Nesfatin-1对初情期雌性大鼠促性腺激素及其mRNA表达的影响

为探究侧脑室注射Nesfatin-1对雌性大鼠促性腺激素水平及其mRNA表达的影响,对初情期前雌性大鼠的侧脑室注射Nesfatin-1,采用实时荧光定量PCR法检测促黄体素(Luteinizing hormone,LH)和促卵泡素(Folliclestimulating hormone,FSH)mRNA在垂体中的变化,采用酶联免疫分析法检测血清LH和FSH的浓度。结果表明:在初情期前的雌性大鼠中,Nesfatin-1可促进初情期启动、增加卵巢重量、血清LH水平、垂体LH mRNA和FSH mRNA的表达增加(P0.05);但Nesfatin-1对FSH水平的影响不突出,注射后15min时增加(P0.05),60min不产生影响(P0.05)。侧脑室注射Nesfatin-1后15和60min均能提高血清LH水平,15min时提高更明显(P0.05),但对FSH水平的影响不尽相同。在成年的雌性大鼠中,Nesfatin-1对LH和FSH的分泌不产生影响(P0.05)。Nesfatin-1可通过下丘脑诱导和增强初情期过渡阶段雌性大鼠LH和FSH的释放及LH、FSH mRNA的表达。     

Ghrelin对奶山羊下丘脑神经肽Y(NPY)和刺鼠相关蛋白(AGRP)mRNA表达的影响

研究Ghrelin对奶山羊下丘脑神经肽Y(NPY)和刺鼠相关蛋白(AGRP)mRNA表达的影响。10只泌乳期莎能奶山羊随机分为试验组和对照组,每组5只。试验组静脉注射Ghrelin(3.0μg/kg),3h后宰杀,迅速取下丘脑,检测下丘脑脑神经肽Y和刺鼠相关蛋白mRNA的表达。结果表明,一定剂量的Ghrelin对NPY mRNA的表达具极显著上调作用(P0.01);对AGRP mRNA的表达也有显著促进作用(P0.01)。以上结果提示Ghrelin可能通过对这些神经肽的作用参与对奶山羊摄食和能量代谢等生理活动的调节。     

Kiss-1基因在猪初情期下丘脑-垂体-卵巢轴中的定位研究

[目的]为阐明猪的生殖机理和选育早熟品种奠定基础。[方法]采用免疫组化技术研究Kiss-1 mRNA在初生以及30、60、70(初情期)和90日龄小梅山猪的下丘脑、卵巢和垂体内的定位,并利用放射免疫分析(RIA)方法观察母猪血浆LH、FSH含量的变化。[结果]Kiss-1 mRNA在小梅山猪下丘脑、卵巢、垂体中均有表达,以下丘脑弓状核阳性颗粒最多,尤其初情期时最为明显。各级卵泡中以初情期成熟卵泡的阳性颗粒数目最多。Kis-s1 mRNA表达量在小梅山猪下丘脑、垂体和卵巢从初生到初情期逐渐上升,并在初情期达到顶峰,而后逐渐下降。小梅山猪血浆LH、FSH浓度初生时较高,随后迅速下降,60日龄又升高,70日龄达到峰值。[结论]Kiss-1基因是控制猪初情期启动的关键因子     

促性腺激素释放激素在不同品种公牛睾丸中的免疫组化定位

为了掌握促性腺激素释放激素（GnRH）及其受体在不同品种公牛睾丸中的变化规律,采用免疫组化SP染色法分别对广西沼泽型水牛、摩拉杂交水牛、荷斯坦奶牛、广西本地黄牛睾丸中GnRH的分布表达进行对比研究。结果表明,不同品种公牛睾丸生精细胞和间质细胞中均有GnRH免疫阳性物质存在,经Image-Pro Plus 6.0软件统计发现,荷斯坦奶牛睾丸的GnRH阳性细胞个数最多、胞体最大,而广西本地黄牛睾丸的GnRH阳性细胞数量最少、胞体最小,说明GnRH在不同品种公牛睾丸的分布差异可能与生产性能有关,也提示GnRH在生殖调控中除能刺激垂体分泌FSH、LH外,可能直接与生殖器官发生作用,通过旁分泌、自分泌、神经分泌等多种方式调节蛋白类、多肽类激素的分泌及类固醇激素的产生,进而调节这些靶细胞和靶器官的功能活动。     

