家兔黄艾美耳球虫活虫苗免疫的血清抗体消长规律研究

应用建立的ＥＬＩＳＡ成功地检测了家兔黄艾美耳球虫活虫苗免疫后的血清ＩｇＧ抗体水平。结果表明，在首兔１５ｄ可检测到血清ＩｇＧ抗体，首免２５ｄ左右血清ＩｇＧ抗体达到高峰值，二免３０￣３５ｄ左右又测到一个高峰值，攻虫后血清ＩｇＧ抗体明显升高，重复免疫所诱发的血清抗体ＩｇＧ水平，但是血清ＩｇＧ水平与保护率无相关性。     

鸡马立克氏病疫苗免疫后的免疫学变化

实验对１日龄雏鸡接种ＭＤ三价疫苗或ＨＶＴ疫苗后的免疫应答变化进行了检测．发现ＭＤ疫苗免疫后：（１）脾脏、胸腺Ｔ细胞ＩＬ—２诱生活性和ＩＬ—２Ｒ表达明显增强或增多，表明ＩＬ—２的免疫调节作用增强；（２）胸腺、法氏囊和脾脏中Ｔ细胞和抗体生成细胞数量及Ｔ细胞增殖功能明显增高，表明中枢与外周免疫器官的细胞免疫和体液免疫应答显著增强；（３）盲肠扁桃体、哈德尔腺、支气管粘膜淋巴组织中Ｔ细胞和抗体生成细胞数量以及泪液、气管液、肠液、胆汁中ＩｇＡ，ＩｇＧ，ＩｇＭ含量明显增多，表明呼吸道与消化道的局部免疫应答也显著增强；（４）ＭＤ三价疫苗免疫鸡的上述免疫应答变化比ＨＶＴ疫苗免疫鸡明显．     

禽大肠杆菌血清型O2,O78融合双价弱毒菌株免疫原性的研究

试验鸡在１０ｄ龄用禽大肠杆菌Ｏ２、Ｏ７８融合双价弱毒菌苗免疫,免疫后１４ｄ对Ｏ２、Ｏ７８强毒株攻击的保护率分别为７３％和８０％,免疫后４２ｄ的保护率分别为６６７％和７３３％,与对照组比较差异极显著（Ｐ＜００１）．采用ＥＬＩＳＡ检测免疫鸡血清抗Ｏ２、Ｏ７８的ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ等类抗体的消长情况,结果显示,血清中各类抗体的ＥＬＩＳＡ总滴度与保护效果呈正相关．其中,ＩｇＭ在免疫后２周内起主要保护作用,ＩｇＧ在２周后起主要保护作用,ＩｇＡ在血清中出现迟缓．     

禽霍乱强化苗研究——Ⅲ.疫苗免疫后淋巴细胞活性变化

本试验应用MTT检测法,对禽霍乱强化苗免疫鸡的外周血淋巴细胞活性进行检测。强化苗免疫后1周内试验鸡淋巴细胞增殖强度,Con A组和LPS组与对照组比较差异极显著（P<0.01）,第 3天达高峰,增殖强度分别为 31.8％和 44. 7％。第 14天,ConA组增殖强度恢复正常,而 LPS组仍处于一定水平,与强化苗免疫后第4天试验鸡产生应答,第10天抗体效价几乎达高峰,并维持较长时间相一致,攻毒保护率随着抗体效价升高而提高。说明禽霍乱的免疫性质是以B细胞参与的体液免疫为主,T细胞起辅助作用。     

旋毛虫基因重组抗原对小鼠的免疫保护试验

分别用５μｇ和１５μｇ的旋毛虫基因重组抗原对小鼠进行腹腔注射免疫，结果于免疫后第４周小鼠体内的抗体效价明显上升，至第７周达到高峰，当每只鼠用９０条旋毛虫肌幼虫口服攻击后，抗体效价稍有下降，但到攻虫后的第５周基本回升至攻击前水平。     

雏鸡新城疫免疫后体液中Ig含量和HI滴度的动态变化

本研究对健康２周龄雏鸡ＮＤ免疫后血清、泪液、气管液、胆汁、肠液中ＩｇＭ，ＩｇＧ，ＩｇＡ含量和血清、泪液、气管液中ＨＩ抗体滴度进行了检测．结果表明，健康雏鸡１次ＮＤ免疫后其上述指标均升高，２次免疫后进一步升高．说明健康雏鸡ＮＤ免疫后，其全身和呼吸道、消化道局部都呈现明显的体液免疫应答，２次免疫后应答反应增强．     

