大豆疫霉基因组SSR标记开发

 【目的】开发大豆疫霉基因组SSR标记,为从分子水平深入研究大豆疫霉及其近缘种提供一种理想的分子标记。【方法】用FPCR软件从大豆疫霉全基因组序列中查询SSRs,选择合适的SSR序列用Primer5.0软件设计引物。【结果】从发现的1 234个含有2～4个碱基重复单元的完全SSRs中选出260段设计引物,经10个大豆疫霉分离物基因组DNA检测,有213对(81.9%)扩增出SSR特征条带,其中114(53.5%)对引物扩增出多态性。通用性检测表明,14.6%～28.6%引物分别在选择的8个疫霉种中有效扩增。基于10个SSR标记数据进行聚类分析,结果表明表明这些标记可以完全区分大豆疫霉及其它疫霉。【结论】大豆疫霉基因组SSR标记具有高多态性,是大豆疫霉遗传变异、遗传多样性、及遗传图谱构建等研究理想工具。部分大豆疫霉基因组SSR标记在其近缘种中具有通用性,可以用于疫霉菌的系统进化、鉴定、区分及开发近源种的SSR标记。特别开发的SSR标记,在大豆疫霉基因组中具有准确的位置,将极大地方便大豆疫霉菌功能基因的定位和克隆,以及进行疫霉菌的比较基因组的研究。     

胡椒瘟病与辣椒疫霉

综述了胡椒瘟病的症状、传播途径与防治方法，以及其病原菌--辣椒疫霉的生殖、形态特点及分离方法。     

辣椒疫霉产孢方法初探

辣椒疫霉产孢方法初探张子君刘晓舟张宏志张春萍（辽宁省农业科学院）（沈阳市林产公司）（齐齐哈尔铁路分局）收稿日期：１９９６－５－１１本文经王疏、田春晖修改辣椒疫病（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｃａｐｓｉｃｉ）是辣椒生产较重要的病害之一。近几年有逐年加...     

适用于大豆疫霉菌遗传分析的新EST-SSR标记

【目的】开发大豆疫霉菌SSR标记,为深入了解大豆疫霉菌遗传变异提供理想分析工具。【方法】用SSRIT软件对28 197条大豆疫霉菌EST进行SSR搜索,选择含有SSR的合适EST设计、合成引物和PCR扩增。【结果】发现1 454条EST含有SSR,其中3个碱基重复基元类型最多,有855个,占鉴定总数的54.3%。设计合成140对引物,用10个大豆疫霉菌菌株基因组DNA进行PCR检测,有111对引物（79.3%）扩增出SSR特征条带。通用性检测表明有33对引物在检测的1个或多个其它疫霉菌或腐霉菌中产生扩增产物。【结论】大豆疫霉菌EST含有丰富的SSR位点,本研究从EST中开发了111个新大豆疫霉菌SSR标记,可有效地用于大豆疫霉菌及其相关种的遗传变异研究。     

辣椒疫霉漆酶基因Pclac3克隆表达

辣椒疫霉是一种侵染性植物病原,能引起多种茄科及葫芦科植物的病害。利用同源克隆法从辣椒疫霉基因组内克隆了漆酶基因Pclac3,该基因全长1 881个核苷酸,编码626个氨基酸,与已知的真菌漆酶基因具有较高的同源性,并且具备漆酶基因的保守区域。利用PCR将该基因克隆于pPIC9K载体,并转化于毕赤酵母GS115,经过1%甲醇诱导表达获得其异源表达产物。将表达产物进行SDS-PAGE检测,获得分子量大约为90 kDa的特异蛋白。利用ABTS法对Pclac3的表达产物粗酶液进行酶活性分析发现,其活性在第11天时最大,达到45 U/mL。这为研究辣椒疫霉漆酶基因家族及探索卵菌漆酶生物活性及其潜在的应用提供了理论依据。     

