鹿茸顶端组织IGF1R基因的部分cDNA克隆及差异表达

为了研究梅花鹿鹿茸顶端组织IGF1R基因的表达水平,采用TRIzoL试剂分别提取鹿茸真皮层、间充质层、前软骨层和软骨层总RNA,以逆转录酶AMV反转录合成cDNA,根据GenBank已发表的相关序列设计梅花鹿IGF1R基因特异引物并克隆IGF1R基因,最后利用相对荧光定量Real-time PCR法检测IGF1R基因在...     

鹿茸不同生长期MALAT1基因的差异表达

以不同生长期的鹿茸尖端组织为材料,采用mRNA差异显示技术检测不同生长期鹿茸尖端间充质组织的差异表达基因。对其中一条差异表达片段进行克隆测序分析,得到400 bp左右的片段,与野猪的非编码基因MALAT1有高度同源性,同源性为90%。进一步实时荧光定量RT-PCR鉴定发现,该基因在鹿茸生长发育的前期和中期表达量高于后期,该基因在鹿茸快速生长期的上调表达暗示其在鹿茸生长发育过程中发挥作用,是鹿茸生长发育相关基因的候选基因。     

高效液相色谱法测定塔里木马鹿茸中的雌性激素

用甲醇-丙酮等体积混合液作萃取剂,采用高效液相色谱法同时测定塔里木马鹿鹿茸不同生长期茸(毛桃茸、头茬茸、二茬茸)、新西兰赤鹿茸、加拿大白眉鹿茸中4-壬基酚、双酚A、17α-乙烃基雌二醇、雌三醇、17α-雌二醇、17β-雌二醇等雌性激素的含量,并通过与国外鹿茸激素含量水平的比较对塔里木马鹿鹿茸的品质作出相应评价.     

塔里木马鹿茸HGF基因部分外显子克隆及表达特征

试验旨在对塔里木马鹿(Cervus elaphus yarkandensis)鹿茸肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor, HGF)基因进行部分外显子克隆、序列分析及组织表达研究。试验采用改良的Trizol法分别提取茸皮组织、间充质组织、软骨组织、骨组织的总RNA;通过RT-PCR扩增得到HGF基因,回收纯化后,基因与pMD19-T载体连接,转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中,鉴定后送测序;利用免疫组化法确定HGF在塔里木马鹿鹿茸顶端组织茸皮、间充质、软骨、骨组织中的表达特征。结果,获得塔里木马鹿茸HGF基因部分外显子大小为349 bp;同源性序列比对结果发现塔里木马鹿HGF与瘤牛、普通牛、白尾鹿、山羊相似性较高;免疫组化试验表明,塔里木马鹿HGF基因在茸皮组织和软骨组织中阳性反应明显,间充质组织和骨组织中阳性反应微弱。本结果为进一步研究HGF基因在塔里木马鹿茸生长中的调控作用提供基础试验数据。     

梅花鹿VEGF基因的克隆及其在鹿茸顶端组织的表达

为了得到VEGF成熟肽基因,利用Trizol试剂法提取鹿茸顶端组织总RNA,反转录形成c DNA。根据Gen Bank已发表的相关基因序列设计1对特异性引物,并克隆VEGF成熟肽基因,再利用免疫组化法检测VEGF基因在鹿茸顶端不同组织的表达水平。结果表明:成功获得梅花鹿VEGF成熟肽基因,该基因长495 bp,共编码164个氨基酸;经Blast同源性分析,结果显示与牛、羊、猪的核苷酸序列的同源性分别为98.79%、97.98%、96.36%;经DNAMAN软件比对,其氨基酸序列的同源性分别为98.78%、97.56%、96.95%。免疫组化法结果显示,VEGF在茸皮层、间充质层和软骨层中均有表达,其中在软骨层中表达水平较高。     

瘦蛋白受体基因在肉鸡不同组织中的表达差异

为了探讨瘦蛋白受体(OBR)基因在肉鸡不同组织中的表达差异,采用半定量RT-PCR和Northern blot方法检测OBR基因在不同发育阶段的肉鸡高脂系公鸡多种组织中的表达情况.结果表明:OBR基因在所检测的8种组织中均有表达,且表达量存在差异,其中大脑、心脏中的表达量高,并显著高于其他组织(p<0.05),腿肌和胸肌中的表达量较低.     

