小鼠卵母细胞去核时间对卵丘细胞核移植的影响

对超数排卵的小鼠分别在注射HCG后14~16,16~18,18~20和20~22h采小鼠卵母细胞用于核移植,观察小鼠卵母细胞的去核时间在体细胞核移植中的作用。结果显示,在注射hCG后14~16,16~18,18~20和20~22h,小鼠卵母细胞去核效率分别为80.09%(338/422),73.12%(283/387),55.02%(230/418)和48.74%(193/396);重构胚激活率分别为66.20%(190/287),75.43%(175/232),84.78%(156/184)和85.14%(126/148);重构胚的囊胚发育率分别为13.94%(40/287),7.33%(17/232),3.80%(7/184)和1.35%(2/148)。试验证实小鼠卵母细胞在注射hCG后14~16h进行去核较为适宜。     

小鼠卵母细胞快速去核方法的初步研究

目前,众多的去核方法中主要有几类：化学去核法、显微操作去核法、化学去核法-显微操作去核法相结合的方法,以及徒手切割法、离心去核法等。这些方法中有其优缺点,操作起来比较繁琐和不稳定。本实验的目的是从众多的去核方法中找出一种更适合小鼠卵母细胞去核的方法。     

小鼠卵母细胞去核方法的研究

用 McGrath 和 Solter 的去核方法和改进的胚胎染色体制备技术,研究小鼠卵母细胞去核的基本方法及吸出的胞质量和极体的有无对去核率的影响。实验表明:(1)小鼠卵母细胞透明带弹性很差,去核操作成功率仅53.8%;(2)制备卵母细胞染色体,无需用秋水仙素等处理,直接经2～3min 低渗处理便可使第2次减数发裂中期染色体充分展开;(3)小鼠卵母细胞去核时抽1/4胞质的染色体全部去除率(49%)和抽1/3胞质的(54%)差异未达到显著水平(P>0.05);(4)注射 HCG 后15～16h 获取的小鼠卵母细胞,只有1/3左右具有明显的第1极体;抽取无极体卵母细胞之卵周隙较大一侧的细胞质,去核率与见极体卵母细胞的无明显差异。     

不同因素对小鼠MII期卵母细胞纺锤体的影响

[目的]研究在不同条件下小鼠MⅡ期卵母细胞纺锤体的变化,为卵母细胞纺锤体的研究提供参考依据.[方法] 在不同条件下处理小鼠MⅡ期卵母细胞,通过免疫细胞化学方法和激光共聚焦扫描显微镜观察其纺锤体变化.[结果]卵母细胞在25 ℃、20 min时纺锤体异常,25 ℃、30 min或4 ℃、10 min时纺锤体缺失;5、10、20和40 μg/ml细胞松弛素B (CB)作用2 h未对纺锤体产生影响;卵母细胞在20 μmol/L秋水仙素中作用1 h纺锤体异常,40 μmol/L时作用1 h纺锤体缺失;在4%多聚甲醛中4 ℃条件下,卵母细胞纺锤体结构以固定时间为1～12 h效果较好.[结论]小鼠MⅡ期卵母细胞纺锤体对外界环境变化敏感,体外操作时控制外部环境是保持卵母细胞纺锤体正常生理功能的关键.     

不同因素对小鼠MⅡ期卵母细胞纺锤体的影响

[目的]研究在不同条件下小鼠MⅡ期卵母细胞纺锤体的变化,为卵母细胞纺锤体的研究提供参考依据。[方法]在不同条件下处理小鼠MⅡ期卵母细胞,通过免疫细胞化学方法和激光共聚焦扫描显微镜观察其纺锤体变化。[结果]卵母细胞在25℃、20 min时纺锤体异常,25℃、30 min或4℃、10 min时纺锤体缺失;5、10、20和40μg/ml细胞松弛素B(CB)作用2 h未对纺锤体产生影响;卵母细胞在20μmol/L秋水仙素中作用1 h纺锤体异常,40μmol/L时作用1 h纺锤体缺失;在4%多聚甲醛中4℃条件下,卵母细胞纺锤体结构以固定时间为1~12 h效果较好。[结论]小鼠MⅡ期卵母细胞纺锤体对外界环境变化敏感,体外操作时控制外部环境是保持卵母细胞纺锤体正常生理功能的关键。     

哺乳动物卵母细胞去核方法的研究进展

随着"多莉"羊的诞生,体细胞克隆技术近年来发展迅速,并获得了一大批克隆动物.但克隆动物的效率仍然偏低,这与克隆技术各个环节的完善程度有关,卵母细胞的去核就是其中的重要环节之一.本文对近年来常见的几种卵母细胞去核方法作了详尽的论述,以期为该领域的科研工作者提供参考.     

