黄土高原地区葡萄酒花色苷成分的HPLC-MS分析

以晋西黄土高原地区四个单品种(赤霞珠、品丽珠、蛇龙珠和梅鹿辄)葡萄酒为研究对象,利用光谱和液相色谱-质谱(HPLC-MS)技术对其理化指标和花色苷成分进行测定和分析。结果表明:赤霞珠酒的总酚含量和蛇龙珠酒的总花色苷含量最高;在四个品种的葡萄酒中共检测中36种花色苷物质,其中包括5种花色苷单体,15种花色苷衍生物和16种聚合花色苷,并且有32种物质在四个品种的酒样中同时被检出。蛇龙珠酒中5种花色苷单体含量最高,其它三个品种较为接近。品种和生态条件能对葡萄酒的酚类物质总量及花色苷的组成和含量造成不同程度的影响。     

山葡萄果实发育过程中花色苷含量变化研究

以山葡萄左红一果实为试材,应用HPLC-MS/MS技术,对山葡萄果实发育过程中花色苷种类及含量变化进行了研究。结果表明,转色期前果皮内没有花色苷积累,随着果实成熟,花色苷含量逐渐增加,成熟期含量最高;在山葡萄果实发育过程中检测出花色苷13种,其中双糖苷6种、单糖苷7种。     

不同品种山葡萄果皮和酒中非花色苷酚的成分分析

以7个品种山葡萄为试验材料,应用HPLC-MS/MS技术,分析不同品种山葡萄果皮和酒中非花色苷酚成分的差异,以期为山葡萄酒的加工及品种选育提供借鉴。结果表明,不同品种山葡萄果皮非花色苷酚质量分数和酒中非花色苷酚质量浓度及其组成比例不同,其组成具有品种特征,肉桂酸类和黄酮醇类是山葡萄果皮及酒非花色苷酚的主要化合物,左优红酒与之不同,以黄烷-3-醇类和肉桂酸类为主。果皮中共检测出18种非花色苷酚,其中左山一12种,左山二12种,左红一15种,左优红15种,双红13种,双优10种,双丰10种。酒中共检测出30种非花色苷酚,其中左山一21种,左山二19种,左红一20种,左优红25种,双红21种,双优17种,双丰20种。     

不同年份及产区红葡萄酒花色苷组成分析

【目的】分析花色苷与葡萄酒年份及产区的关系,为葡萄酒感官品鉴提供依据。【方法】以二甲花翠素-3-O-葡萄糖苷为标准样品,利用高效液相色谱分析法,对来自不同产区的45款不同年份酿制的红葡萄酒的花色苷组成及其质量浓度进行测定分析。【结果】在45种不同年份酿制且来自不同产区的红葡萄酒中,共测定出花翠素-3-O-葡萄糖苷、花青素-3-O-葡萄糖苷、3′-甲花翠素-3-O-葡萄糖苷、甲基花青素-3-O-葡萄糖苷、二甲花翠素-3-O-葡萄糖苷、甲基花青素-3-O-(6-O-乙酰)葡萄糖苷、二甲花翠素-3-O-(6-O-乙酰)葡萄糖苷、甲基花青素-3-O-(6-O-对香豆酰)葡萄糖苷、二甲花翠素-3-O-(6-O-对香豆酰)葡萄糖苷等9种花色苷,其中二甲花翠素-3-O-葡萄糖苷和二甲花翠素-3-O-(6-O-乙酰)葡萄糖苷为主要单体花色苷,分别占总花色苷的50%和15%,是葡萄酒的主要2种呈色物质。葡萄酒花色苷与其年份和产区有一定的相关性。【结论】不同酒样单体花色苷组成及质量浓度存在显著差异,其与酒样的生产年份、葡萄品种、产区均有一定相关性。     

映山红花瓣花色苷成分组成分析

为了加深对映山红花色形成机制的认识,以7 个不同花色的映山红（Rhododendron simsii）株系为材料,研究了映山红花瓣花色苷的组成。分别利用英国皇家园艺学会比色卡和国际照明委员会表色系统对映山红花瓣的颜色进行了描述;通过UPLC-Q-TOF-MS 技术鉴定了7个映山红株系花瓣中花色苷的种类,并结合标准曲线法进行了相对定量分析。7个映山红株系按花色可分为3个组：红色组、紫红色组和紫色组。在映山红的花瓣中共鉴定出了11种花色苷成分,分别为：矢车菊素3-O-阿拉伯糖苷、矢车菊素3-O-葡萄糖苷、矢车菊素3-O-半乳糖苷、飞燕草素3-O-阿拉伯糖苷、飞燕草素3-O-葡萄糖苷、锦葵素3-O-阿拉伯糖苷、锦葵素3-O-葡萄糖苷、芍药花素3-O-阿拉伯糖苷、芍药花素3-O-葡萄糖苷、牵牛花素3-O-阿拉伯糖苷和牵牛花素3-O-葡萄糖苷。红色组花瓣中主要含有矢车菊素类糖苷与芍药花素类糖苷,紫色组花瓣中主要含牵牛花素类糖苷和锦葵素类糖苷,且红色组花瓣总花色素含量远高于紫红色和紫色花组,这表明在红色系中可能存在一些转录因子上调花色素生物合成途径或关键基因。     

