IFN-γ在大鼠海马内的免疫组化定位

应用免疫组织化学SP法结合葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸镍铵呈色法研究IFN-γ免疫反应性产物在大鼠海马内的分布.结果表明,IFN-γ免疫反应主要分布于海马CA1、CA2、CA3区,有少量分布于灰被,齿状回.这为海马具有免疫调节功能的观点提供了新的证据.结合文献,推断IFN-γ在海马-下丘脑-垂体-肾上腺的免疫调控中起主要作用.     

IFN-γ在大鼠脾脏内的定位研究

观察大鼠脾脏内IFN-γ免疫反应产物的特征与分布。应用免疫组织化学链酶菌抗生素蛋白-过氧化物酶法(Streptavidin-perosidase,SP法),结合葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸镍胺呈色。IFN-γ反应产物在大鼠脾脏的小梁、白髓、红髓和边缘区均有分布,证明了脾脏内存在IFN-γ,为“免疫-神经-内分泌网络”提供了形态学依据。     

17-β雌二醇对去卵巢大鼠垂体前叶IFN-γ表达的影响

【目的】探讨雌激素对去卵巢大鼠垂体前叶γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)表达的影响。【方法】将大鼠分为对照组(CG组)、去卵巢组(OVX组)和去卵巢并用17-β雌二醇治疗组(OVX+E2组),应用免疫组化SP法检测不同时程各组大鼠垂体前叶IFN-γ免疫阳性物质含量的变化特点。【结果】去卵巢后不同时程,OVX组大鼠垂体前叶IFN-γ表达较CG组显著减少(P<0.05);OVX+E2组大鼠IFN-γ表达显著回升(P<0.05),且在第4周时回升至CG组水平。【结论】雌激素对大鼠垂体前叶IFN-γ免疫阳性物质的表达有明显影响,提示IFN-γ可能以自分泌或旁分泌方式,参与雌激素对垂体前叶调节功能的部分作用。     

IFN-γ在流产大鼠下丘脑的表达

为了探讨下丘脑对妊娠的调节作用,采用免疫组织化学SP法研究了妊娠中期,正常妊娠大鼠及流产大鼠下丘脑内IFN-γ阳性神经元的形态与分布,同时利用图像分析软件测定了其灰度值。结果显示,正常妊娠大鼠和流产大鼠IFN-γ主要在下丘脑的视前大细胞核、室旁核、视上核、下丘脑前核等部位分布,而流产大鼠的IFN-γ阳性细胞数多于正常妊娠组且表达强于正常妊娠组。表明IFN-γ在下丘脑的表达对妊娠大鼠的神经内分泌调节有重要影响。     

IFN-γ在大鼠胸段脊髓内的分布

为进一步探讨免疫 -神经 -内分泌三大系统之间的关系 ,用免疫组织化学 SP法 ,对大鼠胸段脊髓内 IFN-γ样免疫反应产物的分布进行了研究。结果表明 ,IFN-γ样免疫反应产物广泛分布于胸段脊髓各板层。其中背角 、 、 层 ,胸髓中间带外侧核 ,腹角 层内可见到较高密度的阳性胞体和树突。中间带和腹角内的阳性胞体的树突还伸向外侧索和腹索 ,有时可达脊髓边缘     

鸵鸟小肠中IFN-γ的随龄性表达

为探讨γ-干扰素(IFN-γ)与鸵鸟小肠发育及小肠黏膜免疫的关系,运用免疫组织化学SP法分别对3日龄、3周龄和11月龄鸵鸟小肠中IFN-γ的表达进行研究。结果表明,IFN-γ免疫阳性细胞主要分布于肠上皮间淋巴细胞,在绒毛和肠腺的上皮细胞及杯状细胞内也有阳性产物表达,黏膜固有层的IFN-γ阳性细胞集群分布或沿血管周围密集排布,肌层和肌间存在大量梭形的阳性细胞和串珠状的阳性纤维;IFN-γ阳性产物的相对表达量随着年龄的增长而增加,3日龄和3周龄表达差异不显著(P0.05),11月龄与3周龄鸵鸟表达差异显著(P0.05);不同肠段IFN-γ阳性产物的相对表达量均表现为自十二指肠至空肠的递减趋势,其中3日龄、3周龄鸵鸟各段小肠中差异不显著(P0.05),11月龄鸵鸟空肠中IFN-γ阳性产物的相对表达量较十二指肠显著降低(P0.05),回肠与空肠相比亦显著降低(P0.05)。表明IFN-γ通过多种途径参与鸵鸟小肠的发育和黏膜免疫。     

