原始生殖细胞与胚胎干细胞

原始生殖细胞用于哺乳动物胚干细胞的分离与培养,是进入９０年代以来胚胎干细胞研究领域内的重大技术成果。在小鼠、大鼠、牛和猪等动物上,人们已由ＰＧＣｓ成功地建立了类ＥＳ细胞系。囊胚注射不仅已生出嵌合小鼠,而且其中生殖系嵌合体也已繁殖出数量可观的后代。因此,来自ＰＧＣｓ的ＥＳ细胞,业已证明具有囊胚ＥＳ细胞的全部特性。在ＥＳ细胞培养中,用ＰＧＣｓ替代桑椹胚和囊胚在取材等方面是有优势的。     

绒山羊原始生殖细胞用于胚胎干细胞培养的研究

该研究将20-45d的绒山羊胚胎生殖嵴及其邻近组织用机械剪和胰蛋白酶 EDTA消化处理，未加任何细胞生长因子。仅添加DMEM 10％犊牛血清，在38℃、5％CO2，饱和湿度条件下，将原始生殖细胞(PGCs)与其胎儿成纤维细胞共培养，在原代培养至1周左右时观察到了鸟巢状类胚胎干细胞(ES细胞)和集落团，贴壁生长于成纤维细胞层上面。经电镜观察，类胚胎干细胞体积小、核大，有多个核仁。细胞形态不规则，无明显界限等特点。     

绒山羊原始生殖细胞用于胚胎干细胞培养的研究

该研究将20～45d的绒山羊胚胎生殖嵴及其邻近组织用机械剪和胰蛋白酶+EDTA消化处理,未加任何细胞生长因子,仅添加DMEM+10%犊牛血清,在38℃、5%CO2,饱和湿度条件下,将原始生殖细胞(PGCS)与其胎儿成纤维细胞共培养,在原代培养至1周左右时观察到了鸟巢状类胚胎干细胞(ES细胞)和集落团,贴壁生长于成纤维细胞层上面。经电镜观察,类胚胎干细胞体积小、核大,有多个核仁,细胞形态不规则,无明显界限等特点。     

鸡胚胎原始生殖细胞的体外培养

旨在对影响鸡胚胎原始生殖细胞（PGCs）体外培养、传代过程的各种影响因素进行探讨。将分离到的19期鸡胚胎生殖腺的PGCs在以鸡胚成纤维细胞（CEF）为饲养层，添加细胞因子的培养体系中进行培养、传代。经冷冻保存的PGCs在添加细胞因子的培养体系中能增殖，并具有分化能力。从细胞形态、集落形态、增殖生长能力、核型检测、碱性磷酸酶测定等方面对培养过程中的鸡胚胎PGCs进行检测。结果表明，采用传至3代的CEF为饲养层，多次离散法进行传代所获得的5代鸡胚胎PGCs不但能有效维持PGCs的未分化状态和正常二倍体核型，也具有其作为多能性胚胎干细胞的一系列特征。     

牛胚胎生殖细胞的分离与培养

以牛胎儿为材料,从原始生殖细胞（PGC）分离培养出胚胎生殖细胞（EG）,并进行传代和鉴定,对影响胚胎生殖细胞分离与培养的因素进行了探讨,研究发现以共培养方式培养牛原始生殖细胞时,原代培养都可以出现大量形态较好的EG细胞集落,说明同源的体细胞可以很好地支持PGC的生长和增殖,组织块培养细胞克隆数目较少,PGC很难增殖,不能形成典型的集落,传代也不理想,只传了一代.同时比较了不同传代方法对牛胚胎生殖细胞细胞传代的影响,发现消化＋机械分离法和消化＋吹打法都可以用于EG细胞的传代.消化＋吹打法操作简单,省时省力,也能够很好的保持细胞的增殖活力.原代培养的牛原代胚胎生殖细胞进行了细胞表面标志抗原SSEA-1,3,4鉴定,呈弱阳性.细胞体外培养可以分化为成纤维样细胞、上皮样细胞和类胚体.     