小鼠卵母细胞去核方法的初步研究

[目的]寻求既简单又有效的提高小鼠卵母细胞去核率的方法。[方法]分别采用3种不同的方法(盲吸法、点击法、负压-点压法),研究对MII期小鼠卵母细胞去核率的影响。[结果]结果表明,采用负压-点压法去核,其卵母细胞的去核率可达62.8%,与其他两种方法所获得的去核率差异显著(P<0.05)。[结论]负压-点压法是一种简单、有效的小鼠卵母细胞去核方法。     

影响哺乳动物卵母细胞去核效率的因素

影响哺乳动物卵母细胞去核效率的因素很多。本文就显微操作工具、去核方法、卵母细胞胞质去除的数量、细胞松弛素B（CB）的添加以及卵母细胞体外培养时间等方面对卵母细胞去核率的影响进行了分析探讨。     

昆明白小鼠卵母细胞去核研究

为了提高昆明白小鼠MⅡ期卵母细胞的去核效率及质量,该研究在不同条件下,比较了小鼠卵母细胞的去核效果:将小鼠MⅡ期卵母细胞放入含蔗糖浓度分别为0.01、0.02、0.03 g/mL的M2-液微滴中,在体式显微镜下观察显核效果以确定最佳浓度;将有清晰可见细胞核的卵母细胞放入含细胞松弛素B(Cytocha-lasin-B,CB)浓度分别为5、7.5、10μg/mL操作液中去核,显微镜下确定去核率。结果表明:操作液中加入蔗糖浓度为0.02g/mL时显核效果最好;去核时操作液中细胞松弛素B浓度为10μg/mL时去核死亡率最低。     

卵母细胞体外成熟时间对绵羊核移植效率的影响

[目的]为绵羊克隆试验中卵母细胞的体外成熟及去核时间提供参考。[方法]利用盲吸法结合荧光显微镜检查,对绵羊不同成熟时间卵母细胞去核的效率及其后续重构胚的发育进行对比。[结果]体外成熟培养19~21 h的绵羊卵母细胞在成熟率上显著高于体外成熟培养16~18 h(P(0.05),在去核成功率上显著高于体外成熟培养22~24 h(P(0.05);3个试验组在卵裂率、囊胚率上差异不显著(P(0.05),但是体外成熟培养19~21 h的试验组囊胚平均细胞数要显著高于其他2组(P(0.05)。[结论]体外成熟培养19~21 h的卵母细胞较适于作为受体细胞进行绵羊核移植,可以显著提高囊胚的质量。     

卵母细胞体外成熟时间对绵羊核移植效率的影响(英文)

[Objective] The study aimed to provide references for the time of oocyte maturation in vitro and enucleation in the course of sheep nuclear transfer(NT).[Method] Compared the effects of different maturation time of oocytes on enucleation efficiency and reconstructed embryo development by means of blind enucleation and fluorescence microscopy.[Result] Treatment of IVM(in vitro maturation)19-21 h was significantly higher than IVM 16-18 h treatment in oocyte maturation rate(P<0.05)and was significantly higher than IVM 22-24 h treatment in enucleation rate(P<0.05).Three treatments had no significant difference in cleavage rate and blastocyst rate(P>0.05),but IVM 19-21 h treatment was significantly higher than the other 2 treatments in average cell number of blastocysts(P<0.05).[Conclusion] The appropriate in vitro maturation time of oocytes was 19-21 h for sheep nuclear transfer,which could significantly improve the quality of blastocysts according to the cell number per blastocyst(P<0.05).     