1种利用花色苷HPLC图谱鉴别添加合成着色剂葡萄酒的方法

利用花色苷高效液相色谱(HPLC)方法对葡萄酒进行分析,以建立鉴别葡萄酒中添加合成色素的方法.采用HPLC法分析全汁赤霞珠葡萄酒与掺水葡萄酒中花色素苷种类和含量,结果表明:赤霞珠葡萄酒中典型的花色素苷化合物的HPLC色谱丰度很强,典型性好;而添加人工合成色素的葡萄酒色谱峰丰度非常弱,峰面积和高度都很小.花色素苷HPLC图谱方法是一种鉴别掺水葡萄酒简便、准确的方法.     

苹果、葡萄花色苷生物合成研究进展

介绍了苹果、葡萄中花色苷的种类、定位及积累规律,花色苷的生物合成途径及其调控位点,花色苷合成的有关酶类及其结构基因,提出了今后需探讨和解决的一些问题。     

HPLC-ESI-MS~n分析不同品种山葡萄中花色苷成分

采用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-ESI-MSn)对不同品种山葡萄中5种花色苷成分进行快速定量分析研究,比较5个山葡萄品种样品中花色苷的含量差异。色谱柱:PFP Kinetix(2.1mm×50mm,2.6μm);流动相:2%甲酸水溶液-2%甲酸乙腈溶液梯度洗脱;质谱负离子模式检测;选用多离子反应通道监控模式(MRM)。结果显示,该方法准确、快速、重现性好、分辨率高,可很好地用于山葡萄及相关产品中花色苷单糖苷的定量分析。     

不同叶幕夹角对不同瓶储期桂葡6号葡萄酒花色苷组成及含量的影响

[目的]明确叶幕夹角对不同瓶储期桂葡6号葡萄酒花色苷组成及含量的影响,为提高桂葡6号酿酒品质提供参考依据.[方法]采用高效液相色谱(HPLC)检测桂葡6号葡萄酒花色苷类物质的含量及比例随瓶储期(1个月、3个月、6个月和9个月)延长的变化,分析不同叶幕夹角(0°、30°、45°和60°)对桂葡6号葡萄酒花色苷组成及含量的影响,并对不同叶幕夹角酒样在4个瓶储期的花色苷总量及各类花色苷含量进行K-means聚类分析,对各种修饰类型花色苷含量进行判别分析.[结果]在4个瓶储期,不同叶幕夹角处理的桂葡6号葡萄酒中共检测出18种花色苷,包括7种花色素双糖苷及其酰化衍生物、4种花色素单糖苷及其酰化衍生物和2种聚合花色苷,各类花色苷含量及花色苷总量变化大致聚为四大类.不同叶幕夹角对瓶储阶段葡萄酒花色苷组成和含量的影响存在差异.0°和45°叶幕夹角处理桂葡6号葡萄酒在4个瓶储期的花色苷总量和大多数种类花色苷含量总体上高于30°和60°夹角处理.4个瓶储期中,60°叶幕夹角酒样中酰化和聚合类花色苷比例总体上高于其他3个叶幕夹角处理酒样.4个叶幕夹角酒样的红—绿色调(a*)和色度(C*)随瓶储期延长而下降,黄—蓝色调(b*)随瓶储期延长而上升,且以45°酒样的b*增幅最大,黄色调加深;而30°夹角处理酒样的红色调更强,颜色更深.判别分析结果表明,瓶储期1和瓶储期2的4个叶幕夹角酒样聚为一类,瓶储期3和瓶储期4聚为一类;对花色苷总量贡献排名前5的修饰花色苷含量排序为酰化>聚合类>花翠素>单糖苷>单体,其中酰化、花翠素、单糖苷和单体花色苷含量均随瓶储期的延长而下降,聚合类花色苷含量则随瓶储期的延长而上升.[结论]0°和45°叶幕夹角对桂葡6号葡萄酒的颜色稳定性有积极作用.     

