseq和PacBio测序技术对布鲁菌A19进行全基因组测序,并进行GO注释、VFDB注释、ARDB注释、CRISPR以及基因岛预测等生物信息学分析。结果显示:A19全基因组大小为3.28 Mb,GC含量分布未见异常,含1个CRISPR和16个基因岛,通过GO数据库注释发现,参与生物学途径的基因5 311个、细胞组份基因有3 350个、分子功能基因有3 078个;通过VFDB注释发现,与毒力相关的基因82个,主要包括脂多糖(LPS)、纤连结合蛋白、virB四型分泌系统等毒力相关因子;通过ARDB数据库注释发现,与耐药相关的基因1个,该基因的表达产物通过影响焦磷酸异构酶的表达,从而产生对抗生素的耐药。本试验通过A19全基因组测序,为布鲁菌病的治疗和致病机制的研究及疫苗的开发奠定了基础。     

布鲁菌疫苗株S2全基因组测序及功能分析

为找出布鲁菌疫苗株S2基因组分泌性蛋白、参与生物学途径基因、细胞组件基因、分子功能基因、毒力相关因子及耐药基因,对布鲁菌疫苗株S2全基因组测序并进行Ⅲ型分泌系统效应蛋白预测、GO注释、VFDB注释、ARDB注释。全基因组测序结果表明,S2基因组大小约为3.3 Mb,杂合度和重复度较低,GC含量分布未出现异常。通过Ⅲ型分泌系统效应蛋白预测未找出S2分泌性蛋白。通过GO数据库注释,发现参与生物学途径基因有3 823个、细胞组件基因有1 949个、分子功能基因有2 585个。通过VFDB数据库注释,找出S2基因组有79个毒力相关基因,其中最大基因为8 604bp,最小基因为180bp。通过ARDB数据库注释,找出S2基因组有13个耐药基因,最大基因为3 225bp,最小基因为333bp;其中功能注释的有GL002835基因,是枯草杆菌肽类基因,此基因耐受抗微生物类药物。本研究为进一步了解布鲁菌S2基因组基本功能奠定了基础。     

绵羊种布鲁菌致病机制与防控研究进展

布鲁菌病(Brucellosis)是一种高度流行的人畜共患传染病,可造成巨大的经济损失,严重制约了当今畜牧业的发展并对人类健康构成了严重威胁。绵羊种布鲁菌病是由绵羊种布鲁菌(Brucella ovis,B.ovis)引起的一种以绵羊生殖系统功能障碍和怀孕绵羊流产为特征的慢性传染性疾病。目前,对于绵羊种布鲁菌的胞内寄生机制和感染机制尚不清楚,现将从病原学、流行病学、致病机制和疾病防控等方面对绵羊种布鲁菌病的研究进展进行概述,为后期挖掘绵羊种布鲁菌的致病机理和与其相关的研究奠定一定的理论基础。     

布鲁菌抗体ELISA检测方法比较试验

为了筛选可靠的布鲁菌病诊断试剂,本中心选择5种诊断试剂盒分别对180份临床血清(牛、羊血清各90份)进行比较检测,对检测结果不一致的样本,进一步用经典的补体结合试验(CFT)进行验证,分析各种方法之间的符合性。结果显示:cELISA-IVDC与iELISA-IVDC之间符合率为98.3%(177/180),cELISA-Sva与iELISA-Sva之间符合率为91.7%(165/180);iELISA-IVDC、iELISA-Sva、iELISA-Idexx与CFT的符合率分别为98.9%(178/180)、93.3%(168/180)和87.8%(158/180);cELISA-IVDC、cELISA-Sva与CFT之间的符合率分别为96.7%(174/180)和89.4%(161/180)。结果表明,不同布鲁菌病诊断试剂盒检测结果存在差异,其中iELISA-IVDC和cELISA-IVDC与CFT的符合率最高;iELISA-IVDC与cELISA-IVDC之间的符合率高于其他布鲁菌病试剂盒。     

布鲁菌疫苗株Rev.1全基因序列的测定与分析

为促进布鲁菌病Rev.1疫苗及相关疫苗的研发, 该研究提取Rev.1疫苗株核酸, 应用PacBio平台进行全基因序列测定与分析。结果表明, Rev.1疫苗株基因组大小约3 299 187 bp, G+C含量为57.2%, 组装为染色体1、染色体2两条环状基因组, 大小分别为2 121 370、1 177 817 bp, G+C含量分别为57.2%、57.3%。将其Ery、BLS和VirB10基因序列与9株GenBank上发表的布鲁菌参考菌株的Ery、BLS和VirB10基因序列进行比较分析, 存在不同程度的差异, 同源性为97.4%~100%。     

