逆转录环介导等温扩增技术检测南芥菜花叶病毒

根据南芥菜花叶病毒外壳蛋白基因序列设计并合成了2组RT-LAMP引物,通过筛选试验,最终确定Ar4组引物为最佳引物,建立了南芥菜花叶病毒的RT-LAMP检测方法.同时,通过实时浊度仪和钙黄绿素分别对检测结果进行了判断.特异性和灵敏度试验结果显示,RT-LAMP方法快速、特异且灵敏,其灵敏度与普通RT-PCR法一致.     

逆转录环介导等温扩增技术检测南方菜豆花叶病毒

 根据南方菜豆花叶病毒外壳蛋白基因序列设计并合成了4组RT-LAMP引物,通过引物筛选试验,确定SB1组引物为最佳引物,并进行了引物特异性与灵敏度检测试验,最终建立了南方菜豆花叶病毒的RT-LAMP检测方法。灵敏度检测试验显示,RT-LAMP方法比普通RT-PCR法灵敏度高10倍,而检测时间明显缩短,整个反应过程只需40 min。此外,体系中加入钙黄绿素,反应结束后,可裸眼观察颜色变化来判定结果。本研究所建立的SBMV RT-LAMP方法具有快速、稳定、灵敏、特异、操作简单的特点,适合于SBMV的现场快速检测。     

逆转录环介导等温扩增技术检测烟草环斑病毒的研究

 本研究采用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP),建立了一种快速、简便的烟草环斑病毒检测方法。根据TRSV外壳蛋白编码基因上的8个位点,共设计了6条引物,通过RT-LAMP扩增得到特征性的梯度条带。特异性试验表明,引物对TRSV的检测具有良好的特异性;灵敏度试验显示RT-LAMP比普通RT-PCR高10倍。通过反应温度和时间的优化,该方法只需在水浴锅中60℃等温扩增60 min,整个检测周期约1.5 h,结果采用SYBR green I染色显示,易于观察和判定。     

逆转录环介导等温扩增技术检测烟草脆裂病毒

为实现进境种球中烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)的快速检测,本研究应用逆转录环介导等温扩增技术,建立了 TRV-RT-LAMP检测方法,在60℃,60 min条件下,能特异性地检测到TRV,灵敏度可达到10pg/μL,是普通RT-PCR的100倍.用SYBR Green Ⅰ染色后可以使检...     

逆转录环介导等温扩增技术检测草莓潜隐环斑病毒的研究

采用环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification, LAMP）,建立了草莓潜隐环斑病毒（Strawberry latent ringspot virus, SLRSV）检测方法。根据SLRSV外壳蛋白编码基因上的8个位点,共设计了6条引物,通过逆转录环介导等温扩增得到特征性的瀑布状条带。特异性试验表明,引物对SLRSV的检测具有良好的特异性;灵敏度试验显示RT-LAMP的灵敏度比普通RT-PCR高出100倍。该方法无需特殊的试剂和设备,只需在水浴锅中65 ℃等温扩增,整个检测周期约1.5 h,结果采用SYBR green I染色显示,易于观察和判定。     

世界主要储粮书虱环介导等温扩增试剂盒研发与应用

为利用分子生物学技术快速准确鉴定国内外主要储粮书虱,基于环介导等温扩增 （loop-mediated isothermal amplification, LAMP）技术拟研发一款世界主要储粮书虱LAMP试剂盒,利用该LAMP试剂盒对10种储粮书虱的DNA粗提液进行测试,并结合DNA条形码技术对采自中国山东省和内蒙古自治区粮库的未知种类储粮书虱成虫样品进行鉴定。结果显示,本试验研发的LAMP试剂盒可准确鉴定10种储粮书虱;使用LAMP试剂盒和DNA条形码技术鉴定未知种储粮书虱样品的结果一致,即山东省储粮书虱样品为嗜虫书虱 Liposcelis entomophila,内蒙古自治区储粮书虱样品为啮书虱 L. corrodens,表明本试验研发的世界主要储粮书虱LAMP试剂盒可以快速、精准完成主要储粮书虱的鉴定,且操作便捷,可为海关口岸和基层仓储保护部门书虱鉴定工作提供技术支持。     