马立克氏病病毒gE基因在大肠杆菌中的融合表达

以马立克氏病病毒(MDV)特超强毒648株基因组DNA为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)方法扩增出gE基因。将其插入到表达性质粒pGEX-6p-1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游,转化大肠杆菌,经筛选、鉴定获得重组质粒,测序结果证明重组质粒的阅读框架不变,将其命名为pG648E。经SDS-PAGE电泳及Westernblotting分析,在82ku有GST-gE的蛋白带,重组质粒在大肠杆菌BL21中以融合蛋白的形式表达。结果表明:MDVgE基因原核表达成功。     

梅花鹿IGF1全长cDNA克隆及在鹿茸组织的表达

为了检测梅花鹿鹿茸组织IGF1基因的mRNA表达水平,利用TRIzol试剂法分别提取鹿茸真皮、间充质、前软骨和软骨组织总RNA,逆转录合成cDNA.根据GenBank已发表的相关序列设计梅花鹿IGFI基因特异引物并克隆IGFI基因,将IGF1基因DNA序列递交GenBank,并利用相对荧光定量Real-time PCR...     

梅花鹿鹿茸组织Anxa-1基因cDNA克隆及表达

从梅花鹿(Cervus nippon)鹿茸间充质中成功克隆出包括膜联蛋白A1(Anxa-1)基因全部编码区的c DNA序列,并结合生物学信息方法及实时荧光定量技术对该基因的氨基酸序列及不同生长时期的表达情况进行了分析。结果表明:Anxa-1基因编码346个氨基酸。经生物学信息分析,该基因编码蛋白为稳定蛋白,不具备信号肽,相对分子质量为38 830.4,理论等电点为6.17,一级结构中亮氨酸占最大比例(10.4%)。同源序列比对及系统进化树分析表明,梅花鹿Anxa-1氨基酸序列与藏羚羊(Pantholops hodgsonii)、绵羊(Ovis aries)、山羊(Capra hircus)和水牛(Bubalus bubalis)相似性较高。实时荧光定量RT-PCR分析表明,Anxa-1基因在不同生长时期鹿茸顶端间充质表达存在差异,生长前期的表达量高于中期与后期。     

鲨烯环氧酶基因的克隆及其在人参根组织中的表达

对人参根组织中的鲨烯环氧酶基因进行了克隆与序列分析,并利用相对荧光定量Real-time PCR法检测了鲨烯环氧酶基因不同年生人参根组织中的表达水平.结果表明:克隆人参根中鲨烯环氧酶基因全长编码区cDNA为1 611 bp,编码537aa长的多肽,其核苷酸和氨基酸序列与GenBank中人参鲨烯环氧酶基因序列(登录号:AB122078.1)对比,同源性分别为99.75％和99.81％.相对荧光定量PCR差异分析发现鲨烯环氧酶基因在一年、三年、四年、五年生人参根组织中均有表达,其中在五年生人参根中表达水平最高.     

鹿茸顶端组织GHR基因的cDNA克隆及组织定位

【目的】检测鹿茸顶端组织GHR基因的表达,为鹿茸再生的分子机理研究提供理论依据。【方法】根据GenBank已发表的牛、山羊和绵羊生长激素受体(GHR)基因序列,用CLUSTAL W软件进行同源性分析,在保守序列设计克隆鹿GHR基因编码序列的引物。以3~4岁健康鹿生长30 d的鹿茸顶端组织提取的总RNA为模板,利用RT-PCR技术克隆GHR基因的cDNA序列;并用原位杂交技术对GHR基因在鹿茸顶端进行组织定位。【结果】成功克隆到了1 967 bp的序列(GenBank登陆号为EU381142),该序列包含GHR基因的全部编码序列。鹿GHR基因与牛、羊、人GHR核苷酸同源性分别为97%,97%和80%,GHR蛋白氨基酸序列同源性分别为97.9%,97.6%和77.3%。杂交结果显示,在皮肤层、间叶细胞层、软骨膜层和软骨层的阳性组均有蓝色杂交信号。【结论】利用RT-PCR技术和原位杂交技术在鹿茸顶端皮肤层、间叶细胞层、软骨膜层和软骨层均检测到GHR的表达。     