辣椒苗期不同生长阶段对疫霉根腐病的抗性研究

准确鉴定辣椒的抗性水平对种质资源的筛选和新品种选育具有重要意义。文章采用云南的辣椒疫霉优势生理小种菌株,通过游动孢子悬浮液灌根接种法,对不同辣椒品种在苗期不同生长阶段的抗病性进行了初步研究。结果表明,在20~25℃条件下,苗龄20 d(子叶期)、40 d(3~4叶期)、60 d(5~6叶期)以及90 d(现蕾初期)的辣椒抗性、中抗以及感病品种对辣椒疫霉的抗病性表现出明显的差异,即不同苗龄生长阶段的抗病性水平由强至弱为90 d60 d40 d20 d,表明抗病、中抗及感病辣椒品种的抗性水平与苗龄呈正相关。在辣椒苗龄60 d(5~6叶)时灌根接种能够充分地反映出不同品种的抗性水平。本研究明确了进行辣椒疫霉根腐病抗性评价的适宜生长期,可为辣椒种质资源、品种抗病性筛选和鉴定提供科学依据。     

辣椒疫霉在土壤中的季节性变化和存活

对辣椒疫霉（ＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｃａｐｓｉｃｉＬｅｏｎｉａｎ）在上海市郊蔬菜土地壤中的季节性变化和垂直分布进行了研究,结果表明,辣椒疫霉在一年中季节性的种群数量变化与温度的关系最密切,土壤中多菌量出现的时间也是病原菌生长的最适温度（２５～２８℃）出现的时间,也正值该地的夏,秋季节,Ｐ．ｃａｐｓｉｃｉ在土壤中主要分布的地表１０ｃｍ的土层中,１０ｃｍ以下土层的菌量较少,当土壤中存有Ｐ．ｃａｐｓｉｃ     

几种杀菌剂抑制辣椒疫霉孢子囊形成的室内测定结果

在室内测定了甲霜灵等１０种杀菌剂对辣椒疫霉（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｃａｐｓｉｃｉ）孢子囊形成的抑制作用,测定结果表明,甲霜灵,甲霜锰锌,磷酸乙酯,乙磷铝对辣椒疫霉孢子囊的形成具有很强的抑制作用,但该菌对这几种杀菌剂的适应浓度范围较宽,硫酸铜,霜疫必克,克抗灵,冠菌铜在较高浓度下对才能在辣椒疫霉孢子囊的形成有抑制效果,该菌以壕几种杀菌的适应浓度范围要对较窄。     

南瓜疫病菌(Phytophthora capsici)生理分化研究进展

文章综述了南瓜疫病菌生理分化的研究进展,包括传统的鉴别寄主技术到分子标记技术的应用,展望今后南瓜疫病菌的主要研究方向与前景,为今后南瓜抗疫病育种研究奠定理论和应用基础。     

不同来源辣椒疫霉菌的系统发育分析

运用PCR直接测序法,对9个辣椒疫霉菌株和1个外类群大豆疫霉菌株的nrDNA的ITS区(包括ITS1、5.8SrDNA和ITS2)进行序列测定。结果表明,不同来源的辣椒疫霉菌的ITS序列总长度为750~753bp。采用PAUP软件进行系统发育分析表明:来自辣椒寄主和土壤的辣椒疫霉菌各自聚为一组,与其地理来源没有明显的相关性。     

辣椒疫霉产孢能力与致病力的相关性分析

[目的]探究安徽省辣椒疫霉(Phytophthora capsici)的游动孢子囊产量与对辣椒致病力的关系。[方法]采用液体培养的方法对采自安徽的56个辣椒疫霉进行游动孢子囊产量测定,分析游动孢子囊产量与致病力的相关性。[结果]安徽省不同地区的辣椒疫霉菌株在10%V8培养液中的游动孢子囊产量存在极显著差异,辣椒疫霉的致病力与游动孢子囊产量呈正相关,但相关性较小(r=0.165,R2=0.027 2)。[结论]辣椒疫霉产孢性能较稳定,游动孢子囊产量与辣椒疫霉菌致病力的强弱相关性很小,认为不相关。     

辣椒疫霉多聚半乳糖醛酸酶活性对其致病力的影响

[目的]研究安徽省辣椒疫霉(Phytophthora capsici Leonian)的致病力与多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性的关系.[方法]采用平板法定性检测辣椒疫霉产生的果胶酶活性,并对不同致病力菌株的PG活性的变化进行分析.[结果]辣椒疫霉均可产生果胶酶,形成水解圈.供试菌株接种辣椒苗复壮后的PG活性高于复壮前;强致病力菌株的PG活性明显高于弱致病力菌株;供试菌株的PG活性均在培养后第7天达到峰值.[结论]PG活性的高低与辣椒疫霉菌致病力的强弱相关,是该菌的致病相关酶.     