玉蜀黍黑粉菌环介导等温扩增检测体系的建立及应用

 本文根据玉蜀黍黑粉菌(Ustilago maydis )的UmPep1、UmPit2和UmSee1基因各设计4套环介导等温扩增(LAMP)引物,从中筛选出1套引物对LAMP反应体系进行3因素(Bst DNA聚合酶浓度、Mg²⁺浓度、内外引物浓度比)3水平的优化试验。并对优化的U. maydis LAMP反应体系进行特异性、灵敏度及田间检测可行性试验。特异性试验表明,该方法能特异性检测U. maydis,而与其他病原菌的DNA没有交叉反应;灵敏度试验表明,该反应体系的最低检出限为44 fg·μL^-1 pEasy-Pep质粒DNA,制作的标准曲线可对U. maydis进行定量分析。该方法也适用于在U. maydis侵染前或侵染早期对田间样品进行检测,对现场采集的172份田间样品进行检测,其中140个样品显示为阳性。本研究所建立的LAMP体系具有特异性好、灵敏度高、重复性好的特点,并能在45 min内完成对田间样品的检测,是快速、定量检测U. maydis的有效手段。     

基于环介导等温扩增技术检测瓜类细菌性果斑病菌

本文利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),针对西瓜嗜酸菌(Acidovorax citrulli)基因组中Aave_4063和Aave_4064序列设计了2对特异引物Ac-F3/Ac-B3和Ac-FIP/Ac-BIP,建立了西瓜嗜酸菌的LAMP检测体系。利用该体系在65℃保温1h,通过荧光显色即可完成检测。设计的引物特异性强,其检测灵敏度为2.0×101 cfu/mL。该方法为西瓜嗜酸菌的检疫及其所致病害的快速诊断提供了新的技术。     

禾谷丝核菌环介导等温扩增检测技术体系的建立

为建立简便、快速和灵敏的小麦纹枯病菌——禾谷丝核菌Rhizoctonia cerealis的分子检测技术体系,基于环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,以核糖体DNA内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)为靶标序列,设计并筛选特异性引物,建立禾谷丝核菌的LAMP检测方法,并对其特异性、灵敏度和应用效果进行测定。结果表明,基于筛选获得的4条禾谷丝核菌特异性引物建立的LAMP方法能够从15种植物病原菌中特异性地检出禾谷丝核菌,近缘种立枯丝核菌Rhizoctonia solani和引致早期症状易混淆病害的病原菌禾顶囊壳菌Gaeumannomyces graminis、麦根腐平脐蠕孢菌Bipolaris sorokiniana和禾谷镰孢菌Fusarium graminearum均未检出;该LAMP方法在日光下的灵敏度为10^-1 ng/μL,在蓝光下的灵敏度为10^-3 ng/μL;对发病组织的检测显示该LAMP方法能从人工接种的小麦发病组织中...     

基于实时环介导等温扩增技术快速检测玉米晚枯病菌

为了利用实时环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术,特异、灵敏、快速地检测检疫性病原菌玉米晚枯病菌（Cephalosporium maydis）,本研究选择种间遗传距离较高的Tef-1α和H3基因作为特异性基因,进行特异性引物的筛选、检测温度的优化、灵敏度和特异性检测等研究。实验结果表明,最佳引物组合为Tef-2,检测温度为65℃,最小检测限为0.10 pg/μL,且只对玉米晚枯病菌靶基因特异,检测应用结果可靠。环介导等温扩增技术能够用于玉米晚枯病菌的高效特异性检测,可为检验检疫部门对玉米晚枯病菌的检测工作提供有力的保障。     