促性腺激素释放激素在不同品种水牛卵巢中的免疫组化定位

【目的】了解促性腺激释放激素（GnRH）在广西沼泽型水牛与摩拉杂交水牛卵巢中定位表达的异同点,为深入阐明GnRH调节卵巢功能的机制提供理论依据。【方法】采用免疫组化SP染色法对广西沼泽型水牛和摩拉杂交水牛卵巢中GnRH及其受体的分布表达进行对比研究。【结果】两种不同品种水牛卵巢中均存在大量的GnRH阳性细胞,且主要位于颗粒层细胞和黄体粒细胞的胞质内;通过比较显示,两种不同品种水牛卵巢GnRH阳性细胞个数差异极显著（P〈0．01）,但GnRH阳性细胞大小及其平均光密度的差异均不显著（P〉0．05）。【结论】不同品种水牛卵巢的GnRH分布差异可能与繁殖性能有关,但主要分布于巢卵颗粒层细胞和黄体粒细胞的胞质内。     

外源性神经激肽B对雌性大鼠生殖轴GnRH和Kisspeptin表达的影响

为研究外源性神经激肽B(NKB)对雌性大鼠下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)和下丘脑-垂体-卵巢轴(HPOA)GnRH和Kisspeptin表达的影响,将40只60 d的Sprague-Dawley(SD)雌性大鼠随机分为试验组和对照组,侧脑室分别注射NKB溶液和等体积生理盐水,20 min后处死采集样品.采用免疫荧...     

二氢吡啶(Diludin)对产蛋鸡内分泌的影响

１ ０２４羽３００日龄罗曼蛋鸡随机分４组,分别饲喂二氢吡啶（Ｄｉｌｕｄｉｎ）添加量０,１００,１５０,２００ ｍｇ／ｋｇ的４种饲粮,于饲喂后第３０日和第８０日采血和屠宰,研究其对蛋鸡内分泌功能的影响。结果显 示：Ｄｉｌｕｄｉｎ均显著地提高了腺垂体和血清中ＦＳＨ,ＬＨ含量,其中垂体ＦＳＨ和ＬＨ含量随饲喂剂量提高 而增加,血清ＦＳＨ和ＬＨ含量以１５０ ｍｇ／ｋｇ组效果最佳;Ｄｉｌｕｄｉｎ提高了血清Ｔ３含量,Ｔ４差异不显著, ３０日Ｔ３随饲粮中Ｄｉｌｕｄｉｎ递增而增加,８０日１５０,２００ ｍｇ／ｋｇ组与对照组差异显著;饲粮中添加Ｄｉｌｕｄｉｎ 具有改进血清雌二醇（Ｅ２）水平,其中８０ 日 １５０,２００ ｍｇ／ｋｇ组与对照组差异显著;１５０ ｍｇ／ｋｇ Ｄｉｌｕｄｉｎ显 著提高血清中孕酮（Ｐ４）含量;饲粮中添Ｄｉｌｕｄｉｎ显著提高下丘脑和腺垂体中ｃＡＭＰ含量。     

RESEARCH ARTICLE Effects of Central Administration of Glutamine and Alanine on Feed Intake and Hypothalamic Expression of Orexigenic and Anorexigenic Neuropetides in Broiler Chicks

Different amino acids have been shown to affect feed intake when injected directly into the central nervous system of birds. In the present study, we investigated the effects of L-glutamine and L-alanine on feed intake and the mRNA expression levels of hypothalamic neuropeptides involved in feed intake regulation in broiler chicks. L-Glutamine or Lalanine was intra-cerebroventricularly (ICV) administered to 4-d-old broiler chicks and the feed intake were recorded at various time points. Quantitative PCR was performed to determine the hypothalamic mRNA expression levels of neuropeptide Y (NPY), agouti related protein (AgRP), pro-opiomelanocortin (POMC), melanocortin receptor 4 (MC4R) and corticotropin releasing factor (CRF). Our results showed that ICV administration of L-glutamine (0.55 or 5.5 μmol) significantly increased feed intake up to 2 h post-administration period and the hypothalamic NPY mRNA expression levels, while it markedly decreased hypothalamic POMC and CRF mRNA expression levels. In contrast, ICV administration of L-alanine (4 μmol) significantly decreased feed intake for the first 0.5 h post-administration period, and reduced the hypothalamic AgRP mRNA expression levels, while it remarkablely enhanced the mRNA expression levels of MC4R and CRF. These findings suggested that L-glutamine and L-alanine could act within the hypothalamus to influence feed intake in broiler chicks, and that both orexigenic and anorexigenic neuropeptide genes might contribute directly to these effects.     

