杜仲愈伤组织诱导和植株再生体系的建立

【目的】研究在BA、NAA、IBA、2,4-D等激素作用下,杜仲愈伤组织诱导、愈伤组织诱导丛生芽及丛生芽诱导生根各阶段的最佳培养基配方,建立杜仲植株再生体系,为杜仲转基因研究提供基础材料。【方法】以杜仲成熟胚、幼嫩胚、叶片和茎段为外植体,使用BA、NAA、IBA、2,4-D等激素,配制成不同质量浓度的培养基,进行杜仲愈伤组织诱导,同时分析愈伤组织诱导丛生芽和丛生芽诱导生根培养基的最佳配方,建立杜仲植株的再生体系。【结果】杜仲愈伤组织诱导的培养基分别为:成熟胚MS+BA 2.0mg/L+NAA 2.5mg/L,诱导率77.8%;幼嫩胚MS+BA 0.5mg/L+2,4-D 2.0mg/L,诱导率88.9%;叶片MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L,诱导率100%;茎段MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,诱导率为100%。愈伤组织诱导不定芽形成的适宜培养基为MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L,不定芽诱导率为88.9%,增殖系数为3±1;杜仲在1/4MS的基本培养基中生根最好,生根率达80%,激素的存在反而会抑制生根。【结论】杜仲成熟胚、幼嫩胚、叶片和茎段均可通过愈伤组织途径诱导不定芽的形成,并诱导生根,建立杜仲愈伤组织再生体系,但不定芽的增殖系数较低。     

鸡树条荚蒾组培初代培养技术初探

为了快速大量得到鸡树条荚蒾苗木,尝试采用组培方法进行繁育,该试验以茎尖为外植体,研究了初代培养阶段不同培养基配方对其愈伤组织诱导以及不定芽诱导的影响。结果得出鸡树条荚蒾茎尖离体培养的培养方案为:选用带芽茎段经过消毒后,切割芽转入MS+KT0.6 mg/L愈伤组织诱导培养基上,产生愈伤组织后,将愈伤组织切块转入MS+KT0.5mg/L+IBA 0.2 mg/L或MS+KT1.0 mg/L+IBA0.2 mg/L的芽诱导培养基上,待产生大量不定芽时,以这些不定芽作为中间繁殖体,再进一步扩繁、生根,形成再生苗木。     

樟树胚性愈伤组织诱导与体胚发生研究

以樟树未成熟合子胚为外植体,探讨了外植体取材时间、植物生长调节剂配比、附加有机物等因素对胚性愈伤组织诱导、增殖培养及体细胞胚胎发生的影响。结果表明:不同采集时期的合子胚愈伤组织诱导率差异显著,只有心形胚时期的合子胚才能诱导胚性愈伤组织;在改良MS+4.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA培养基初诱导情况下,后接入改良MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D培养基中,胚性愈伤组织诱导率可达77.78%;外加添加200 mg/L水解络蛋白和200 mg/L环糊精可保持胚性愈伤组织增殖和体细胞胚诱导,胚性愈伤组织增殖系数达3.86,每克愈伤组织平均分化116.67个体细胞胚,胚性愈伤组织继代周期以25～30 d为宜。在改良MS+200 mg/L环糊精+1.0 mg/L ABA+0.5 mg/L IAA中可以促使体胚成熟萌发,萌发率可达52.78%。将萌发的芽体转接到MS+0.1 mg/L BA+0.5 mg/L IAA+0.2 g/L AC生根培养可获得完整植株。     

大丽菊花园奇迹茎尖组培再生体系的建立

以大丽菊花园奇迹茎尖为外植体进行组织培养,灭菌用8ml1%升汞和2ml次氯酸钠,探讨培养基、生长素、细胞分裂素等因素对其离体再生的影响,结果表明:茎尖诱导愈伤组织最佳培养基为MS+BA1.0mg/L;增殖最好培养基为MS+BA 0.3mg/L,诱导所得的愈伤组织在分化培养基上可以分化大量再生芽;用MS+NAA0.2mg/L+IAA0.3mg/L作为生根培养基培养15d,生根率可以达到96%;生根苗移栽后成活率为92%。     

新梨七号茎段组织培养再生植株的研究

从植物生长调节物质的不同配比、不同部位诱导不定芽以及炼苗移栽等几个方面对新梨七号离体茎段再生进行研究,获得茎段产生愈伤组织及不定芽再生的适宜培养基,分析以上因素对新梨七号再生体系建立的影响。结果表明,新梨七号的茎段最适宜愈伤诱导培养基为MS+2,4-D 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L,愈伤组织诱导率为100%;茎段诱导不定芽的最佳培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L,诱导率为95%,增殖倍数为7.29;最适宜不定芽生根培养基为1/2MS+IBA 2.5mg/L+蔗糖15g/L,生根率为90%;封口炼苗时间14d为最好,移栽时间7月最佳。     