应用免疫组织化学法研究γ-干扰素在大鼠室管膜中的定位分布

用免疫组织化学 SP法结合葡萄糖氧化酶 - DAB-硫酸镍铵呈色法 ,对正常成年大鼠室管膜上 IFN- γ的特征和分布进行了研究。结果表明 :IFN- γ免疫反应阳性细胞分布于大鼠侧脑室壁、第三脑室壁、中脑导水管、第四脑室壁的室管膜中。其中侧脑室、第三脑室、第四脑室壁上存在有伸长细胞 ,发出基突伸向周围灰质。提示 IFN-γ可能作为一种新的脑神经肽存在于室管膜中 ,参与脑 -脑脊液回路的调节     

怀孕期山羊腺垂体中IFN-α和IFN-γ的表达研究

【目的】研究α-干扰素(IFN-α)和γ-干扰素(IFN-γ)在怀孕前期(怀孕1～30d)、中期(怀孕31～120d)、后期(怀孕121～150d)山羊腺垂体中的分布及表达量的变化特点。【方法】以怀孕前、中、后期的山羊为试验动物,放血致死后采取其腺垂体制备切片,采用免疫组织化学SP法分别对怀孕前、中、后期山羊腺垂体内IFN-α、IFN-γ阳性细胞的分布及表达变化进行研究。【结果】2种干扰素阳性物质主要分布于腺垂体嗜酸性细胞、嗜碱性细胞和嫌色细胞中。不同怀孕期,IFN-α和IFN-γ的分布存在明显差异,前期和后期表达量较高,中期明显降低;在前、中、后各个怀孕时期,IFN-α的相对表达量均比IFN-γ多,在后期更为明显。【结论】IFN-α和IFN-γ在山羊腺垂体中的表达量因怀孕时期的不同而存在明显差异,其可能在不同怀孕时期发挥作用或相互协同调节垂体激素的合成与分泌,参与动物生殖的调节。     

IFN-γ在怀孕早期山羊下丘脑-垂体-性腺轴的表达

为了探讨γ-干扰素(in terferon-,γIFN-γ)在下丘脑-垂体-性腺轴(hypotha lam ic-p itu itary-gonada lax is,HPG轴)中的免疫调节作用,应用免疫组织化学SP法对IFN-γ免疫反应阳性产物在怀孕早期山羊HPG轴的分布特点进行了研究。结果显示,IFN-γ分布于乳头体内侧核、视前内侧核、下丘脑前区、腹内侧核、连接核、室旁核、视上核等20个核团中,各部分核团细胞着色程度深浅不一;在视上核、室旁核分泌部、乳头体内侧核等有大量的阳性神经纤维;同时在室周核、视前外侧核、视前内侧核等13个核团中散布有一些阳性星形胶质细胞,与阳性神经细胞交错共存;腺垂体中腺细胞和神经垂体中神经纤维均有IFN-γ表达;卵泡和黄体中也有IFN-γ存在。表明IFN-γ与动物的神经内分泌活动关系密切,参与了免疫-神经-内分泌网络中的生殖免疫调节。     