鲜马鹿茸不同部位多肽的提取及含量比较

采用醋酸溶液和乙醇提取了6支鲜二杠马鹿茸的主干顶部(未骨化部分)、中部(部分骨化)、根部(大部分骨化)3个部位的多肽,进行了多肤的SDS-PAGE分析和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、表皮生长因子(EGF)、神经生长因子(NGF)的Western-blotting分析。采用考马斯亮蓝G-250法进行了马鹿茸不同部位总多肽定量,RIA法测定了IGF-1含量,ELISA法比较了不同部位EGF、NGF的OD值。结果:SDS-PAGE表明鹿茸酸醇提取多肽为一系列分子量低于17kD的混合物,Western-botting证明其含有IGF-1、EGF、NGF等生长因子。定量分析表明:马鹿茸顶部、中部、根部总多肽、IGF-1及醇提多肽中IGF-1含量均差异显著(P<0.05),EGF、NGF ELISA检测OD值差异显著(P<0.05),均从顶部到根部递减。     

鹿茸多肽及其生长因子制备工艺的研究进展

鹿茸是我国传统中药材,鹿茸多肽及其生长因子具有重要的生理功能。本文综述了鹿茸多肽及其生长因子的提取、分离、纯化以及文库构建表达的应用前景。     

神经介素B及其受体在不同发育阶段山羊睾丸组织中的差异表达

[目的]本试验旨在探究神经介素B(NMB)及其受体NMBR[还包括胃泌素释放肽受体(GRPR)和蛙皮素受体(BRS3)]在山羊不同发育阶段睾丸组织中的差异表达,为解析哺乳动物睾丸发育及功能调节机制提供参考。[方法]选取系谱清晰和体况良好的雄性山羊12只(3月龄和9月龄,各6只)进行阉割并采集睾丸组织,在克隆NMB及其受体基因与分析序列的基础上,采用免疫组化技术检测NMB及其受体在睾丸组织中的表达定位,利用RT-qPCR和Western blot检测NMB及其受体在不同发育阶段山羊睾丸组织中的表达变化。[结果]NMB及其受体基因与绵羊和牛的进化关系最近,NMB及其受体基因编码区的核苷酸序列与牛和绵羊的同源性达96%以上,结构分析发现NMBR、GRPR和BRS3均属于7次跨膜受体。NMB及其受体在3月龄和9月龄山羊睾丸组织中广泛表达,其中在间质细胞、肌样细胞和精子细胞中呈高表达。与3月龄山羊相比,9月龄山羊睾丸组织中NMB与GRPR的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05),而NMBR与BRS3的mRNA和蛋白表达量显著增加(P<0.05)。[结论]NMB及其受体可能参与山...     

非洲马瘟病毒VP7基因的克隆与表达

为获得非洲马瘟病毒VP7蛋白,以用于制备AHS血清学诊断试剂并为AHS新型疫苗的构建奠定基础,笔者采用原核表达系统表达VP7蛋白。在GeneBank中查找非洲马瘟病毒VP7基因序列,人工合成VP7基因,将VP7基因片段克隆插入pBAD/Thio-TOPO表达载体,将重组质粒转入大肠杆菌TOP10。经测序鉴定,筛选获得VP7基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆,经L-Arabinose诱导表达VP7融合蛋白抗原。SDS-PAGE分析表明以终浓度为0.2%的L-阿拉伯糖进行诱导,4h后表达可达到高峰,融合蛋白质量约54.72kDa。Westernblotting检测和间接ELISA表明诱导表达的融合蛋白能与非洲马瘟病毒VP7单克隆抗体发生特异性反应,说明蛋白有特异的免疫学活性。     

