应用抗原捕捉ELISA快速检测牛病毒性腹泻病毒

在96孔微量板中包被BVDV(Erns)单克隆抗体,加入被检血清,血清中的病毒特异性地与抗体结合,形成抗原抗体复合物.洗涤去除未结合的物质,加入酶标抗体连接物.再洗去未结合的酶连接物,加入底物后显色,加入终止液终止反应.用装有450 nm滤光片的酶标仪进行检测,通过计算S-N值,判定血清中BVDV抗原阴性、阳性.此法具有特异、快速、灵敏的特点.     

牛病毒性腹泻病诊断的研究进展

牛病毒性腹泻－粘膜病病毒（ＢＶＤＶ）是黄病毒科瘟病毒属的成员。它主要引起牛的腹泻并呈现多种临床症状,该病给全世界各国的养牛业造成了很大危害。国内外对ＢＶＤＶ检测技术的研究不断深入,已从病毒原分离鉴定及免疫学检测发展到基因序列和结构测定的分子生物学水平。     

牛病毒性腹泻病毒蛋白特性的研究进展

作者对牛病毒性腹泻病毒(Bovine Viral Diarrhea Virus，BVDV)的生物学特性、基因组结构特征及编码蛋白的合成与功能的研究进展进行了综述。     

猪瘟细胞苗污染牛病毒性腹泻病毒情况调查

为了调查猪瘟细胞苗中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的污染情况,应用RT-PCR方法对湖南省内销售的10个厂家48个批次的猪瘟细胞苗进行BVDV病毒核酸检测。结果:10个厂家的猪瘟细胞苗中有5个厂家检出BVDV核酸阳性,48个批次中有9批次检出BVDV核酸阳性,阳性率为18.75%。调查表明当前猪瘟细胞苗BVDV污染较严重。     

牛病毒性腹泻病实验室诊断方法的研究进展

牛病毒性腹泻是由牛病毒性腹泻病毒引起的,以出现多症状、持续性感染和免疫抑制为主要特征,呈世界性广泛流行。主要对用于该病的病原学诊断、血清学诊断和分子生物学诊断等实验室诊断方法进行综述,以期为建立更加快速、有效的诊断方法提供参考。     

牛病毒性腹泻病研究进展及防控建议

牛病毒性腹泻病由牛病毒性腹泻病毒引起,主要感染牛并引发疾病,呈世界性分布,可造成严重的经济损失.近年来,随着规模化养殖的发展,牛病毒性腹泻病对养殖业的危害日益显现.本文主要对牛病毒性腹泻病的病原特性、基因型分类、危害、诊断检测方法、国内流行情况和防控现状等进行综述,以期为国家尽快建立完善的防控体系和净化消除该病提供参考.     

牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白研究进展

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是引起牛病毒性腹泻-黏膜病(BVD-MD)的病原,感染后可造成牛腹泻、流产、繁殖障碍、持续感染等症状,且急性BVD致死率较高,对我国乃至世界养牛业造成了严重影响。目前,国内外对BVDV的研究主要聚焦在其结构蛋白方面,对于在BVDV复制、转录、翻译中起重要作用的非结构蛋白的研究较少,缺乏对BVDV非结构蛋白的功能进行系统的总结。论文对BVDV非结构蛋白功能方面近年来的研究进展进行了汇总,以期对今后牛病毒性腹泻黏膜病的致病机制、诊断及预防提供参考。     