拂子茅组培再生体系的建立

为建立拂子茅植株再生体系,以茎尖为外植体,对拂子茅花叶灭菌方式以及愈伤组织诱导和植株再生培养条件进行分析与筛选。结果表明:用75%乙醇灭菌30 s,再用0.1%升汞灭菌12 min,灭菌效果最佳,去污染率达到90%;在MS+6-BA 0.2 mg/L+2,4-D 4 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L的培养基上进行愈伤组织诱导,诱导率达33.4%;用MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L培养基诱导不定芽再生,诱导率最高、可达76.9%;用MS基本培养基诱导不定芽生根,生根率达到100%。     

豌豆离体再生体系建立及遗传稳定性研究

【目的】提高速豌豆诱伤组织和不定芽的诱导率,建立豌豆高效离体再生体系.【方法】以半无叶型豌豆品种‘陇豌1号’和蔓生型豌豆品种‘S3008’的茎段为外植体,研究不同基因型、培养基激素配比对愈伤组织诱导、分化的影响.【结果】‘陇豌1号’茎段愈伤组织诱导率和分化率较高,分别达到88.7%和76.7%,‘S3008’茎段最高愈伤组织诱导率和分化率分别为86.7%和74.7%.诱导愈伤组织最适培养基是MS+2mg/L TDZ+0.2mg/L 2,4-D;诱导不定芽形成的最适培养基为MS+2mg/L TDZ+1mg/L 6-BA,平均不定芽数为4.3;在不定芽诱导生根培养基(1/2MS+20g/L蔗糖+1.5mg/L ABT)上,生根率为74.0%,移栽后再生植株成活率达86.0%.两个豌豆品种都能得到再生植株且繁殖系数高.【结论】本培养体系适宜豌豆离体再生.通过染色体分析,再生植株染色体数和供体亲本材料一致,初步表明再生植株遗传稳定.     

桃遗传转化再生体系的建立与优化

以桃不同胚龄胚为外植体,建立桃遗传转化再生体系.结果表明:花后50 d的胚均能诱导出愈伤组织,并可分化出不定芽.胚愈伤组织诱导培养基以MS+6-BA0.25 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L的效果最好,平均诱导率可达99.8%.将胚愈伤组织接种在培养基MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L上,愈伤组织转变为致密型,不定芽分化率为37.5%.将不定芽用100 mg/LIBA浸蘸其基部转移到不含激素的1/2 MS培养基中诱导生根,生根率为82.0%.花后75d的成熟胚不定芽的直接诱导率达到96.1%.     

亳菊茎尖愈伤组织诱导与再生植株的研究

[目的]研究亳菊茎尖组织培养技术,为亳菊产业化生产提供科学依据。[方法]在不同的MS培养基中,考察不同浓度的6-BA、NAA对亳菊茎尖愈伤组织、丛生芽、再生植株诱导的影响。[结果]茎尖诱导愈伤组织的最佳培养基为MS＋1.00 mg/L6-BA＋0.30mg/L NAA,以MS＋0.50 mg/L6-BA＋0.10 mg/L NAA为芽的诱导培养基,芽诱导率达100%;最佳的生根培养基为1/2MS＋0.30 mg/L IBA。[结论]通过亳菊茎尖愈伤组织培养技术,可以达到快速繁殖的目的。     

木薯品种新选048体细胞胚发生及植株再生初步研究

[目的]初步探讨木薯品种新选048体细胞胚发生及植株再生的影响因素,为木薯遗传转化和品种改良奠定基础.[方法]以不同外植体(未完全张开叶、侧芽茎尖、幼嫩叶柄及完全张开叶的顶部、基部、叶缘、中部和全叶)为材料,对木薯体细胞胚发生和愈伤组织生长进行观察,并探讨6-BA(0.01、0.05、0.10、0.50、1.00 mg/L)对体细胞胚植株再生的影响.[结果]不同木薯外植体均能诱导愈伤组织,愈伤组织诱导率为48.30%~100.00%,但产生的愈伤组织生长状况表现不同.在MS+12.0 mg/L毒莠定(picloram)+20.0 g/L蔗糖+6.5 g/L琼脂培养基中,侧芽茎尖诱导获得的初生体细胞胚诱导率最高,达22.22%,平均产胚量为5.85个;而叶柄、未完全张开叶片或全张开叶片不同部位均不利于诱导体细胞胚,其诱导率极低,为0~5.00%.随着MS培养基中6-BA用量的增加,体细胞胚的成熟率不断增加(81.3%~100.0%),而在MS+0.01 mg/L 6-BA+0.02 mg/L NAA培养基中的植株再生率呈先升高后下降的变化趋势;当6-BA用量为0.10 mg/L时,植株再生率最高,为21.8%,且子叶生长正常.在1/3MS+0.02 mg/L NAA生根培养基中,再生植株均能诱导生根;在沙与表土混合基质中生根植株均能正常生长.[结论]新选048可以通过体细胞胚发生途径获得再生植株,但其发生率和再生率较低.     