Endothelin stimulation of cytosolic calcium and gonadotropin secretion in anterior pituitary cells

The presence of endothelin, a vasoconstrictor peptide, in the hypothalamus and posterior pituitary suggests that it also regulates neural and other nonvascular target cells. In pituitary gonadotrophs, low doses of endothelin evoked oscillations in the intracellular calcium concentration, and high doses induced a biphasic calcium response. Mobilization of intracellular calcium predominated during the spike phase of the calcium response to endothelin, whereas calcium entry through dihydropyridine-sensitive channels contributed to both the spike and plateau phases of the calcium response. Endothelin was a potent as hypothalamic gonadotropin-releasing hormone (GnRH) in stimulation of gonadotropin release in perifused pituitary cells. Endothelin bound specifically to pituitary cells with a dissociation constant of 70 picomolar, and induced rapid formation of inositol trisphosphate and diacyglycerol. Although intracellular calcium concentration and gonadotropin secretory responses to endothelin were independent to the GnRH receptor, endothelin and GnRH appeared to have a common signal transduction mechanism. These observations suggest that endothelin can act as a neuropeptide to regulate anterior pituitary function.     

慢性暴露全氟十二烷酸对雌性大鼠生殖激素及相关卵巢受体表达的影响

全氟烷酸类化合物(PFAAs)是一类新型的持久性有机污染物,该类化合物的环境和健康风险已经引起了人们的广泛关注。由于长链PFAAs的生殖毒性效应尚缺乏系统的研究,本文采用含全氟十二烷酸(PFDoA)0.1 mg/kg的饲料饲喂大鼠180 d,应用放射免疫分析法和实时荧光定量PCR方法检测了大鼠血清中生殖激素的水平以及卵巢中相关受体的表达。结果显示,PFDoA暴露导致血清雌二醇水平出现减少的趋势,PFDoA显著增加了血清促卵泡刺激素水平,但并不影响血清促黄体生成素水平;PFDoA处理导致卵巢雌激素受体α的mRNA水平降低了25%,卵巢促卵泡刺激素受体的表达增加了36%,但PFDoA并不影响卵巢中促黄体生成素受体的表达。以上结果暗示慢性PFDoA暴露有影响雌激素以及促卵泡刺激素的信号在卵巢中传导的趋势。     

胰岛素对初情期前母猪垂体细胞促性腺激素释放及生长激素分泌的影响

[目的]探讨胰岛素对猪垂体前叶细胞无血清单层培养细胞分泌促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、生长激素(CH)的影响。[方法]24头140日龄、体重17 kg的母猪被分成高、中、低3个能量组,利用无血清单层培养垂体模型,并用放射免疫法测定细胞液促卵泡素、促黄体素和生长激素浓度。[结果]在不同能量水平上,胰岛素对单层无血清培养垂体细胞FSH、LH及GH释放能力的影响有显著差异(P<0.05),高能组较高,低能组较低。[结论]首次研究了在初情期前母猪体外培养垂体细胞中添加胰岛素对垂体细胞分泌激素的影响,证实代谢激素在初情期前母猪下丘脑-垂体-卵巢水平上调节生殖机能。     