牛病毒性腹泻病毒在绵羊垂直感染中的抗原分布

将新疆分离的病毒性腹泻病毒（BVDV）野毒株SHN－98和标准毒株Oregon C-24分别接种无BVDV感染的羔羊和怀孕100天左右的母羊，建立BVDV在绵羊垂直感染的动物模型，应用病毒抗原定位检测的免疫组化染色技术，探求BVDV在实验性感染绵羊经胎盘感染胚胎、羔羊过程中，病毒在感染组织、靶器官、靶细胞中的分布规律。结果表明：BVDV通过母羊的胎盘感染胚胎。BVDV在感染妊娠母羊体内主要分布于心肌、肝、肺、脾、淋巴结、胃肠粘膜、脑神经、子宫粘膜、胎盘等器官组织，其中以胃肠粘膜、脾、淋巴结、脑神经、子宫粘膜、胎盘等器官组织中分布量较多；BVDV在垂直感染胚胎体内主要分布于胸腺、淋巴结、脑、肝、肾、心肌、脾、肺、胃肠粘膜、脐带等器官组织，其中以胸腺、胃肠粘膜、脑神经等器官组织中分布量较多；BVDV在垂直感染羔羊体内主要分布于心、肾、胃肠粘膜、脾、胸腺、淋巴结、大脑、小脑、海马、视丘、视神经、眼球脉络膜等器官组织，其中以胃肠粘膜、大小脑、用、视神经、淋巴结等器官组织中分布较多，在组织分布中，BVDV对上皮细胞、神经胶质细胞、淋巴细胞有较强的亲嗜性，SHN－98和OregonC-24在垂直传播中组织器官的分布无明显差异。     

氮肥对苦参生长和生物总碱的效应

对苦参进行驯化栽培是解决其供需矛盾的主要途径,也是保护生态环境最有效的措施。本试验研究氮肥对苦参生长、生物总碱含量和生物总碱产量的效应。采用盆栽试验,施纯氮量设0,50,100,150和200 mg/kg五个水平,完全随机设计。结果表明,施用氮肥对苦参生长以及苦参总碱含量均有显著促进效应。各施氮处理根干重均与对照差异显著,当施纯氮150 mg/kg时根干重最高,比对照增加42％;根直径随施氮量提高呈增加趋势,当施纯氮150 mg/kg时根直径最大,比对照增加21.1％;叶绿素总含量在施纯氮100 mg/kg时最高,比对照增加33.8％;苦参总碱含量在施纯氮100 mg/kg时最高,比对照增加35.7％;单株苦参总碱产量在施纯氮150 mg/kg时最高,较对照增加90.5％。氮对根干重增加效应主要是由于根直径增加引起根体积增加所致,苦参叶片中叶绿素含量随施氮量增加有利于苦参总碱含量提高。     

牛病毒性腹泻病毒的多型性及疫病防控

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)引起牛病毒性腹泻-黏膜病,广泛分布于世界各地。该病毒具有较大的变异性,根据病毒基因组结构特点分为2个基因型,即BVDV1和BVDV2。每个基因型包括多种基因亚型,每个基因型又有2个生物型,致细胞病变(CP)型和非致细胞病变(NCP)型。病毒的这种特性造成各病毒株的抗原性和血清学特性的差异,给疫病的流行病学研究、诊断、疫苗研究和防控工作造成一定困难。文章论述了病毒的这种特性造成疫病的多种临床表现,导致疫病防控困难,说明了流行病学分析在该病防制的重要性,提出疫病主要诊断方法及防控措施。     

猪源牛病毒性腹泻病毒的流行初探

根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)代表株NADL的NS5B基因序列,设计合成2对引物进行套式PCR,检测从浙江、安徽、湖南、江西、广西、辽宁等地采集的43份猪病料中BVDV的流行情况,结果有7份病料可以扩增出360bp的特异性条带,阳性率为16.3%。为追踪BVDV在猪体中的流行来源,我们又对细胞培养用国产及进口犊牛血清进行了检测,结果也能扩增到目的条带。对这些病料和血清中扩增出的目的条带进行克隆、测序,并用DNASTAR软件分析,结果表明这些目的片段均为BVDV序列,这些不同BVDV序列可以分为两个亚群,ZJ133、HN386、LN247、NCS-J属于BVDV-Ⅰa亚型,ZJ114、AH138、JX60、GX96、NCS-G、DZ属于BVDV-Ⅰb亚型。这些毒株与BVDVI型间的同源性为80.3%-98.6%,与BVDV-Ⅱ型的同源性为72.2%-74.4%。本文研究结果说明我国猪群中BVDV感染情况已经比较严重,应该予以重视。     