从原始生殖细胞分离克隆绵羊胚胎干细胞

为了研究绵羊胚胎干细胞在体外培养过程中的生长行为,试验采用30～45日龄的绵羊胎儿生殖嵴及其周围组织共培养的方式分离克隆胚胎干细胞。结果表明:在不添加任何细胞生长因子的情况下,也能分离克隆到具ES细胞诸多特征的胚胎生殖细胞系,即具有连续传代能力、细胞集落有典型鸟巢状结构、AKP染色阳性等。说明该细胞具有多能性,类似ES细胞。     

山羊原始生殖细胞分离与培养的影响因素

以本地白山羊胎儿的生殖嵴为试验材料,从原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)中分离培养得到胚胎生殖细胞(embryonic germ cells,EGCs),对其进行体外培养和鉴定等。胎儿生殖嵴在室温(25℃)下消化15 min,使用0.125%胰酶+0.02%EDTA比0.25%胰酶+0.04%EDTA效果好,差异显著(P<0.05);挑取集落法和胰酶消化法均能将PGCs传至第2代,两种方法差异不显著(P>0.05);以GEF为饲养层,在培养液中添加不同浓度和种类的细胞因子:①LIF:10 ng/mL;②LIF:20 ng/mL;③LIF(10 ng/mL)+SCF(10 ng/mL);④LIF(20 ng/mL)+SCF(20 ng/mL)。4种情况对于原代集落形成率的影响差异不显著(P>0.05),均能得到传至第2代的EGCs;研究不同胎龄胎儿分离培养PGCs的效果,结果发现4例冠臀长小于15 mm的胎儿仅观察到一个原代集落,6例大于30 mm的胎儿没有观察到原代集落。     

绒山羊原始生殖细胞继代培养研究

本研究对原代培养至6d时的鸟巢状绒山羊类胚胎干细胞(ES细胞)集落进行了传代培养。其结果:这些集落的细胞经6代克隆传代具有胚胎干细胞的诸多特征。细胞集落有典型的鸟巢状结构,AKP染色阳性,核型分析结果染色体正常。在透射电镜下细胞体积小,核大,有多个核仁而且核仁明显,细胞形态不规则,无明显界限。细胞质中核糖体较多,内质网、线粒体发达,部分细胞的核膜上出现小泡、染色质边集而形成凋亡小体。上述结果表明该细胞具有多能性,类似ES细胞。     

从原始生殖细胞中分离克隆胚胎干细胞的研究

作者探讨了从原始生殖细胞（PGCs）中分离克隆胚胎干细胞的优势、用于分离克隆胚胎干细胞的PGCs获取方法及其向胚胎干细胞转化的能力。     

哺乳动物原始生殖细胞与EG细胞研究进展

本文综述了哺乳动物原始生殖细胞的来源、增殖、迁移及生物学特点及近年来国内外用原始生殖细胞分离EG细胞的研究进展，探讨了EG细胞作为另一种多能性干细胞的优越性。     

昆明白小鼠胚胎生殖细胞的分离与培养

以昆明白品系小鼠胎儿生殖嵴为材料，以不同的培养液分离培养胚胎生殖细胞（EG cells），发现小鼠胎儿肝细胞条件培养液的效果好于未添加白血病抑制因子（LIF）的基础培养液，而差于添加了1000IU／mL LIF的基础培养液。同时，试验对比了从不同胎龄胎儿分离培养原始生殖细胞（PGCs）的情况，鉴定了EG细胞的生物学特性；EG细胞经体外培养，可以分化为神经样细胞、上皮样细胞和简单类胚体。     

从原始生殖细胞分离和克隆兔的胚胎生殖细胞

研究采用 1 4～ 1 8d兔胎儿的生殖嵴及周围组织与其同源成纤维细胞共培养 ,低糖DMEM +1 0 %NBS +1 0 %FCS +1 0ng/mLLIF +1 0ng/mLSCF+0 1mol/Lβ 巯基乙醇 +1 0 0U/mL青霉素 +80U/mL链霉素作培养基 ,分离出兔原始生殖细胞 (PGC) ,克隆并多次传代。从原始生殖细胞 (PGC)中获得胚胎生殖细胞 (EG)细胞集落 ,1 4d胎儿原代观察到类EG细胞集落 ,传至 4代后丢失。 1 6d胎儿的类EG只传 2代 ,1 8d胎儿没有得到EG细胞集落。EG细胞具有干细胞的诸多特征 ,呈典型的团块状聚集生长 ,碱性磷酸酶 (AKP)染色呈阳性 ,在衰老饲养层的培养基中生长形成类胚体、上皮细胞、神经细胞和成纤维细胞等     

胚胎生殖细胞体外培养体系研究进展

本文简述了胚胎生殖细胞(Embryonic GermCells，EG细胞)生物学特性，原始生殖细胞生存的维持需要有饲养层或应用条件培养基，现在大多数的培养要加入细胞因子以维持其生存和增殖。本文作一简述。     