阿拉瑞林主动免疫对绵羊垂体GnRHR、FSHR和LHR表达及卵巢GnRHR分布的影响

为探讨促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂主动免疫对绵羊腺垂体GnRH受体(GnRHR)、促卵泡激素受体(FSHR)和促黄体激素受体(LHR)表达及分布的影响,将42只5～6月龄母绵羊分为6组(n=7),即EG-Ⅰ组、EG-Ⅱ组、EG-Ⅲ组、EG-Ⅳ组、EG-Ⅴ组和对照组(CG)。EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ组绵羊分别皮下注射200μg、300μg和400μg阿拉瑞林抗原,分2次皮下注射(0 d和14 d),EG-Ⅳ和EG-Ⅴ组绵羊分别皮下注射200μg和300μg阿拉瑞林抗原,分4次皮下注射(0 d、7 d、14 d和21 d),对照组(CG)绵羊皮下注射2.0 ml溶剂,分2次(0 d和14 d)。于70 d无菌切取腺垂体、子宫及卵巢,提取垂体总RNA,PCR扩增,反转录,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测,免疫组织化学SP法染色。结果表明,GnRHR、FSHR和LHR mRNA PCR扩增曲线的起始循环数分别为20、28和24。5个试验组Gn-RHR、FSHR和LHR mRNA值均低于对照,EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ组的mRNA值逐渐下降;EG-Ⅳ和EG-Ⅴ组的mRNA值分别低于EG-Ⅰ和EG-Ⅱ组。GnRHR阳性染色主要分布在卵泡细胞以及卵母细胞胞质和胞核及胞膜。各组的染色强度不同,以EG-Ⅲ阳性染色最为明显。阴性对照全部为阴性。显微图像的绿色值和亮度无显著差异,各组灰度值差异显著(P<0.05),以EG-Ⅱ均为最小,EG-Ⅴ最高。EG-Ⅰ的饱和度最小(P<0.05),EG-Ⅲ最高。上述结果说明阿拉瑞林抗原免疫抑制垂体GnRHR、FSHR和LHR mRNA表达,GnRHR阳性染色主要在卵母细胞和卵泡细胞的胞核和胞质。阿拉瑞林免疫可抑制卵巢GnRHR的分布与表达,增加注射剂量和次数作用更明显。     

一例真间性猪的研究

【目的】为探讨间性猪的生殖遗传发育基础和优化猪的种质资源,对一例间性猪进行了外部形态、细胞遗传、性激素、解剖以及组织病理学的研究。【方法】5月龄间性大白猪为试验组,以与试验组同窝的正常公母猪为对照组,分别进行内外生殖器官检察;PCR检测SRY基因;染色体组型和带型分析,取外周血进行常规短期淋巴细胞培养,获取中期细胞分裂相,制成染色体标本,G显带和C显带处理;放射免疫法测定静脉血睾酮(testosterone, T)、雌二醇(estradiol, E2)、促黄体素(luteinizing hormone, LH)、促卵泡素(follicle- stimulating hormone, FSH)、孕酮(progesterone, PRG)和催乳素(prolactin, PRL)含量;生殖腺病理切片制做及观察,取2 cm×2 cm大小生殖腺组织,10%甲醛固定后进行常规石蜡切片制作,苏木(Hematoxylin)与伊红(Eosin)染色(H.E.染色),镜检并显微照相;下丘脑和垂体电镜切片制做及观察,取2 mm×2 mm大小脑部组织,2.5%戊二醛固定后进行常规电镜切片制作,透射电镜观察并拍摄。【结果】结果表明,间性猪外生殖器为雌性表型,外阴位于肛门下方,阴蒂肿大突出于阴门之外,左侧可见睾丸,右侧隐睾,阴囊发育良好。间性猪和正常母猪染色体组型为38, XX,SRY阴性,核型组成为10sm+4st+12m+12t,G带带型没有差异,C带的显带基本相似,1、3、4、6、8、9、10、13、14和16号染色体均不同程度显带,以圆形带为主。试验组和对照组各号染色体的相对长度及臂比值差异均不显著（P＞0.05）。睾酮和雌二醇水平均介于正常公、母猪之间,促黄体素、促卵泡素、孕酮和催乳素水平均高于正常母猪,LH/FSH比值明显低于正常母猪。剖检发现间性猪有雌雄两性生殖腺,有两个卵睾体,左侧有附睾,子宫体、子宫角和阴道明显退化,阴蒂中隐藏有假阴茎。病理组织镜检发现卵睾体为睾丸和卵巢混合组织,柱状上皮细胞退化,有正常莱氏细胞,无精原细胞或其残留物存在;附睾假复层纤毛柱状上皮细胞正常,内腔无精细胞或其残留物;子宫内膜有较低程度退化,部分内膜腺正常。试验组下丘脑和垂体分泌细胞较对照组发达,促性腺激素释放激素（gonadotropin-releasing hormone, GnRH）神经元核大且饱满,细胞器增多并融合;垂体以促性腺激素细胞为主,细胞数量明显增多,分泌颗粒大小不均;催乳素细胞数量较正常母猪多,分泌颗粒电子密度也较大。【结论】该间性猪为真间性,无染色体易位现象,性激素紊乱,无种用价值。     