地高辛标记核酸探针检测牛粘膜病病毒

本课题建立了地高辛标记核酸探针检测牛病毒性腹泻－粘膜病病毒（ＢＶＤＶ）的诊断方法。根据ＢＶＤＶ基因序列的结构特点,在编码非结构蛋白ｐ１２５高度保守基因区内,设计合成一对特异性引物。以ＰＣＲ技术从ＢＶＤＶ基因重组质粒中扩增出了ＢＶＤＶ特异的、保守的４００ｂｐ核苷酸片段,经纯化后,地高辛标记,制备牛病毒性腹泻病毒的特异性核酸探针。通过检测ＢＶＤＶ细胞培养物、相关病毒及核酸载体和ＢＶＤＶ细胞培养物的总Ｒ     

BVDV permissiveness and lack of expression of co-stimulatory molecules on PBMCs from calves pre-infected with BVDV

Bovine viral diarrhea virus (BVDV) has been detected in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) of immunocompetent animals, not being clear whether the development of a specific humoral immune response can prevent BVDV infection. The aim of this study was to evaluate the ability of non-cytopathic BVDV to replicate and produce infectious virus in PBMCs from calves pre-infected with BVDV and to elucidate the immunomodulatory effect of BVDV on these cells in an in vitro model. Quantification of virus was by quantitative PCR, while its replicative capacity and shedding into the extracellular environment was evaluated by viral titration. Apoptosis was assessed by flow cytometry analysis of annexin V and propidium iodide, and by expression of caspase-3/7. Flow cytometry was used to analyze the expression of CD14/CD11b/CD80, CD4/CD8/CD25, MHC-I/MHC-II and B-B2 markers. Our results showed that PBMCs from cattle naturally infected with BVDV were more susceptible to in vitro BVDV infection and showed a more severe apoptosis response than those from naïve animals. Non-cytopathic BVDV in vitro infection also resulted in a lack of effect in the expression of antigen presentation surface markers. All these findings could be related to the immunosuppressive capacity of BVDV and the susceptibility of cattle to this infection.     

牛病毒性腹泻病毒p80基因的分段表达及其抗原性分析

为建立以重组p80蛋白为抗原的牛病毒性腹泻（BVD）鉴别诊断ELISA方法，采用PCR方法克隆了BVDV p80基因的A、B、C三段基因片段，分别连接到原核表达载体pGEX-6P1上，获得了重组质粒pGEX-6PI-p80A、pGEX-6PI-p80B和pGEX-6P1-p80C，将其分别转化感受态茵Rosetta和BL21，经1．0mmol／L的IPTG诱导，分别得到大小为60、47和51ku的目的蛋白。经Western-blotting分析，3个目的蛋白中，只有p80B（289～477aa）基因片段所表达的融合蛋白能与BVDV阳性血清反应，表明p80蛋白的免疫优势区域集中在此部位。该融合蛋白可以作为诊断抗原用于建立ELISA诊断方法。     

苦豆子总碱对小鼠急性毒性试验研究

采用改良寇氏法测定苦豆子总碱提取物对小鼠腹腔注射的急性毒性,评价其安全性,为临床安全用药提供依据。给试验组小鼠灌服不同浓度的苦豆子总碱提取物,观察给药后小鼠的临床表现与死亡情况,采用改良寇氏公式计算LD50及LD50的95%可信限,结果表明,苦豆子总碱经腹腔注射的LD50为559.24 mg/kg,95%可信限为471.95-663.59 mg/kg。试验结果提示,苦豆子总碱的毒性较低,临床用药安全可靠。     

牛病毒性腹泻病毒梅花鹿分离株E0基因的克隆与表达

利用RT-PCR技术扩增了牛病毒性腹泻病毒(BVDV)梅花鹿分离株E0基因，并将其克隆到pMD18-T克隆载体和pET28a原核表达载体中，构建了pMD18-T／E0和pET28a／E0重组子，并进行了测序和表达。表达产物分别用12％SDS-PAGE检测和牛抗BVDV阳性血清进行Western-blotting检测，结果表明．BVDV梅花鹿分离株E0基因的核苷酸序列与匈牙利VEDEVAC株的同源性高达98．6％，与C21V标准株的同源性为84．9％，证明构建的重组子是正确的；BVDV梅花鹿分离株E0基因得到了正确表达。