卵母细胞体外成熟时间对绵羊核移植效率的影响(英文)

[Objective] The study aimed to provide references for the time of oocyte maturation in vitro and enucleation in the course of sheep nuclear transfer(NT).[Method] Compared the effects of different maturation time of oocytes on enucleation efficiency and reconstructed embryo development by means of blind enucleation and fluorescence microscopy.[Result] Treatment of IVM(in vitro maturation)19-21 h was significantly higher than IVM 16-18 h treatment in oocyte maturation rate(P<0.05)and was significantly higher than IVM 22-24 h treatment in enucleation rate(P<0.05).Three treatments had no significant difference in cleavage rate and blastocyst rate(P>0.05),but IVM 19-21 h treatment was significantly higher than the other 2 treatments in average cell number of blastocysts(P<0.05).[Conclusion] The appropriate in vitro maturation time of oocytes was 19-21 h for sheep nuclear transfer,which could significantly improve the quality of blastocysts according to the cell number per blastocyst(P<0.05).     

Effects of in Vitro Maturation Time of Oocytes on Sheep Nuclear Transfer Efficiency

[Objective] The study aimed to provide references for the time of oocyte maturation in vitro and enucleation in the course of sheep nuclear transfer(NT).[Method] Compared the effects of different maturation time of oocytes on enucleation efficiency and reconstructed embryo development by means of blind enucleation and fluorescence microscopy.[Result] Treatment of IVM(in vitro maturation)19-21 h was significantly higher than IVM 16-18 h treatment in oocyte maturation rate(P<0.05)and was significantly higher than IVM 22-24 h treatment in enucleation rate(P<0.05).Three treatments had no significant difference in cleavage rate and blastocyst rate(P>0.05),but IVM 19-21 h treatment was significantly higher than the other 2 treatments in average cell number of blastocysts(P<0.05).[Conclusion] The appropriate in vitro maturation time of oocytes was 19-21 h for sheep nuclear transfer,which could significantly improve the quality of blastocysts according to the cell number per blastocyst(P<0.05).     

生长激素和胰岛素对猪卵母细胞体外成熟及卵裂的影响

研究了生长激素(STH)、胰岛素(insulin)单独或者联合作用对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活后卵裂的影响。结果表明:STH、胰岛素对卵母细胞体外成熟及孤雌激活后卵裂呈现双重效应。在mNCSU-23基础液中添加0.15μg/mLSTH组的成熟率和卵裂率显著高于对照组及0.01,0.05,0.1,2μg/mL组(P<0.05);添加5μg/mL,8μg/mL胰岛素组的成熟率显著高于对照组及0.5,2,10μg/mL组;添加5μg/mL胰岛素组的卵裂率也显著高于对照组及0.5,2,8,10μg/mL组;0.15μg/mLSTH与2μg/mL胰岛素联合添加组的成熟率和卵裂率最高,同其他组相比,差异显著。     

猪卵母细胞孤雌激活的研究

从卵母细胞孤雌激活的机制及影响因素,猪卵母细胞的激活,猪孤雌胚死亡主要原因,提高卵母细胞孤雌激活效果的技术途径,以及对孤雌激活的研究意义和发展前景等方面,对猪卵母细胞孤雌激活研究进行了综述.     

铬对小鼠卵母细胞凋亡及DNA损伤的影响

利用人工水质染毒的方法,采用组织切片、透射电镜和单细胞凝胶电泳(彗星实验)技术,观察小鼠卵母细胞的超微结构变化及DNA损伤状况,从形态学角度研究不同剂量铬对小鼠雌性生殖细胞凋亡及DNA损伤的影响,目的在于探讨三价铬的繁殖毒性.实验设置对照组及3个处理实验组,分别饮用添加0.24、0.48和0.72 mmol·L-1三氯化铬的纯净水,对照组小鼠饮用纯净水,30d后取材观察.结果表明:除实验一组外,各实验组中小鼠卵母细胞处于凋亡时期的数量显著高于对照组,凋亡时期的卵母细胞超微结构呈现出线粒体空泡、核膜内陷、染色质周缘化及核固缩等现象.高剂量处理(0.72 mmol·L-1)组彗星比率为21.35%、尾部DNA含量为17.53%、Olive尾矩(OTM)为3.92,均显著高于对照组,而头部DNA含量(82.47%)显著低于对照组(94.15%XP相似文献