胚胎干细胞向生殖细胞分化的研究进展

胚胎干细胞是一类全能型细胞,能在特定条件下诱导产生生殖细胞。近年来,科学家在胚胎干细胞的研究方面取得了一些突破性进展,能够突破常规,治疗生殖细胞缺乏的不孕不育症,对临床治疗和保护濒临灭绝的动物具有重要意义。笔者对胚胎干细胞体外诱导分化为生殖细胞的相关技术进行综述。     

胚胎干细胞向生殖细胞分化的研究进展

生殖细胞来源于原始生殖细胞,其在体内的分化机制已基本清楚。随着生殖细胞研究的不断深入,通过体外诱导途径获得生殖细胞已成为现实。将胚胎干细胞体外分化为上胚层样细胞,进而分化为原始生殖样或原始生殖细胞。将它们迁移入胎儿生殖腺,具有减数分裂及产生精子能力,与卵子结合移入缺生精管的生殖腺的新生鼠可以产生健康后代。为此,体外诱导生殖细胞的成功,进一步阐明了胚胎干细胞向生殖细胞分化的机制,为更有效利用干细胞造福人类奠定了基础。     

胚胎生殖细胞体外培养体系研究进展

本文简述了胚胎生殖细胞(EmbryonicGermCellsEG细胞)生物学特性,原始生殖细胞生存的维持需要有饲养层或应用条件培养基,现在大多数的培养要加入细胞因子以维持其生存和增殖。本文作一简述。     

无血清培养关中奶山羊胚胎生殖细胞的研究

山羊胚胎生殖细胞是一种来源于胎儿原始性腺的多能干细胞,建立该细胞体外稳定分离培养体系对研究山羊繁殖育种具有重要价值。本试验通过酶消化法和组织培养法分离培养关中奶山羊胚胎生殖细胞,检测无血清培养基对细胞体外增殖的影响。结果发现,该培养基可以分离得到山羊胚胎生殖细胞,细胞集落形态典型,表达AKP、Oct4、TERT及SSEA-1。经体外分化试验表明,细胞可以分化为类胚体、成纤维样细胞、成脂细胞和卵母细胞样形态。无血清培养基可以用于山羊胚胎生殖细胞的分离与培养,本试验对进一步建立山羊胚胎生殖细胞长期培养体系提供了新的参考。     

胚胎生殖细胞体外培养体系研究进层

本文简述了胚胎生殖细胞(Embryonic GermCells,EG细胞)生物学特性,原始生殖细胞生存的维持需要有饲养层或应用条件培养基,现在大多数的培养要加入细胞因子以维持其生存和增殖.本文作-简述.     

法美联手从胚胎干细胞首次培育出生殖细胞

法国国家科研中心和美国宾西法尼亚大学的科研人员在《科学》发表文章宣布 ,他们已成功将老鼠胚胎干细胞 (ES细胞 )转化为卵细胞。这是科学家首次在试管中从 ES细胞培育出生殖细胞。此成果不仅将为解决不育、操纵细胞性特征和开展生殖生物学机理及生理学基础研究带来新的前景 ,而且将使生物学家有可能从干细胞中得到无数卵子 ,以完善治疗性克隆技术。　　据报道 ,研究人员从出生 3～ 5 d的老鼠身上提取胚胎干细胞 ,然后选出所有能转化为雌性细胞的 ES细胞 ,利用一种特殊荧光试剂通过荧光跟踪其表达情况。他们在观测 ES细胞变化时发现 :…     

鸡胚胎生殖嵴中原始生殖细胞的分离培养研究

在鸡胚孵化的 19期以Ficoll密度梯度离心和酶解离两种方法分离生殖嵴中的原始生殖细胞 (PGCs)。探索在生殖嵴中PGCs分离、培养的适宜方法 ,以获得较多数量 ,较高活力的PGCs作介导生产转基因鸡。在倒置显微镜下进行形态观察 ,台盼兰染色比较存活时间 ,PAS特异染色法识别鉴定PGCs。结果表明两种分离方法均能分离到一定数量的PGCs细胞。与Ficoll密度梯度离心法相比 ,酶解离法分离到的PGCs的相对数量较多 ,存活时间较长 ,是一种较可行的分离方法。在鸡胚孵化的第 19期 ,PGCs大量聚集在肢体后端的生殖嵴原基处 ,此时的生殖嵴大小已达一定程度 ,分离其中的PGCs操作简便 ,有较强的可操作性 ;提取出的PGCs为转基因鸡的生产提供了介导材料