山葡萄无色花色素双加氧酶基因（LDOX）cDNA的克隆与表达

为获得山葡萄LDOX基因的全长序列,采用RT-PCR与SMART RACE技术克隆LDOX基因,并对该基因进行生物信息学分析。结果显示,山葡萄LDOX基因全长1 353bp,其中开放阅读框(ORF)为1 068bp,编码355个氨基酸,氨基酸序列的分子质量为40.19ku,等电点为5.61;VAmLDOX基因(GenBank登陆号:FJ645769)属于双加氧酶基因家族,不含信号肽,VAmLDOX蛋白属于不稳定亲水蛋白,二级结构中随机卷曲含量最高;山葡萄VAmLDOX氨基酸序列与欧亚种葡萄、苹果、大豆、三花龙胆和紫苏等的同源性系数分别为99%、81%、80%、77%和75%;半定量RT-PCR分析显示,在山葡萄果实着色过程中,VAmLDOX在不同时期的果皮中均有表达,在转色期的叶片、茎、果肉中也均有表达,且表达量相近。     

山葡萄C4H基因的克隆表达及遗传转化分析

通过生物学技术来研究C4H基因在山葡萄着色过程中的作用,进而揭示山葡萄果皮着色的分子机理;利用RT-PCR技术克隆了山葡萄C4H基因的全长cDNA序列,并对该蛋白进行生物信息学分析,预测其功能;利用实时荧光定量PCR检测C4H基因在山葡萄8个不同转色时期的表达量,将克隆获得的山葡萄C4H基因完整的ORF连接到原核表达载体pET28a上,转化到大肠杆菌E.coli BL21(DE3),并通过不同浓度的IPTG诱导表达, SDS-PAGE检测表达产物.为了验证山葡萄C4H基因的功能,构建了表达载体pC C4H并转化农杆菌GV3101.用菌液浸泡花序法对拟南芥进行遗传转化,在含50 mg/L Kan的培养基上对T_0代种子进行筛选.克隆获得的山葡萄C4H cDNA全长1 735 bp,开放阅读框1 518 bp,编码505个氨基酸,该基因表达产物分子质量为57.70 KDa,等电点值9.06.C4H基因在山葡萄果皮转色各个时期均存在表达;该基因原核表达产物与预期大小一致,表明原核表达成功,拟南芥遗传转化先后得到3个阳性幼苗.对移栽成活的2株抗性植株进行PCR检测为阳性, 2株叶片颜色均变成紫红色;经花色素苷质量浓度的测定表明其质量浓度比对照组植株高出3倍.在拟南芥中花色素苷质量浓度虽然较低,但还是能少量合成,说明其花色素苷生物合成途径是开通的,只是积累的量较少.     

环塔盆地不同山葡萄品种果实品质间的差异

为山葡萄在环塔盆地生态区域的选育、推广应用提供科学理论依据,建立8个新疆山葡萄果实综合评价体系。以2019-2021年田间表现良好的山葡萄‘北冰红’‘双红’‘左优红’‘雪兰红’‘双丰’‘北国红’‘左山1’和‘左山2’为试材,测量果实23项外观及理化品质指标,按照测量结果进行描述性统计和主成分分析,根据综合得分进行排名。结果表明,23项果实品质指标变异程度不同,其中白藜芦醇、果形指数、Zn含量和花色苷变异程度较大,超过50%;果穗质量、原花青素、固酸比和Fe含量变异程度一般,为30%~50%;其他果实品质指标变异程度较小（<30%）。因子分析提取出6个特征根>1的公因子,累计方差贡献率达 97.839%,公因子PC₁贡献率达22.154%,主要由pH、果实纵径、横径、单果质量、单果体积和果穗质量决定,主要反映果实外观品质;公因子PC₂贡献率达20.987%,由可溶性固形物、总糖、糖酸比、固酸比和Mn含量5个因子决定,主要反映果汁的糖度;公因子PC₃贡献率为19.820%,由Ca、Mg和Cu含量3个因子决定,主要反映矿质元素含量。公因子PC₄贡献率为19.117%,由花色苷、总酸和果形指数3个因子决定,主要反映果汁色泽、酸度和果实形状;公因子PC₅贡献率为8.293%,由原花青素和总黄酮2个因子决定,主要反映果实的营养状况;公因子PC6贡献率为7.467%,由白藜芦醇和Zn含量2个因子决定,主要反映白藜芦醇和Zn含量的高低情况。山葡萄果实品质综合得分排序由高到低依次是：‘北冰红’‘左优红’‘雪兰红’‘左山2’‘北国红’‘双丰’‘双红’‘左山1’。     