实验性免疫应激雏鸡免疫器官抗体生成细胞的动态变化研究

本试验用新城疫I系苗肌肉注射 2周龄健康雏鸡 ,剂量是 2头份 /只 ,复制免疫应激模型。通过对免疫应激后第 1、 3、 5、 1 0、 1 5、 2 0d的法氏囊、胸腺、脾脏和盲肠扁桃体各器官组织病理学、活性B淋巴细胞和IgG、IgM抗体生成细胞的动态变化研究 ,结果发现 :(a)与对照组相比 ,各器官中浆细胞、巨噬细胞 (MΦ)、淋巴细胞数量增多 ,而且脾脏、盲肠扁桃体中的淋巴小结数增多。 (b)各免疫器官中活性B淋巴细胞在第 5天开始显著增多 ,并且在第 1 0天达到高峰 (P <0 0 1 )。 (c)各免疫器官中IgG抗体生成细胞在应激第 1 5天达到高峰 ,呈持续增长趋势 ;IgM抗体生成细胞法氏囊在第 5天 ,脾脏和盲肠、扁桃体在第 1 0天达到高峰 ,以后缓慢下降 ,且仍显著高于对照组(P <0 0 1 )。这表明在本试验的免疫应激条件下体液免疫功能未被抑制。     

鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的研制与鉴定

用经蔗糖密度梯度离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ，Ｍ４１）作为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过常规淋巴细胞杂交瘤技术产生杂交瘤细胞，经ＥＬＩＳＡ筛选，获得了４株能分泌特异性抗ＩＢＶ单克隆抗体的细胞系，分别命名为４ＡＣ１、４ＡＦ１、６ＤＨ８及２ＤＨ１０。４株单抗的亚类都属于ＩｇＧ２ｂ，在Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ试验中，４ＡＦ１、６ＤＨ８２株单抗特异性地识别ＩＢＶ的核衣壳蛋白（Ｎ）；经ＥＬＩＳＡ测定，各株单抗４０ｈ培养上清效价达１０－２～１０－４，第７天腹水效价达１０－５～１０－６，４ＡＦ１、６ＤＨ８与所试７个ＩＢＶ标准株及２个ＩＢＶ分离株都发生反应     

用ELISA法检测烟草种子带有赤星病菌（Alternaria alternata）的研究

用烟草赤星病菌的悬浮液免疫家兔，得到效价为１：６４Ｏ的抗血清，按硫酸该沉淀法和ＤＥＡＥ纤维素离子交换柱层析法提取抗体球蛋白ＩｇＧ，用ＥＬＩＳＡ间接法进行试验，结果表明：辣根过氧化物酶标记羊抗兔结合物的最适稀释度为１：１００，最适抗体球蛋白ＩｇＧ的浓度为４～６μｇ／ｍＬ。该抗体球蛋白ＩｇＧ对来自吉林省内的５个市县的８个烟草赤星病菌株全部呈阳性反应．而对Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｃｕｕｃｕｍｅｒｉｎａ和Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｐｏｒｒｉ则呈阴性反应，对种子分离得到的Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐ．和Ｐｈｙｌｌｏｓｔｉｃｔａｓｐ．等４种真菌及烟草野火病菌和Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｓｐ．均呈阴性反应，表明该抗体球蛋白ＩｇＧ的特异性很强。对７种不同浓度孢子悬液接种花器所获种子进行检测．均呈阳性反应，对来自３省６个品种１３份种子进行检测，８价呈阳性反应．５份呈阴性反应，与种子分高培养结果一致。用ＥＬＩＳＡ法检测烟草种子是否带有赤星病菌是一种快速而准确的方法。     

黄瓜花叶病毒（CMV）高效价抗血清的制备及其在ELISA中的应用

以提纯的ＣＭＶ作为抗原，经静脉注射，肌肉注射和足垫注射等对家兔进行免疫，获得高效价的抗血清（琼脂双扩散效价为１／２５６），在间接ＥＬＩＳＡ试验过程中，用ＰＢＳ＋０．０５％，ＴｒｉｔｏｎＸ－１００作为样本研磨液，用１：１６０００稀释度的ＣＭＶ抗血清或２μｇ／ｍｌＣＭＶ抗血清的ＩｇＧ作为第一抗体，用１：１０００稀释度的冻干辣根过氧化物酶标记的羊抗兔的ＩｇＧ作为第二抗体，以待测样本光密度值与阴性对照光密     