雪菊的组织培养研究

以雪菊带芽茎段、茎尖、叶片为外植体以MS为培养基添加不同浓度6BA和NAA进行组织培养实验,结果表明适合带芽茎段愈伤组织诱导的培养基为MS＋6BA1.0mg/L＋XAA0.3mg/L;适合茎尖愈伤组织诱导的培养基为MS＋6BA1.0mg/L＋XAA0.1mg/L;适合叶片愈伤组织诱导的培养基为MS＋6BA3.0mg/L＋NAA0.3mg/L,适合雪菊愈伤组织增殖和不定芽诱导的培养基为MS＋6BA2.0mg/L＋NAA0.3mg/L;适合雪菊试管苗生根的培养基为1/2MS＋6BA0.3mg/L＋XAA0.03mg/L,蔗糖减半,以雪菊无菌苗的带芽茎段、茎尖和叶片为外植体成功地诱导出了愈伤组织,其中带芽茎段愈伤组织诱导率最高时间最短效果最好茎尖次之叶片最差.     

钙果愈伤组织诱导和植株再生的研究

对钙果愈伤组织的诱导及植株再生的研究结果表明,在MS KT0.3 mg/L NAA0.5 mg/L的培养基中,叶片愈伤组织诱导率达到98.7%;叶片比茎段更适宜作为诱导愈伤组织的外植体,其诱导率比茎段为外植体时高12.7%,而且形成的愈伤组织致密、色泽正常、表面突起均一;愈伤组织分化为芽时,MS 6-BA0.1 mg/L IAA1.5 mg/L培养基的效果最好,分化率达到96%,平均芽数为3.38;不定芽在生根培养基1/2MS IAA0.5 mg/L上,生根率达到70%,平均根长为4.03 cm,平均根数达到5.90。移栽时选用腐殖土为基质,小苗成活率达88%。     

不同品种软枣猕猴桃愈伤组织诱导及植株再生

以软枣猕猴桃(Actinidia arguta)品种"魁绿"和"佳绿"的无芽茎段、叶片、叶柄为外植体,研究外植体及生长调节剂组合对软枣猕猴桃愈伤组织诱导及植株再生的影响,从而建立"魁绿"和"佳绿"的离体再生体系。结果表明:6-BA对软枣猕猴桃愈伤组织的诱导效果好于KT,"魁绿"和"佳绿"叶片分别在MS+2,4-D0.5 mg/L+6-BA 2 mg/L和MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 1 mg/L的培养基上愈伤诱导率最高,分别为93.3%和96.2%。在不定芽再生培养过程中,6-BA和TDZ不能诱导不定芽发生,而ZT对不定芽的分化具有较好的诱导作用;"魁绿""佳绿"均在培养基MS+NAA 0.05 mg/L+ZT 3 mg/L上不定芽分化率最高,分别为72.0%、37.8%。不同品种及不同外植体的愈伤组织诱导率和不定芽再生率均存在差异,"魁绿"的不定芽分化率明显高于"佳绿";无芽茎段和叶片的愈伤组织诱导率均90%;叶片的不定芽分化率最高,显著高于茎段和叶柄。再生苗在培养基1/2 MS+IBA 0.1 mg/L上的生根率为97%。     

野生枸杞茎尖分生组织再生研究

以茎尖分生组织为外植体,在MS附加各种不同浓度激素组合的培养基上诱导丛生芽,进而诱导生根,建立了枸杞茎尖分生组织高效再生快繁体系.IAA 6-BA激素组合较IAA KT组合的直接萌发率和成苗率高.分别达94.0%,81.3%,最高组合为MS IAA 0.10 mg/L 6-BA 1.00 mg/L;MS IAA 0.50 mg/L 6-BA0.10 mg/L适于丛生芽的诱导及增殖,增殖倍数达7.5;1/2MS IAA 1.50 mg/L有利于生根,生根率最高达100%.     