Follicle-stimulating hormone is expressed in ovarian follicles of chickens and promotes ovarian granulosa cell proliferation

Follicle-stimulating hormone(FSH), an important hypothalamic-pituitary-gonadal axis(HPG) hormone, is secreted by the pituitary gland. This study confirms that FSH is expressed in chicken follicles at different stages, and positive FSHβ mRNA signals were stronger(P0.05) in granulosa cells than in oocytes. The 369 bp coding sequence of FSHβ in ovaries is 100% identical to that in the pituitary gland. The experiment in vitro revealed that the ovary possessed FSH secretory capacity. Further, FSHβ mRNA was significantly upregulated(P0.05) in follicles and significantly higher(P0.05) than that in the pituitary gland by approximately 2–23 times with the development. The number of granulosa cells decreased significantly(P0.05) in the cells with siRNA treatment, confirming that the ovarian FSH could promote granulosa cell proliferation. This view was supported by cell cycle analysis and CCND2 and CCNE2 expression. Further research indicated that no difference(P0.05) was observed between the number of granulosa cells treated with FSHβ siRNA and in exogenous FSH. However, the number of granulosa cells without FSHβ siRNA transfection was significantly higher(P0.05) for exogenous FSH. This finding suggests that the proliferative effect of exogenous FSH on ovarian granulosa cells depend on endogenous FSH. This study demonstrated that the FSH gene was expressed in chicken follicles and promoted ovarian granulosa cell proliferation, which enriched the theory on HPG axis.     

对母猪生殖调控的研究

【目的】研究促性腺激素抑制激素（GnIH）mRNA在母猪组织器官中的分布,不同剂量GnIH对母猪卵巢类固醇激素合成和细胞增殖相关蛋白表达的影响,及GPR147与GnRH的形态学关系。从分子、细胞水平和形态学角度,探讨GnIH在下丘脑-垂体-性腺轴对母猪生殖调控的作用机制,丰富神经内分泌学的内容。【方法】以30日龄健康仔母猪为研究对象,采用半定量RT-PCR方法研究GnIH mRNA在母猪24个组织中的分布定位。采集青年母猪卵巢样品,分离卵巢颗粒细胞,研究不同剂量GnIH（10^-6、10^-8、10^-10 和 10^-12 mol·L^-1）对体外培养的母猪卵巢颗粒细胞类固醇激素（雌二醇,孕酮）的合成、细胞增殖相关蛋白（cyclin B1,PCNA）表达的影响。取30日龄健康仔母猪下丘脑,制作脑片,采用荧光双标记,激光共聚焦显微镜观察拍照分析GPR147与GnRH的形态学关系。【结果】GnIH mRNA主要在母猪的中枢神经系统中表达,尤其是在间脑表达含量最高。在外周组织,如子宫、卵巢、垂体中也有一定量表达。不同剂量的GnIH作用于体外培养的卵巢颗粒细胞,其中10^-6和10^-10 mol·L^-1 GnIH能极显著地抑制雌二醇的分泌（P＜0.01）, 但不同剂量的GnIH对孕酮分泌的影响并不显著。GnIH能极显著地抑制卵巢增殖相关蛋白PCNA和cyclin B1的表达（P＜0.01）。此外,激光共聚焦结果显示GPR147与GnRH在下丘脑室旁核及视前区存在密切联系。【结论】GnIH可在下丘脑水平通过其受体直接作用于GnRH神经元,影响GnRH的合成和分泌,进而在中枢水平调控母猪的生殖活动。在外周生殖器官中,GnIH可通过影响卵巢激素的分泌和细胞增殖相关蛋白的表达参与母猪的生殖调控。     