IFN-γ对妊娠早期大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中IGF-1表达的影响

【目的】确定干扰素γ(IFN-γ)对妊娠早期大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中IGF-1表达的影响。【方法】将妊娠9 d的SD大鼠随机分为对照组、试验1组和试验2组,采用生殖道肌肉注射的方法,对照组大鼠生殖道肌肉注射生理盐水,试验组大鼠注射IFN-γ,其中1组剂量为2.5×104U/只,2组剂量为7.5×104U/只。各试验组均在注射48h后灌注取材、免疫组化SP法染色,光镜下观察。【结果】注射2.5×104U/只和7.5×104U/只的IFN-γ均能下调妊娠大鼠下丘脑室周核、视上核、视前大细胞核、视前内侧核、视前外侧核、视前交叉上核、弓状核,腺垂体,卵巢黄体及子宫蜕膜基质细胞和子宫腺中IGF-1的表达。【结论】IFN-γ对妊娠早期大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中IGF-1的表达具有下调作用,高剂量IFN-γ的下调作用更显著。     

IFN-γR和ER在大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中的共表达

为了探索干扰素-γ受体(IFN-γR)和雌激素受体(ER)在大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中的相互关系,用免疫组化Max Vision双标法,对正常成年雌性SD大鼠下丘脑、垂体、卵巢中IFN-γR和ER共表达情况及分布特点进行了研究。结果表明,IFN-γR和ER双标记阳性细胞广泛存在于大鼠下丘脑多个核团中,并且也分布在垂体和卵巢组织中;IFN-γR阳性产物主要存在于细胞质中,少数为全细胞着色;ER阳性产物主要存在于整个细胞中,部分为核表达。推测γ-干扰素(IFN-γ)和雌激素在大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中,以其各自的受体为介导进行两种物质间的信息传递,以此共同参与机体的神经免疫内分泌调节。     

抑制素α亚基在大鼠下丘脑与垂体的免疫组织化学定位

 用链酶亲和素-生物素过氧化物酶复合物（SABC）免疫组织化学方法，使用抑制素α亚基单克隆抗体对注射抑制素α片段及抑制素粗提物后的去卵巢大鼠的下丘脑和垂体进行了免疫组织化学定位。结果表明，在下丘脑与垂体存在抑制素α亚基单克隆抗体的特异性阳性反应位点，并存在剂量与时间上的依赖关系，说明抑制素α亚基可以通过血脑屏障到达下丘脑和垂体，为探讨抑制素α亚基在血脑屏障的转运机制提供了形态学上的依据。     

黄芪多糖和黄芪甲苷诱导RIMVECs分泌IFN-γ的研究

【目的】探明黄芪甲苷和黄芪多糖能否诱导RIMVECs分泌IFN-γ,为黄芪及有效成分的临床应用提供理论和参考依据。【方法】以体外培养的RIMVECs为模型,用ELISA法检测不同浓度的黄芪甲苷和黄芪多糖在不同时间诱导RIMVECs分泌IFN-γ的表达量。【结果】25μg/mL和50μg/mL黄芪甲苷能诱导RIMVECs表达IFN-γ,且随着时间延长表达逐渐升高,24h时达到峰值,具有明显的富集效应;25μg/mL和50μg/mL黄芪多糖也能诱导RIMVECs表达IFN-γ,随着时间延长RIMVECs细胞上清液中IFN-γ表达量逐渐增多,25μg/mL组IFN-γ表达量24h达到峰值;50μg/mL组IFN-γ表达量12h达到峰值,随后表达量降低。【结论】结果提示,黄芪甲苷和黄芪多糖的免疫调节作用可能是通过诱导RIMVECs分泌IFN-γ来实现,为黄芪的临床应用提供了试验依据。     

兔IFN-γ基因的克隆、遗传进化分析及其表达

运用RT-PCR技术对用ConA刺激后的中国白兔外周血淋巴细胞(PBMCr)进行扩增,将纯化后的PCR产物克隆入pMD18-T中进行序列测定,并进行遗传进化分析.结果发现:该基因全长501 bp,编码167个氨基酸,其中前20个氨基酸残基构成信号肽序列.与不同物种IFN-γ基因相比,核苷酸和推导的氨基酸序列有一定的差异.在推导的中国白兔IFN-γ氨基酸序列中,在41~43、108~110和117~119位存在3个潜在的N-联糖基化位点,同时存在3个Cys残基.转化重组质粒pETIFN-γ的大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导后,重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量为22.6 kDa的重组蛋白.经凝胶薄层扫描,重组蛋白表达量可占菌体蛋白的19.2%.     