凤尾兰的组织培养

以凤尾兰(YuccagloriosaLinnaeus)的茎尖、幼嫩茎段及嫩叶为外植体进行组织培养。结果表明以嫩叶为外植体的愈伤组织诱导率最高,由茎段诱导的愈伤组织继代增殖最好,由茎尖诱导的愈伤组织诱导不定芽表现最佳。筛选出最佳初代培养基MS 6-BA3.0mg/L NAA0.2mg/L;愈伤组织增殖培养基MS 6-BA8.0mg/L NAA0.1mg/L;不定芽诱导培养基为MS 6-BA5.0mg/L KT1.0mg/L;不定芽增殖培养基为MS 6-BA4.0mg/L NAA0.05mg/L 椰子水100mL/L;生根培养基为1/2MS NAA0.2mg/L。     

秘鲁番茄高效再生体系的研究

以秘鲁番茄的叶片和茎段为外植体,研究不同外植体种类、激素配比对秘鲁番茄愈伤组织诱导、分化和不定芽生根的影响,以期建立秘鲁番茄组织培养高效再生体系。结果表明:秘鲁番茄的叶片较茎段更适宜愈伤组织诱导与分化,以叶片为外植体时,最佳愈伤组织诱导培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.2 mg/L IAA,愈伤组织诱导率高达100.0%;愈伤组织分化的最佳培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.2 mg/L IAA,不定芽的分化率高达92.4%。以茎段为外植体时,最佳诱导愈伤培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.1 mg/L IAA,愈伤组织诱导率高达95.8%;愈伤组织分化的最佳培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.2 mg/L IAA,不定芽的分化率高达86.5%。不定芽最适宜的生根培养基为MS+1.0 mg/L NAA,生根率达100.0%。采用草炭土+珍珠岩(体积比1∶1)的混合基质作为移栽基质,移栽成活率可达90%以上。     

辣木离体再生体系的建立

以辣木种子为外植体,诱导获得无菌苗,然后通过用无菌苗的嫩茎诱导愈伤组织分化不定芽,再将不定芽诱导生根,获得完整植株,建立辣木的离体再生体系。结果表明,适合辣木种子诱导无菌苗的培养基为MS_0,诱导率达95%;适合无菌苗茎段诱导愈伤组织的培养基为MS+2,4-D 0.8 mg/L+KT 0.2 mg/L,诱导率达87.03%;适合愈伤组织分化不定芽及不定芽增殖的培养基为改良MS+6-BA0.6 mg/L+IAA 0.2 mg/L,芽分化率达83.33%,芽增殖系数达4.2;适合不定芽生根的培养基为1/3MS+IBA0.5 mg/L+NAA0.2 mg/L,生根率达92.7%,平均根数达5.78。     

野葛(Pueraria lobata)愈伤组织诱导及组织培养

以野葛茎尖分生组织为外植体,通过不同激素与MS培养基配比试验,筛选出野葛茎尖分生组织愈伤组织诱导与植株再生的最适培养基,建立野葛植株再生体系.试验结果表明:茎尖分生组织在MS+2,4-D 0.5 mg/L培养基上启动诱导愈伤组织,再转移到MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L继续诱导,愈伤组织诱导率高,繁殖能力旺盛.在MS+6-BA 1 mg/L培养基上愈伤组织分化率100%,生长能力较强.在MS+NAA 0.1 mg/L培养基上,诱导生根率达到60%.     

野葛(Pueraria lobata)愈伤组织诱导及组织培养

以野葛茎尖分生组织为外植体,通过不同激素与MS培养基配比试验,筛选出野葛茎尖分生组织愈伤组织诱导与植株再生的最适培养基,建立野葛植株再生体系。试验结果表明:茎尖分生组织在MS 2,4-D 0.5 mg/L培养基上启动诱导愈伤组织,再转移到MS 6-BA 0.5 mg/L NAA 0.5 mg/L继续诱导,愈伤组织诱导率高,繁殖能力旺盛。在MS 6-BA 1 mg/L培养基上愈伤组织分化率100%,生长能力较强。在MS NAA 0.1 mg/L培养基上,诱导生根率达到60%。     

荔枝愈伤组织诱导及其体细胞胚胎发生研究初报

分别取元红荔枝盛花后45d未败育的幼胚、一个月龄的实生苗叶片、成龄树叶片、未受精子房接种在愈伤组织诱导培养基上,均能诱导出愈伤组织,但仅有幼胚能诱导出胚性愈伤组织。幼胚在含5% 蔗糖的MS基本培养基附加2,4-D2mg/L+水解乳蛋白500mg/L的培养基上诱导率最高。幼胚愈伤组织在含5% 蔗糖的基本培养基附加10% 椰乳的培养基上,白色胚状体发生率最高。胚状体易提前萌发,仅抽生根不抽生茎。健壮的未生根胚状体在含5% 蔗糖的培养基附加BA1mg/L的培养基上生根率最低,为理想的萌发培养基。随着BA浓度的降低,生根率提高,呈负相关。同浓度BA抑制生根的效果好于KT。在萌发培养基上生长一段时期后,少数较成熟的胚状体抽生出茎叶,长成完整植株。