丁子香酚对辣椒疫霉菌的毒力测定

为了筛选对辣椒疫霉菌有抑制作用的安全性药剂,在室内比较了丁子香酚和甲霜.霜霉威对辣椒疫霉菌菌丝生长的抑制效果,结果表明:丁子香酚可溶液剂和甲霜.霜霉威可湿性粉剂对辣椒疫霉菌的EC50值分别为0.0851和23.8451μg/mL。     

辣椒疫霉菌拮抗细菌的筛选

从健康的11种植物体内分离到对辣椒疫霉Phytophthora capsici有强拮抗作用的两个内生细菌菌株,分别命名为LJ、XM菌株。拮抗试验表明,这两株细菌对多种植物病原真菌有较强的抑制作用。LJ和XM发酵滤液对辣椒疫霉病菌游动孢子囊的形成、孢子萌发均有较强的抑制活性。经LJ、XM发酵液处理的辣椒疫霉菌丝均有不同程度的原生质体浓缩现象。     

辣椒疫霉病菌对内吸性杀菌剂抗药性的研究

从江西省采集分离的辣椒疫病菌（ＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｃａｐｓｉｃｉＬｅｏｎｉａｎ）１５３个菌株对甲霜灵抗药性测定结果表明：野生已有５５．６０％的菌株存在抗药性,其中中、高抗菌株占２７．５０％;甲霜灵与恶唑烷酮、甲呋酰胺之间存在交互抗性,与霜霉威之间没有交互抗性;甲霜灵对敏感菌株菌丝生长、游动孢子囊的形成和游动孢子的释放均有明显的抑制作用,其ＥＣ５０分别为０．２７７６ｍｇ／ｋｇ、０．２６６３ｍｇ／ｋｇ、２．２９５ｍｇ／ｋｇ,而霜霉威浓度达５００ｍｇ／ｋｇ时,对菌株菌丝生长、游动孢子囊的形成和游动孢子的释放均没有明显的抑制作用,但在活体寄主上对病菌有较好的防效。     

辣椒疫病菌生物学特性的研究

研究表明，辣椒疫病菌（ＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｃａｐｓｉｃｉＬｅｏｎｉａｎ）的菌落形态多为绒毛型，孢子囊会脱落，带有长柄，形态大小变化很大，长宽比１．４～１．７，乳突明显；混合菌株可形成藏卵器，雄器底生；菌株在１２～３５℃范围内均可生长，最适生长温度为２８℃；对浓度为１／８×１０－６的孔雀石绿不敏感；不同菌株利用淀粉的能力差异很大；孢子囊的形成受湿度的影响，湿度越大，孢子囊形成越多；形成孢子囊的最适温度为２０～２８℃；ｐＨ值影响孢子囊萌发方式和萌发率，适当偏酸，孢子囊萌发率高，有利于形成游动孢子；病菌可侵染茄科、葫芦科等多种作物。     

辣椒疫霉菌在土壤中消长动态研究

为有效防治辣椒疫霉病，对辣椒疫霉病田土壤进行了病菌分离、菌株配对培养、越冬存活形式等研究。结果表明：病田土壤中的疫霉菌数量有明显的季节性变化。以5-8月最多，冬季和初春最少；湖南长沙地区疫霉菌的配对型有A2和A1A2两种类型，多以卵孢子形态在土壤中越冬；病田土壤和植物病残体是辣椒疫霉病最主要的初侵染源。     

12种杀菌剂对辣椒疫霉菌的室内毒力比较

采用生长速率法和孢子囊形成法测定了常用的12种杀菌剂对辣椒疫霉菌的毒力.试验结果表明,供试杀菌剂对辣椒疫霉菌菌丝生长、孢子囊形成的抑制作用间存在明显差异,其中以50%安克和68%精甲霜锰锌的对菌丝抑制作用相对较强,它们对菌丝生长的毒力回归方程分别为y=4.434 6+0.759 8x和y=4.569 7+0.522 6x,抑制中浓度分别为5.55μg/mL和6.66μg/mL;而50%安克和72.2%霜霉威对孢子囊形成的抑制作用相对较强,毒力回归方程分别为y=2.393 3+1.304 9x和y=2.269 5+1.303 6x,抑制中浓度分别为99.45μg/mL和124.34μg/mL.其它供试杀菌剂的毒力效果均不太理想.