DNA条形码技术研究进展及其在植物检疫中的应用展望

DNA条形码是一种新的生物分类学方法,它通过特有的一段DNA序列来识别每种生物。与传统鉴定技术相比,利用该技术进行生物物种鉴定具有快速、准确、简便、易行等优点。该技术在出入境植物检疫中将得到广泛应用。     

植物检疫中无损检测技术进展与应用

随着全球经济的一体化进展,植物产品的国际贸易及人员交流越来越广泛,有害生物的跨国传播风险日益增大。同时,随着植物产品绿色通道的全线开通,如何缓解国际贸易快速通关与国境疫情防控之间的矛盾,满足对外检验检疫中“检得出、检得准、检得快”的要求,已成为检验检疫部门一个迫切需要解决的课题。传统的检验检疫方法存在难以实现无损、快速、在线检测的缺点,因此研究快速、高效、无损的植物检疫技术,实现植物检疫的自动实时检测,对推动经济的健康、持续发展,提高产品交易价格,具有十分重要的现实意义。本文从植物及其产品的虫害、病害方面综述了植物检验检疫中的声测法、X 射线、机器视觉、近红外光谱分析以及高光谱图像等无损检测技术的原理和应用研究,并对其中的优缺点加以分析。在此基础上,对无损技术的检测应用前景进行了展望,指出未来植物检疫的重要手段和发展方向。     

聚集信息素在小蠹虫检疫中的应用

本文简要阐述了我国小蠹虫检疫的现状和国外动态;小蠹虫聚集信息素的性质和特点;并对当前小蠹虫聚集信息素在检疫中应用的研究情况进行了介绍.     

基因芯片技术及其在植物检疫工作中应用前景

本文介绍了基因芯片的发展历程、原理及制作方法，分析并预测基因芯片在检疫性植物病原细菌、植物病毒、病原真菌、杂草、昆虫及线虫检测等方面的应用前景。     

全国进境植物及植物产品截获检疫性真菌疫情分析

本文分别从检疫性真菌截获年份、来源国、寄主和货物业务类别等层面对2010~2014年全国口岸截获检疫性真菌进行了系统分析,并对真菌检疫现存问题进行讨论,以期对全国口岸在植物真菌检疫截获和风险分析方面提供参考。     

植物DNA条形码技术在出入境检验检疫领域的应用

DNA条形码技术是一种通过标准的DNA片段鉴定物种的新技术,已成为近年来生物学研究热点之一。由于DNA条形码技术具有快速、准确、自动等优点,可以满足目前出入境检验检疫工作中提出的"检得出、检得快、检得准"的要求。本文对植物DNA条形码的研究进展进行了概述,分析了该技术在检验检疫应用领域中存在的不足,并针对如何更好地将该技术应用于检验检疫工作中提出了建议。     

乳白蚁分类研究进展及对我国植物检疫的影响

乳白蚁属(非中国种)是我国十分重要的进境植物检疫性有害生物。本文主要综述了近年来国内外乳白蚁分类研究中取得的一些新成就,介绍了全球主要区域乳白蚁的种类分布,总结了我国多年来乳白蚁的截获状况,分析了国内外乳白蚁分类研究情况对我国进境植物检疫可能产生的影响。     

我国植物检疫的现状与技术进展

随着我国经济的发展,植物检疫工作取得了长足进步。综述了我国检疫政策与国际规则的对接,监督管理模式的改革以及植物检疫对严防外来生物入侵、服务三农和对外贸易交往等方面发挥的重要作用;介绍了植物检疫在科学决策的研究,分子生物技术的应用和除害处理方法多样化等技术进展。     

多指标综合评价法在进出境植物检疫疫情截获评价体系中的应用研究

本文结合我国进出境植物检疫工作的特点,分析了进出境植物检疫疫情截获影响因素,运用多指标综合评价法及专家评判法制定出疫情截获评价指标,并使用专家评判法和层次分析法得出指标体系各指标的权重系数,构建了进出境植物疫情截获综合评价指标体系。