川芎嗪联合IFN-γ对哮喘大鼠GATA-3、IL-4和IL-5的影响

目的观察川芎嗪联合γ-干扰素(IFN-γ)对哮喘大鼠转录因子GATA-3、白介素-4(IL-4)和白介素-5(IL-5)影响。方法50只健康SD大鼠,随机分为健康对照组、空白对照组、川芎嗪组、IFN-γ组和川芎嗪 IFN-γ组。每组10只;除空白组10只外,余均制作哮喘大鼠模型,哮喘激发前分别给予生理盐水、川芎嗪、IFN-γ和川芎嗪 IFN-γ。检测支气管肺泡灌洗液细胞总数和分类I、L-4I、L-5含量、肺组织中GATA-3的表达情况的变化。结果(1)空白对照组中BALF上清液中细胞总数明显增多,嗜酸性粒细胞数量上升;川芎嗪 IFN组细胞数量下降,嗜酸性粒细胞比例下降明显,与川芎嗪或IFN组比较有统计学意义(P<0.05)。(2)空白对照组中IL-4和IL-5明显增多,与健康对照组组比较有统计学意义(P<0.01);川芎嗪 IFN-γ组IL-4和IL-5下降明显,与川芎嗪或IFN-γ组比较有统计学意义(P<0.05)。(3)空白对照组支气管管壁较健康对照组增厚,川芎嗪 IFN-γ组与川芎嗪组、IFN组比较有统计学意义(P<0.05)。4 GATA-3免疫组化结果:空白对照组气道和肺组织有GATA-3表达,川芎嗪和IFN-γ组可见部分GATA-3表达,川芎嗪 IFN-γ组基本无表达或仅见很弱的GATA-3表达。结论川芎嗪联合IFN-γ能抑制哮喘大鼠GATA-3表达,降低IL-4和IL-5含量,减轻支气管管壁炎症反应。     

稀土钕尘肺工人血清中IL-10、IFN-γ的表达及其DNA甲基化分析

尘肺病是由于长期吸入粉尘颗粒物并沉积于肺部,引起以肺纤维病变为主的疾病。在此过程中,DNA甲基化可以调节细胞因子基因活性,影响Th1、Th2型细胞因子的转录,导致Th1/Th2细胞因子之间失衡,可能是导致尘肺形成的重要原因。为明确尘肺与DNA甲基化的关系,本研究检测了尘肺病人和健康人群的全血钕含量、血清中Th1型细胞因子IFN-γ、Th2型细胞因子IL-10的表达和IFN-γ、IL-10基因启动子区甲基化状态,了解了稀土钕尘肺工人钕暴露水平和机体免疫状况,初步探讨DNA甲基化在钕粉尘致肺纤维化中的作用。结果表明,氧化钕体内高蓄积、IL-10与IFN-γ基因启动子区的甲基化水平改变,导致IL-10表达升高、IFN-γ表达降低,在钕尘肺的病情进展中起重要作用。     