山葡萄及其种间杂种的酿酒特性研究

【目的】研究山葡萄及其种间杂种的酿酒特性。【方法】以吉林省柳河地区3个山葡萄品种(双红、双优、左山一)和1个杂种(公酿1号)为材料,对其成熟度控制和生理成熟时的果穗结构进行研究,并探讨了霜冻及冰冻对山葡萄果实还原糖和总酸含量及果穗的影响。【结果】浆果达到生理成熟时,供试品种的还原糖含量均较低,而总酸含量均较高,双红、双优、左山一和公酿1号的还原糖含量分别为151.0,136.8,129.0和184.5 g/L,总酸含量分别为20.9,18.6,25.0和17.6 g/L。达到生理成熟的果穗中,4种葡萄中除公酿1号的果梗含量(35.5 g/kg)较低外,其余品种果梗、果皮和种子及公酿1号的果皮和种子含量均远大于一般酿酒品种。在霜冻及冰冻条件下,供试葡萄果实的还原糖、总酸含量均呈上升趋势,可通过霜冻和冰冻的方法提高山葡萄及其杂种的还原糖含量。【结论】供试品种浆果生理成熟后,公酿1号含糖量能满足酿造优质葡萄酒的要求,双红、双优浆果通过霜冻及冰冻处理后,也能达到酿造优质葡萄酒的要求。公酿1号不能作为冰酒酿造原料。     

干旱环境下山葡萄光合和叶绿素荧光参数比较

为了筛选适合在南疆干旱区推广种植的山葡萄品种,在大田试验条件下,以‘北冰红’‘北国红’‘左优红’‘雪兰红’‘双红’和‘双丰’为材料,采用Li-6400便携式光合仪和PAM-2500叶绿素荧光仪测定不同山葡萄品种的光合和叶绿素荧光参数,并测定供试品种的干物质积累量等12项适应性指标。采用隶属函数法对数据进行标准化,对待测指标基于因子分析法综合评价。结果表明：不同适应性指标变异程度各异,其中干物质积累量、P_n、T_r和ETR变异程度较高,超过30%,C_i、F_v/F_m和q_N变异程度较小;因子分析提取出3个特征根>1的公因子,累计方差贡献率达91.737%,能够全面反映生长适应性效果优劣;‘北冰红’得分最高,干物质积累量、P_n、WUE和F_v/F_m均最高;‘左优红’次之,干物质积累量、P_n、WUE和F_v/F_m等指标仅次于‘北冰红’;...     

山葡萄类黄酮-5-O-葡萄糖基转移酶基因(5GT)的克隆表达及遗传转化分析

为探究5GT基因在山葡萄花色苷合成过程中的表达规律及作用,以山葡萄(Vitis amurensis)为材料,利用RT-PCR技术克隆山葡萄5GT基因的全长cDNA序列(GenBank登录号为GU237133),将该基因命名为Vam5GT并对该蛋白进行生物信息学分析预测其功能;利用实时荧光定量PCR检测Vam5GT基因在山葡萄8个不同转色时期的表达规律,将克隆获得的Vam5GT基因完整的ORF连接到原核表达载体pET28a上,转化到大肠杆菌E.coli Bl2(DE3),并通过不同浓度的IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测表达产物。并构建表达载体pC5GT并转化农杆菌GV3101.用菌液浸泡花序法对拟南芥进行遗传转化。结果显示:克隆获得的Vam5GT cDNA全长1 497 bp,开放阅读框1 347 bp,编码448个氨基酸,该基因表达产物相对分子质量为49.84 ku,等电点为5.23,是不稳定蛋白。该基因属于UDPGT超基因家族,不包含信号肽。Vam5GT在山葡萄花后4周的果皮中表达丰度最高,其他时期表达逐渐下降;该基因原核表达产物与预期大小一致,表明原核表达成功,在含50 mg/L Kanomycin的培养基上对拟南芥T_0代种子进行筛选,先后得到2个阳性幼苗,转化率为0.05%。对移栽成活的2株抗性植株进行PCR检测为阳性。     