GnRH在青年摩杂一代水牛下丘脑-垂体-卵巢轴的免疫组化定位

[目的]研究促性腺激素释放激素（GnRH）在青年摩杂一代水牛下丘脑-垂体-卵巢轴的免疫组化定位。[方法]采用免疫组织化学SuperPicTure^TM二步法检测5头青年摩杂一代水牛下丘脑、垂体和卵巢中GnRH的分布情况,研究GnRH在下丘脑、垂体及卵巢的分布上的联系,进而了解GnRH在下丘脑、垂体及卵巢三者之间分泌释放的途径。[结果]GnRH存在于青年摩杂一代水牛下丘脑-垂体-卵巢轴的各个环节。青年摩杂一代水牛下丘脑中各主要核团都有GnRH免疫阳性神经元的分布,尤其以视上核、视前核、室旁核分布较多。对于垂体,GnRH免疫阳性产物只存在于青年摩杂一代水牛的腺垂体中。青年摩杂一代水牛卵巢中生殖上皮细胞、颗粒细胞和黄体细胞发现有GnRH免疫阳性产物。[结论]为进一步研究GnRH在生殖中的生理和作用机制提供形态学依据,并对青年摩杂一代水牛的繁殖育种起到参考指导作用。     

能量水平对文昌鸡开产前后NPY基因mRNA表达以及开产性状的影响

为研究不同能量水平日粮对文昌鸡开产性状和开产前后(15、20和25周龄)NPY基因在下丘脑和卵巢组织中表达的影响,根据文昌鸡各生长阶段能量需要量的95％、100％、105％分别设置为低(Ⅰ)、中(Ⅱ)、高(Ⅲ)3个能量组进行饲养,每组5个重复,每个重复40只,并准确记录开产日龄、开产体重和开产蛋重,同时运用RT-PCR...     

奶牛发情周期中生殖激素浓度与卵泡发育对比分析

选择从澳大利亚购进的2岁左右发情周期为21 d育成母牛10头,用放射免疫测定法(R IA)测定了发情周期血清中促卵泡素、促黄体素、孕酮、雌二醇17β的浓度,并用B-型超声波诊断仪检测发情周期卵巢卵泡发育变化.结果显示:优势卵泡发育体积和FSH、LH与E2浓度在奶牛发情周期中主要表现出两个波峰,对比分析显示奶牛在发情周期第12天(优势卵泡峰时)不发情与不排卵主要原因可能是体内前列腺素等激素量不足所致.     

不同饲养方式对蛋鸭产蛋性能的影响及其机制

旨在探讨单笼饲养、双笼饲养、散养和网上平养四种养殖模式对蛋鸭（Anas platyrhynchos）产蛋性能的影响及其影响机制。191羽优质蛋鸭品种山麻鸭被分成单笼、双笼、网上平养、散养四组,记录其产蛋率和日耗料量,研究不同饲养模式对产蛋性能的影响。同时,应用real-time PCR技术检测在不同养殖模式下山麻鸭下丘脑、垂体、卵巢、肾上腺等组织中产蛋相关基因的表达,筛选出其中差异表达基因。结果表明,双笼饲养的山麻鸭产蛋性能和饲料转化率最低,单笼饲养的产蛋性能最佳。产蛋相关基因差异表达检测发现,在不同饲养模式下,促肾上腺激素释放激素（corticotropin-releasing hormone, CRH）基因在下丘脑和垂体组织中,阿黑皮素原（proopiomelanocortin, POMC）基因在垂体组织中的表达无显著差异。在双笼饲养模式下,黑素皮质素受体（melanocortin 2 receptor, MC2R）基因在山麻鸭垂体中的表达量最高,催乳素受体（prolactin receptor, PRLR）基因在卵巢中表达量最高,而骨形态发生蛋白4（bone morphogenetic proteins 4,BMP4）基因在卵巢中表达量最低。结果提示,（1）双笼饲养会导致蛋鸭的产蛋性能下降; （2）双笼饲养的蛋鸭可能长期处于应激状态,诱使垂体中MC2R基因高表达,进而调控HPA轴激素分泌,抑制HPG轴的活性,使得卵巢中的PRLR及BMP4等产蛋相关基因异常表达,两个信号通路交互作用,最终影响了蛋鸭的产蛋性能。