布鲁菌S2疫苗株免疫牛与牛种、羊种布鲁菌自然感染牛ELISA鉴别诊断方法的建立

为建立区分猪种布鲁菌S2疫苗株接种奶牛与布鲁菌自然感染奶牛,BLAST比对分析羊种、牛种、猪种、犬种、沙林鼠种和绵羊种6种布鲁菌基因序列,发现repA-related基因是猪种布鲁菌与牛种及羊种布鲁菌的差异基因。设计引物PCR扩增获得repA-related基因片段,克隆并原核表达得到了布鲁菌repA-related融合蛋白,以repA-related蛋白建立间接ELISA检测方法。用repA-related蛋白间接ELISA检测猪种S2疫苗株接种动物血清为阳性,检测牛种和羊种布鲁菌自然感染动物血清为阴性。repA-related蛋白间接ELISA能从试管凝聚实验(SAT)及常规ELISA检测阳性的奶牛血清样本中,区分出S2疫苗接种牛与牛种布鲁菌感染牛。     

猪布鲁菌S2omp10基因缺失株的构建及特性

现有的布鲁菌减毒活疫苗存在一定毒力,且野强毒株和减毒活疫苗株间缺少可供鉴别的抗原,导致在血清学检测上自然感染与疫苗接种很难区分,限制了现有的减毒活疫苗的广泛应用.本文拟对布鲁菌的减毒活疫苗株S2进行遗传改造,克服上述缺陷.本研究利用同源重组的方法,得到了布鲁菌S2株omp10基因缺失株.分别用基因缺失株和疫苗株感染小鼠,比较基因缺失株小鼠体内的存活能力.结果成功构建了布鲁菌S2株omp10基因缺失株,动物试验结果表明,基因缺失株仍能在小鼠体内存活,具备作为减毒活疫苗的特性.与原始S2株比较,基因缺失株的感染力进一步减弱.表明omp10基因在布鲁菌的毒力及体内生存方面发挥了作用,为基因标记疫苗的研制奠定了基础.     

分子生物学技术在布鲁菌种型鉴定上的应用

由于布鲁菌种型较多、宿主广泛、传播途径多样,因此有必要对布鲁菌进行准确的种型鉴别,以利于该病的快速诊断、流行病学分析,并采取科学有效的防控措施。分子生物学技术的不断发展为布鲁菌种型鉴定提供了愈来愈丰富的手段,并逐渐成为布鲁菌遗传溯源研究的重要工具。MLVA和real-time PCR技术因具有重复性好、分辨率高等优势,成为布鲁菌种型鉴定研究关注的热点。多重PCR、RFLP、RAPD和REP等技术也在布鲁菌种型鉴定中得到广泛应用。为了解分子生物学技术在布鲁菌种型鉴定上的应用现状,对相关研究进行了综述。     

布鲁菌S2疫苗株免疫牛与牛种、羊种布鲁菌自然感染牛ELISA鉴别诊断方法的建立

为建立区分猪种布鲁菌S2疫苗株接种奶牛与布鲁菌自然感染奶牛,BLAST比对分析羊种、牛种、猪种、犬种、沙林鼠种和绵羊种6种布鲁菌基因序列,发现repA—related基因是猪种布鲁菌与牛种及羊种布鲁菌的差异基因。设计引物PCR扩增获得repA-related基因片段,克隆并原核表达得到了布鲁菌repA—related融合蛋白,以repArelated蛋白建立间接EI．IsA检测方法。用repA—related蛋白间接ELISA检测猪种s2疫苗株接种动物血清为阳性,检测牛种和羊种布鲁菌自然感染动物血清为阴性。repA—related蛋白间接EusA能从试管凝聚实验（SAT）及常规ELIsA检测阳性的奶牛血清样本中,区分出s2疫苗接种牛与牛种布鲁菌感染牛。     

感染牛布鲁菌544A的巨噬细胞蛋白质组学分析

布鲁菌在巨噬细胞内寄生改变了巨噬细胞的很多结构和功能,对牛布鲁菌强毒株544A感染的巨噬细胞和未感染的巨噬细胞全细胞蛋白进行比较蛋白质组学分析,质谱鉴定和生物学信息检索,结果显示,共有13个差异蛋白点,代表了12种蛋白质,这些蛋白主要参与细胞的代谢,细胞骨架合成,蛋白损伤修复以及基因的转录调控等生物过程。这些蛋白的发现将为进一步研究布鲁菌的感染与致病机制提示方向,同时也为深入探讨病原菌与宿主的相互作用模式奠定了基础。     