酒酒球菌在不同模拟酒培养基中的降酸效果研究

【目的】选择一种成分简单、降酸效果好的模拟酒培养基,为后续的苹果酸-乳酸发酵研究奠定基础。【方法】利用高效液相色谱等方法,分别测定不同时段酒酒球菌31 MBR和SD-2a在A、B、C、D4种模拟酒培养基中的L-苹果酸、L-乳酸质量浓度及pH值和OD值,研究不同培养基中L-苹果酸的降解效果。【结果】酒酒球菌31 MBR在A、B、D 3种培养基中的降酸效果基本一致,在第4天时L-苹果酸的降解率分别为90.75%,89.47%和91.92%,在C培养基中降解率稍低,为79.99%;SD-2a在B、D 2种模拟酒培养基中的降酸效果基本一致,第4天时L-苹果酸降解率分别为94.32%和91.49%,而在A、C 2种模拟酒培养基中降酸较慢,第4天时的L-苹果酸降解率分别为51.24%和69.21%。液相色谱分析表明,酒酒球菌31 MBR和SD-2a在A、B培养基中培养,均能够获得分离效果较好的色谱图。【结论】A培养基适于酒酒球菌31 MBR的苹果酸-乳酸发酵,B培养基适于酒酒球菌SD-2a的苹果酸-乳酸发酵。     

葡萄VviSEP2基因的克隆及表达分析

【目的】克隆葡萄VviSEP2基因的完整开放阅读框(ORF)序列,明确其与胚珠败育型无核葡萄胚珠败育的关系。【方法】通过RT-PCR技术在‘无核白’葡萄中克隆葡萄VviSEP2基因的完整ORF序列,并对该序列及其编码产物进行生物信息学分析,采用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR技术分析VviSEP2的表达模式。【结果】克隆得到一个无核葡萄胚珠发育相关基因,该基因cDNA序列长度为1 132bp,ORF为741bp,编码246个氨基酸。氨基酸多序列比对和进化树分析确认,该基因是E类MADS-box基因家族成员,命名为VviSEP2。表达分析结果表明,VviSEP2只在花蕾、花和胚珠中有表达,而在根、茎、叶中无表达,并且该基因在有核葡萄‘黑比诺’花与花蕾中的相对表达水平明显高于无核葡萄‘无核白’,同时VviSEP2基因在‘黑比诺’胚珠发育各时期的相对表达水平均高于‘无核白’,为后者的3~5倍。【结论】VviSEP2基因与无核葡萄的胚败育可能存在一定关系。     

果实套袋对赤霞珠干红葡萄酒总酚和色度的影响

【目的】研究套袋对葡萄酒总酚和色度的影响,为套袋技术在酿酒葡萄中的应用提供理伦依据。【方法】选取白色单层纸袋和黄色单层纸袋,对赤霞珠(Cabernet Sauvignon)葡萄进行套袋处理,共设8个处理:白色纸袋幼果期套袋、采收前1周除袋(WOO),白色纸袋幼果期套袋、采收前2周除袋(WOT),白色纸袋转色期套袋、采收前1周除袋(WVO),白色纸袋转色期套袋、采收前2周除袋(WVT),黄色纸袋幼果期套袋、采收前1周除袋(YOO),黄色纸袋幼果期套袋、采收前2周除袋(YOT),黄色纸袋转色期套袋、采收前1周除袋(YVO),黄色纸袋转色期套袋、收前2周除袋(YVT),以不套袋为对照,于葡萄收获后,采用传统工艺酿制干红葡萄酒,测定赤霞珠葡萄果实的总酚和总花色素含量及其干红葡萄酒的总酚和色度。【结果】(1)套袋处理降低了赤霞珠葡萄果实总酚和总花色素的含量,不同纸袋、套袋时间和除袋时间存在显著差异,白色单层纸袋优于黄色单层纸袋。YOO、YOT、YVO、YVT处理的赤霞珠葡萄果实总酚含量分别较对照减少了43.47%,24.63%,32.03%和37.20%;总花色素含量分别较对照减少了43.26%,16.10%,65.02%和47.37%。(2)使用白色单层纸袋和黄色单层纸袋在幼果期套袋、采收前2周除袋处理的赤霞珠干红葡萄酒的总酚含量分别较对照提高了15.86%和15.65%;白色单层纸袋在幼果期与转色期套袋、采收前2周除袋的处理赤霞珠干红葡萄酒的色度分别较对照增加了17.75%和17.17%。【结论】在赤霞珠葡萄幼果期(果粒黄豆大小时)用白色单层纸袋进行套袋,于采收前2周除袋,可以提高干红葡萄酒的品质。     

葡萄病理性病害研究进展

病害是葡萄生产的主要限制因素之一,直接影响葡萄的产量和品质,进而影响果园生态系统的健康持续发展。本文通过对国内外相关文献的回顾,从葡萄病害的病原菌、病害发生规律及防治措施等方面加以综述,分析我国葡萄病理性病害及其防治中存在的主要问题,探讨我国葡萄病害研究方面亟待开展的工作,为葡萄病理性病害的深入研究与可持续管理提供基础资料,也为我国葡萄高产优质高效生产提供理论依据。