雌激素和IFN-γ对去卵巢大鼠下丘脑中Bcl-2和Bax表达的影响

【目的】研究雌激素与γ-干扰素(IFN-γ)对下丘脑的协同保护作用。【方法】建立去卵巢(OVX)模型大鼠,然后将其分为摘除卵巢(OVX)组、假手术(SHAM)组、OVX+17-β雌二醇(E2)组、OVX+E2+50IU IFN-γ组、OVX+E2+200IU IFN-γ组和OVX+E2+800IU IFN-γ组共6组,分别在处理后的0,2,4,6,8周,用免疫组织化学SP法对各组大鼠下丘脑中凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达进行检测。【结果】OVX组大鼠下丘脑中Bcl-2的相对表达量随时程逐渐减少,4周后最低,6周后又逐渐上升,随后维持在一定的水平,Bax表达量的变化趋势则与之相反;OVX组Bcl-2和Bax的表达量与SHAM组差异极显著(P<0.01)。OVX+E2组大鼠下丘脑中Bcl-2的相对表达量增加,Bax的相对表达量降低,均与OVX组差异显著(P<0.05)。OVX+E2+200IU IFN-γ组Bcl-2的相对表达量极显著高于OVX组,显著高于OVX+E2组,Bax的总体变化趋势与OVX+E2组一致;OVX+E2+50IU IFN-γ组和OVX+E2+800IU IFN-γ组Bcl-2和Bax的相对表达量与OVX+E2组差异不显著(P>0.05)。【结论】雌激素的缺乏增强了下丘脑神经元对凋亡的敏感性,而外源生理剂量E2与适当剂量的IFN-γ,在一定时期内对这种凋亡有重要的保护作用。     

GHS-R1a在大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴上的定位及其mRNA的周期性表达

取成年SD大鼠的下丘脑、垂体、卵巢组织制成石蜡切片,采用PV-9000两步法免疫组织化学检测GHS-R1a在下丘脑-垂体-卵巢轴上的定位.实时荧光定量PCR检测GHS-Rla mRNA在不同发情周期大鼠F丘脑-垂体-卵巢轴上的表达.结果表明:GHS-R1a主要分布在下丘脑的弓状核、腹内侧核、正中隆起等,腺垂体的嗜色细胞...     

γ-干扰素受体在山羊颈前神经节的表达

旨在探索山羊颈前神经节是否具备接受γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)作用的条件,是否有IFN-γ受体(interferon-γreceptor,IFNGR)的存在,进而明确神经调节与免疫调节之间的关系。分别取雌雄成年山羊颈前神经节各5对,用免疫组化SP法和PCR方法检测IFNGR在颈前神经节的表达情况。结果表明,在山羊颈前神经节的神经元、卫星细胞和神经纤维均有IFNGR免疫阳性产物分布,但主要分布于神经元胞体,IFNGR在神经元胞体的相对表达量显著高于非神经细胞结构(P0.05)。在山羊颈前神经节扩增到IFNGR1基因的cDNA片段全长376bp,与绵羊、牛、野猪、家兔、褐家鼠IFNGR1基因同源性分别为98%、97%、84%、73%、66%。在山羊颈前神经节中IFNGR主要在交感节后神经元表达与分布,具备对IFN-γ刺激做出反应的条件,提示山羊颈前神经节可能作为IFN-γ对靶器官免疫内分泌调节途径和自主神经对靶器官调节的神经途径之间相互协调的关键点。     

痒螨病患兔皮损中细胞因子IFN-γ、IL-4和转录因子T-bet、GATA-3的表达

【目的】探讨不同病变评分痒螨病患兔皮损中细胞因子IFN-γ、IL-4和转录因子T-bet、GATA-3的表达。【方法】采用免疫组化、酶联免疫吸附试验和荧光定量PCR法检测痒螨病患兔(病变评分为1分、3分和5分)耳部皮损和健康兔(0分)耳部皮肤中IFN-γ/IL-4和T-bet/GATA-3的表达。【结果】与0分组相比,患病组(1分、3分和5分组)皮损处IFN-γ蛋白和IFN-γmRNA均增高,但仅3分组呈显著增高(IFN-γ蛋白:0分组=(0.344 2±0.014 33)pg/mg,3分组=(0.463 6±0.014 95)pg/mg,P<0.05;IFN-γmRNA:3分组/0分组=2.365,P<0.05)。患病组皮损处T-bet和GATA-3蛋白的阳性产物均定位于细胞核,但两者较健康组均无明显差异(P>0.05);1分组和3分组皮损中的T-bet mRNA较健康组呈显著增高(P<0.05),而3分组和5分组皮损中GATA-3 mRNA呈显著降低(P<0.05)。【结论】随着痒螨病病变评分的增加,宿主的Th2免疫反应受到抑制(GATA-3的表达降低),而Th1免疫反应则有所增强(IFN-γ和T-bet的表达增高)。