鹅褪黑素受体Mel1c基因的组织表达特征

采用qRT-PCR等技术探究了Mel1c在鹅不同器官组织(心脏、肝脏、肾脏、肺脏、胰脏、脾脏、卵巢、大脑、胸肌及F1、F2、F3、F4、F5卵泡)中的表达分布。结果表明,Mel1c mRNA在鹅的心脏、肝脏、肾脏、肺脏、胰脏、脾脏、卵巢、大脑、胸肌及各级卵泡中均有表达;其表达量在各组织中存在差异,且以胰脏、脾脏、肾脏、卵巢中表达量较高,肺脏次之,心脏、胸肌、大脑水平相当,肝脏中最少。而在卵泡组织中,F4级卵泡中最高,其次为F5级卵泡,F1级卵泡中表达量最少。Mel1c在鹅各组织中普遍表达分布,进一步说明了褪黑素在机体中有着广泛的生物学作用,特别是对卵泡发育的影响。     

鹿茸发育的组织来源及其相互作用机制研究进展

本综述介绍了鹿茸发育的组织来源及其相互作用机制的研究进展,阐明了鹿茸发育的组织细胞特性,进一步分析了鹿茸发育机制中待解决的问题。     

鹿茸发生和再生的组织基础及其研究进展

通过对鹿茸生长发育机理研究的整理和总结,阐述了鹿茸发生和再生过程中的组织变化,特别是关于生茸区骨膜和角柄骨膜的研究,取得了重要的成果．生茸区骨膜切除后不能发生角柄和鹿茸,而被移植了生茸区骨膜的位置则生长角柄和鹿茸,证明了生茸区骨膜是鹿茸发生的组织基础,确定了生茸区骨膜中存在鹿茸再生干细胞,为进一步研究鹿茸的生长发育机理提供了重要的依据和参考．     

7个基因在小尾寒羊性腺轴相关组织中的表达差异分析

[目的]探究绵羊多羔性状候选基因CLSTN2、CCNB2、SRD5A2、HBEGF、FGFR1、GRIA2和FTH1在小尾寒羊性腺轴7种组织(大脑、小脑、下丘脑、垂体、子宫、卵巢、输卵管)中的表达情况,为阐明绵羊高繁殖力分子机理提供参考.[方法]以FecB BB型和++型小尾寒羊为研究对象,采用实时荧光定量PCR方法检测7个基因在性腺轴相关组织中的表达差异.[结果]CLSTN2基因在++型小尾寒羊卵巢中的表达量显著高于BB型小尾寒羊(P<0.05),SRD5A2基因在BB型小尾寒羊卵巢中的表达量显著高于++型小尾寒羊(P<0.05),FG-FR1和FTH1基因在++型小尾寒羊子宫中的表达量显著高于BB型小尾寒羊(P<0.05),CCNB2、HBEGF和GRIA2基因在++型和BB型小尾寒羊性腺轴各组织中的表达量差异不显著(P>0.05).[结论]CLSTN2、FGFR1和SRD5A2基因对小尾寒羊繁殖力具有一定的调控作用,其中SRD5A2基因对小尾寒羊的多羔性状具有一定的正向调节功能,而CLSTN2和FGFR1基因则呈现相反的调控作用.     

仔猪Galectin-9基因在断乳前、后胃肠道组织中的表达差异

依据电子延伸序列克隆猪Galectin-9基因,研究其在仔猪消化道中的分布,并采用荧光定量PCR检测该基因在断乳前、后仔猪胃肠道组织中的表达差异;结果:成功克隆出了猪Galectin-9基因,并被GenBank收录(Accession. FJ428535),该基因在仔猪消化道中广泛分布,与断乳前相比,断乳后Galectin-9的mRNA在胃、空肠组织中的表达量显著下调(P<0.05),而在十二指肠、回肠、盲肠和结肠中的表达与对照组相比差异不显著(P>0.05)。