不同方法检测奶牛布氏杆菌抗体的比较试验

采用虎红平板凝集试验(RBT)、全乳环状试验(MRT)和试管凝集试验(SAT)3种国家标准认可的动物布病检疫方法检测奶牛布氏杆菌抗体,并进行了比较研究。从82头非免疫和S2菌苗免疫的奶牛采集血样和乳样,RBT检测血样的阳性率为51.22%(42/82),MRT检测乳样的阳性率为46.34%(38/82),SAT检测血样的阳性率为45.12%(37/82)。以SAT定量检测的结果为参照标准,RBT初筛试验的符合率比MRT高,而且MRT反应强度的差异与SAT抗体滴度没有明显相关性。另对乳清和血清样本中布氏杆菌抗体的差异进行了分析讨论。     

奶牛布鲁氏菌的监测与分离鉴定

本试验采用SAT方法对乌鲁木齐地区某牛场进行了布鲁氏菌病监测,对阳性奶牛的乳汁进行细菌分离培养,用VirB8-PcR方法对分离株VirB8基因进行扩增鉴定。结果表明,2个分离株均为布鲁氏菌,布鲁氏菌分子分型PCR的鉴定结果显示该牛场感染的自然菌株为布鲁氏菌牛种（3b,5,6,9型）。     

布鲁氏菌omp28基因的克隆、表达及反应原性分析

本研究克隆了羊种布鲁氏菌16M株、羊种布鲁氏菌M28株、犬种布鲁氏菌、绵羊附睾种布鲁氏菌、牛种布鲁氏菌A19株、猪种布鲁氏菌S2株的omp28基因并对以上不同种菌株的omp28基因序列及编码的氨基酸序列进行了比对,结果显示不同种布鲁氏菌omp28基因之间仅6个碱基不同,而且只有2个氨基酸不同,亲水性分析结果显示两处氨基酸的差异对蛋白亲水性不造成影响.将羊种布鲁氏菌16M的omp28基因亚克隆到pET32a中表达,OMP28在低温下诱导以可溶性形式高效表达.Westem-blot结果显示OMP28反应原性良好,是布鲁氏菌病诊断抗原的可能选择.     

三维基因组学概述及其在农业生物育种方面的研究进展

真核细胞中染色质以不同层次的三维结构有序的折叠在细胞核中,其空间层次结构对基因的表达调控和细胞发挥正常的生理功能都起着重要的作用,在动物育种方面具有很大潜力,但尚未被完全探索。本文介绍三维基因组的结构单元(染色质疆域、A/B 区室、拓扑关联结构域和染色质环)以及研究三维基因组的主要技术,对三维基因组学在农业中的研究进展和应用前景进行了探讨,旨在深入了解三维基因组学的功能和应用前景,以期为生物育种改良提供部分帮助。     

生物信息学在畜禽基因组研究中的应用

生物信息学已成为整个生命科学发展的重要组成部分，是生命科学研究的前沿领域。作者简述了畜禽基因组学和畜禽生物信息学的研究概况，着重阐述了生物信息学在畜禽基因组研究中的应用现状，并展望其发展前景。     

布鲁氏菌诊断学研究进展

布鲁氏菌病是一种人兽共患传染性疾病,分布广泛,严重威胁公共卫生事业和畜牧业的发展,布鲁氏菌的诊断是防控该疫病的关键。本文对细菌学、常规免疫学、酶联免疫吸附（ELISA）、免疫胶体金层析法（GICA）、荧光偏振法（FPA）、聚合酶链式反应（PCR）和基因探针等布鲁氏菌检测技术及其优缺点和应用现状进行综述,并对诊断技术的发展前景进行了展望。     

梅花鹿与欧洲马鹿染色体水平基因组的比较研究

旨在从基因组层面揭示梅花鹿与欧洲马鹿的起源进化,找到与进化过程相关的信号通路并与表型进行关联.本试验以成年雌性梅花鹿与成年雄性欧洲马鹿染色体水平基因组作为研究对象,利用比较基因组学的方法对梅花鹿和欧洲马鹿基因组进行染色体共线性分析,获得两个物种间基因组序列的同源关系和基因组发生的染色体倒位现象,并对被倒位截断和在倒位内...     

山羊流产胎儿绵羊附睾种布鲁菌(Brucella ovis)的分离和鉴定

从山羊流产胎儿中分离出1株绵羊附睾种布鲁菌(Brucella ovis),经培养发现该菌需要CO2,不产生H2S,且经硫堇、碱性复红和A、M、R因子血清凝集试验及噬菌体裂解试验等方法鉴定,该菌株与国际标准菌株绵羊附睾种特性完全一致。在山羊中分离出绵羊附睾种布鲁菌株(Br.ovis)在国内尚属首次发现。