SPF雏鸡感染禽脑脊髓炎病毒内蒙株早期IgM与IgG变化规律的研究

本研究采用了病毒接种技术、普通病理学方法、酶联免疫吸附试验等方法,研究了不同日龄SPF雏鸡人工感染AEV-NH937株后的血清IgM、IgG的动态变化规律。实验结果显示IgM在攻毒后第3天达到峰值(0.57mg/m l),说明已有一部分B淋巴细胞分化为浆细胞并产生IgM;IgG从第10天开始呈上升趋势,在第20天达到峰值(5.05mg/m l);感染鸡外周血清中先出现IgM,后出现IgG,说明IgM为初级反应最早出现的免疫球蛋白,在感染早期起着先锋免疫作用。当IgG出现后,IgM的合成即受到抑制。抗AEV的血清IgM和IgG在时间上和强度上出现双峰现象。     

小鹅瘟病毒VP3真核表达质粒与弱毒疫苗诱导鹅体免疫应答的比较

 【目的】比较小鹅瘟病毒（GPV）VP3基因疫苗（pcDNA-GPV-VP3）和弱毒疫苗免疫鹅体内的免疫应答,以期为进一步研究和阐明pcDNA-GPV-VP3免疫发生机理、免疫持续期等提供基础数据。【方法】将pcDNA-GPV-VP3和小鹅瘟弱毒疫苗分别免疫30日龄四川白鹅,用免疫组织化学方法检测免疫鹅体内GPV抗原的分布,用淋巴细胞增殖实验和间接ELISA分别检测免疫鹅的细胞免疫水平和血清抗体滴度,比较GPV基因疫苗与弱毒疫苗诱导鹅体免疫应答的能力。【结果】①弱毒疫苗组于免疫鹅的心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、胸腺、哈氏腺、十二指肠、空肠、回肠、直肠、盲肠、胰腺、大脑及注射部位肌肉均中检测到GPV抗原;基因疫苗组于免疫鹅的心、十二指肠、空肠、回肠、直肠、盲肠及注射部位肌肉中检测到GPV抗原。②弱毒疫苗免疫雏鹅外周血T淋巴细胞14 d后对ConA的反应开始增强,35 d达到最高值后下降;基因疫苗免疫雏鹅外周血T淋巴细胞OD值先下降,14 d后开始上升并高于空白质粒对照鹅和PBS对照鹅,35 d时达最大值,以后又逐渐下降,第21-63天极显著（P＜0.01）高于PBS对照鹅和空白质粒对照鹅,第21-63 天时极显著（P＜0.01）高于弱毒疫苗免疫鹅。③弱毒疫苗免疫鹅血清抗体第3天开始高于PBS对照鹅,第28天达到最大值后逐渐下降;基因疫苗免疫鹅血清体从第14天开始高于PBS对照组,第28天达最大值,第21-217天显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）高于PBS和空白质粒对照鹅;基因疫苗免疫鹅血清抗体除第28天极显著(P＜0.01)高于GPV弱毒疫苗免疫鹅外,其余时间与弱毒疫苗免疫鹅差异不显著。【结论】pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅后能在免疫部位皮肤、心肌和各肠段中表达并能够诱导鹅体产生良好的细胞免疫和体液免疫,基因疫苗诱导鹅体产生免疫应答的能力优于弱毒疫苗,结果为阐述pcDNA-GPV-VP3的免疫机制和临床应用提供了数据资料。     

欧洲鳗鲡抗体生成规律的初步研究

用山羊IgG注射欧洲鳗鲡背部肌肉后,采用山羊IgG-琼脂糖亲和层析柱对欧鳗血清免疫球蛋白（IgM）进行分离纯化,并通过SDS-PAGE电泳对纯化后的IgM进行检测,同时制备兔抗欧鳗IgM血清,运用间接ELISA检测正常欧鳗血清（第0天）以及山羊IgG注射欧鳗后第7、14、21、28、35、42天的血清抗体水平,同时利用荧光定量PCR测定了第0天至第28天的欧鳗肾脏、脾脏和鳃中IgM基因表达水平变化.结果表明：纯化后的欧鳗IgM经SDS-PAGE检测含有一条分子质量约68 ku的重链,以及分子质量分别为26 ku和28 ku的两条轻链,获得的兔抗欧鳗IgM血清效价达1/51 200;欧鳗血清抗体水平在第28天达到峰值,脾脏IgM基因表达水平在第14天达到峰值,肾脏和鳃均在第21天达到峰值,血清抗体水平以及三种组织器官IgM基因表达水平的变化规律均为先升高、达到峰值后再降低.     

感染鸡贫血病毒雏鸡接种新城疫疫苗后免疫保护效应及其机理研究

 雏鸡 1日龄人工感染鸡贫血病毒 (CAV) ,于 8日龄接种 L asota疫苗 ,免疫后 2 8d进行新城疫强毒 (v NDV)攻击 ,以同龄未感染 CAV和用 L asota疫苗免疫并经 v NDV攻毒雏鸡为对照 ,检测其免疫保护效应 ,胸腺和脾脏 T细胞数量及 T细胞增殖反应 ,法氏囊和脾脏 Ig G+、Ig M+、Ig A+抗体生成细胞数量 ,血清免疫球蛋白 Ig G、Ig M、Ig A含量 ,血凝抑制抗体 (HI)滴度等。结果表明 ,CAV人工感染并用新城疫 (ND)疫苗免疫雏鸡经 v NDV攻击后的免疫保护率为 6 0 % ,对照组雏鸡 v NDV攻击后免疫保护率为 10 0 % ,胸腺和脾脏 T细胞数量和 T细胞增殖反应、法氏囊和脾脏Ig G+ 、Ig M+ 、Ig A+ 抗体生成细胞数量、血清 Ig G、Ig M、Ig A含量及 HI抗体滴度 ,均较对照组雏鸡显著降低。说明感染鸡贫血病毒雏鸡接种新城疫疫苗后的免疫保护效应及免疫功能明显降低。     

糖萜素对断乳兔血清免疫球蛋白相对含量的影响

选用体重相近、雌雄各半的40±2日龄普通级新西兰大白兔20只，随机分成试验Ⅰ组、试验Ⅱ组、试验Ⅲ组和对照组4组，每组5只。试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组分别给予浓度为3‰、5‰、7‰的糖萜素饮用水；于试验的0、7、14、21、28、35和49 d采血，检测血清中IgA、IgG、IgM三种免疫球蛋白相对含量。通过对断乳仔兔血清IgA、...     

鸡法氏囊中B淋巴细胞的发育

[目的]研究不同生长阶段正常鸡法氏囊内B淋巴细胞的动态变化规律。[方法]以海兰白鸡的200枚种蛋为试验材料,利用免疫组化法研究了IgM、IgG和IgA3种B淋巴细胞在法氏囊内的发育变化规律。[结果]在胚胎13日龄时,法氏囊内可检测到IgM＋和IgG＋2种B细胞,但IgM＋B细胞的数量显著高于IgG＋B细胞,而IgA＋B细胞在胚胎18日龄的法氏囊内才可检测到。随着日龄的增长,IgM＋、IgG＋、IgA＋3种B淋巴细胞整体变化呈上升趋势,并在21日龄时达到稳定。IgM＋、IgG＋、IgA＋3种B细胞分布部位相似,开始均出现在粘膜上皮内,随后分布在皮质中,而在成熟后主要分布在髓质中。[结论]在胚胎13日龄前,IgM＋B细胞可能在法氏囊内已经出现;鸡出壳后初期,法氏囊的体液免疫功能迅速增强,并在21日龄时达到成熟水平。     

高压静电场照射雏鸡外周血液免疫功能的变化及机理

应用免疫SPA菌体花环、间接ELISA、细胞培养技术和四甲基偶氮唑盐(MTT)测定法对高压静电场照射雏鸡血液的T、B细胞数量及其对ConA或PMA的增殖功能和IgG、IgM、IgA含量的动态变化进行了较全面系统的研究。结果发现,高压正静电场照射雏鸡血液的T、B细胞数量及其增殖功能、血清3种免疫球蛋白含量均明显高于高压负静电场照射雏鸡和相应对照雏鸡;而高压负静电场照射雏鸡血液的上述各项检测指标均不同程度的低于相应对照雏鸡。表明高压正静电场照射对雏鸡血液的免疫功能有促进作用,而高压负静电场照射可使雏鸡血液的免疫功能降低或减弱。     

雏鸡免疫柔嫩艾美耳球虫早熟株和毒株的细胞免疫反应

AA肉鸡雏鸡分别经口免疫柔嫩艾美耳球虫毒株早熟株，用免疫组化ABC法染色检测小肠、盲肠扁桃体、脾脏中CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞动态变化；用淋巴细胞转化实验MTT法检测T淋巴细胞活性。结果表明：球虫免疫鸡后，CD4^ T淋巴细胞在一次免疫后迅速增殖，第6天达到第一峰，免疫柔嫩艾美耳球虫毒株的鸡盲肠与脾脏中CD4^ T淋巴细胞占所有淋巴细胞百分率分别达到38％和44％，免疫早熟株的鸡盲肠与脾脏中CD4^ T淋巴细胞占所有淋巴细胞百分率分别达到36％和43％，而二次免疫后和对照相比很少有显著差异。CD8^ T淋巴细胞在一次免疫后比CD4^ T增殖速度慢，第9天达到第一峰。免疫柔嫩艾美耳球虫毒株的鸡在此日盲肠与脾脏中CD8^ T淋巴细胞占所有淋巴细胞百分率分别达到37％和47％，免疫早熟株的鸡在此日盲肠与脾脏中CD8^ T淋巴细胞占所有淋巴细胞百分率分别达到36％和48％，二次免疫后迅速大量增殖，免疫柔嫩艾美耳球虫毒株的鸡在二免后第2天盲肠与脾脏中CD8^ T淋巴细胞占所有淋巴细胞百分率分别达到39％和50％．免疫柔嫩艾美耳球虫早熟株的鸡在二免后第2天盲肠与脾脏中CD8^ T淋巴细胞占所有淋巴细胞百分率分别达到37％和50％。且CD8^ T淋巴细胞总体水平比CD4^ T淋巴细胞多。盲肠扁桃体中T细胞的增殖速度比其他组织更快。免疫早熟株的鸡与免疫毒株的鸡肠道黏膜中的CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞变化基本一致。一次免疫鸡比未免疫对照T淋巴细胞活性显著升高；进行二免的鸡免疫后第一、二、三周T淋巴细胞活性均比未进行二免的鸡显著升高；毒株免疫鸡T淋巴细胞活性大多与早熟株免疫鸡无8显著差异。     

小西葫芦花叶病毒(ZYMV)抗血清制备及检测技术研究

从小西葫芦黄化花叶病毒(ZYMV)免疫的母鸡蛋卵黄和兔抗血清中分别提取免疫球蛋白IgY和IgG,用多种血清学方法进行检测。结果表明,免疫鸡和兔25d后,鸡蛋卵黄IgY和兔抗血清的效价分别达到1/64和1/512。在琼脂扩散试验中,当抗体稀释28倍时,与抗原反应无明显沉淀线。在胶乳凝集试验中,抗体稀释210倍时,与抗原反应无明显凝集物。ELISA法以辣根过氧化酶标记抗体IgY和IgG,用双抗夹心法成功地检测出了ZYMV,当抗体稀释106倍时,与抗原反应仍呈阳性。免疫电镜方法检测ZYMV,较一般血清学方法可多捕捉50倍的病毒颗粒。     

Combined Application of Xymedon Hydrochloride with Rabies Vaccine on the Background of Immunosupression

The effect of xymedon hydrochloride on the immune response of rabbits immunized with the rabies vaccine prepared from strain Shchelkovo-51 under the influence of immunosupression induced by cyclophosphamide has been studied. Xymedon hydrochloride was injected at a dose of 5 mg kg body weight in a volume of 1 cm³ twice a day in combination with the rabies vaccine. In addition, the immune response higher level of 1: 12800 was observed in the immunosupressed animals compared to 1: 6400 in the control animals immunized without the immunostimulant. At 6 months after vaccination, the antibody concentration of 1: 93.75 ± 44.68 remaining below the protective level was recorded, which indicated the weakness of the humoral link in the immune system. The counts of T- lymphocytes, B-lymphocytes, T-helpers, and T-suppressors in the blood of the immunesuppressed rabbits immunized with the rabies vaccine in combination with xymedon hydrochloride increased 3.2-fold, 1.9-fold, 7.7-fold, and 22.0-fold, respectively, when compared with the reference values. Therefore, the protective effect was followed by increasing the antigeninduced and spontaneuous lymphocyte proliferation, the numbers of T-helper cells and T lymphocytes exhibiting the cytotoxic and suppressive activity, and the virus-specific neutralizing antibody titers in cases wherein the Shchelkovo-51 vaccine in combination with xymedon hydrochloride was administered. It should be reasonable to apply the two-step rabies vaccination with the use of the immunostimulant, in particular, xymedon hydrochloride, to ensure the adequate immune response in immunodeficient animals.