广西猪源I型副粘病毒F基因测序分析

对广西猪源I型副粘病毒F基因测序分析,为今后开展猪源副粘病毒的相关研究提供参考,也为有效防控副粘病毒感染奠定基础。参考GenBank发表的相关禽副粘病毒I型（Avian paramyxovirus serotypeI,APMVx）基因组序列,设计了1对特异性引物,用RT—PCR法分别扩增出病毒各F基因片段,并将目的基因片段回收纯化。测定得F基因的序列结果表明,从猪组织中分离获得1株猪源禽I型副粘病毒,分离株F基因112～117住裂解住点的氨基酸组成为R—R—Q－R—R-F,与强毒株DQ417113、AF458012的裂解位点一致。同源性分析结果表明,分离株与标准强毒株的核苷酸同源性分别为87．5％和87．4％。猪源禽I型副粘病毒分离株为强毒株,属于基因I型是传统型毒株,广西地区禽I型副粘病毒宿主范围呈不断扩大趋势。     

半番鸭源禽1型副粘病毒FM01株的分离鉴定与F蛋白基因分析

从表现类似新城疫症状的病死半番鸭中分离到1株病毒FM01株，经血凝及血凝抑制试验证实为禽1型副粘病毒、以SPF鸡胚测定其平均致死时间为113，4h，对1d雏鸡脑内接种致病指数为0．23，表明为温和型毒株。利用RT-PCR技术一次性扩增其F蛋白全基因，克隆到pMD 18-T质粒载体，测序后获得F基因全序列，并推导出其相应的氨基酸序列。FM01株的F蛋白基因完整的编码区全长1662bp，编码553个氨基酸，其裂解位点的氨基酸序列为112G-R-Q-G-R-L117，具有温和型毒株特有的氨基酸序列结构．与常见新城疫毒株的核苷酸同源性在88．4％～99.6％之间，氨基酸同源性在89．2％～99.1％之间。     

山东地区三株鸽Ⅰ型副粘病毒的分离及鉴定

2005年在山东地区部分肉鸽养殖场出现鸽子大量死亡现象,从死亡鸽中分离到三株鸽Ⅰ型副粘病毒(SD05027,SD05028,SD05029),其鸡胚平均死亡时间(MDT)分别为69h,69.6h,81.6h;鸡脑内接种指数(ICPI)为1.31,1.43,1.48,证明此次分离的三株病毒株均属速发型新城疫病毒。应用RT-PCR技术对F基因重要功能区片段扩增后进行序列测定,分析表明,F蛋白裂解位点处的序列(112R/K-R-Q-K-R-117F)与新城疫强毒在这一区域的序列相符。与多株已报道的NDV参考株相应片段进行序列比对和基因进化树分析,将其鉴定为基因VIb型。     

猪源性肺炎克雷伯菌的分离鉴定

肺炎克雷伯菌是一种严重威胁人类和经济类动物健康的条件性致病菌,可引发患病动物的多种器官组织病变,严重威胁着畜禽养殖业的发展。笔者采集了新疆阿克苏地区某养殖场中以高热,腹泻,呼吸困难,两耳皮肤发绀为临床特征仔猪的心、肺、淋巴等病料。对病料进行了细菌分离培养,通过菌落形态观察、16S rRNA基因测序对分离得到的菌株进行鉴定,最终获得1株猪源性肺炎克雷伯菌。继而对该菌涂板进行药敏试验,结果显示,该菌株具有较强的耐药性,对氯霉素、红霉素、利奈唑胺、利福平、四环素、复方新诺明、庆大霉素、克林霉素、诺氟沙星、头孢噻吩均耐药。本次试验为猪源性肺炎克雷伯菌的分离鉴定及进一步研究Kpn耐药机制和致病机理奠定了基础。     

猪圆环病毒2型青海分离株的分子鉴定及进化分析

本研究对青藏高原地区猪圆环病毒青海分离株(PCV2-QH1)进行了Cap基因的克隆鉴定及测序分析,并与我国及其他国家或地区的毒株进行了同源性比较和遗传进化分析。结果显示:PCV2-Cap基因核苷酸序列全长705 bp,编码蛋白为234个氨基酸,分子量大小约28.06 k Da,为不稳定蛋白,总体亲水性非常高,可溶于水;PCV2-Cap蛋白二级结构以无规则卷曲为主,有多个有效的抗原表位;PCV2-QH1分离株与其他参考序列的核苷酸和氨基酸序列同源性均在99%以上;PCV2-QH1分离株与PCV2美国分离株(KU697156)组成一个微小分支,并与美国毒株、韩国毒株聚在一支,表明它们之间的亲缘关系最近。本次对青海分离株PCV2-QH1的鉴定,可为我国猪圆环病毒分子流行病学调查提供数据参考。     

关于猪源链球菌的分离与鉴定思考

猪链球菌病指的是有多种致病链球菌感染所引起的一种人畜共患病,其主要特征为败血症、脑膜炎和关节炎等,是造成养殖户减产的主要原因之一,若没有及时控制和治疗,还会威胁人的生命安全,给家庭和社会造成难以挽回的损失.当前,受市场因素的影响,当前我国养猪业不断发展和壮大,猪链球菌病的发病率随之升高.本文从某养猪场内分离到的多猪链球菌为研究对象,对其进行了分离和鉴定,系统的分析了猪源链球菌的病原学特性,希望能够为养猪业的稳定发展提供一些参考.     

猪流行性腹泻病毒SZ株的分离与鉴定

从资阳某猪场发生腹泻症状的猪肠道内容物中分离得到一株病毒,经荧光检测、RT-PCR检测及序列分析鉴定后,证实该分离株为猪流行性腹泻病毒,命名为SZ株。PCR方法克隆S基因的部分片段,序列分析结果表明PCR扩增的部分S基因与其他毒株比对,结果表明与CH/XJUrumqi及韩国AF500215 S1的亲缘关系较近。     

国内猪源睾丸酮丛毛单胞菌的分离与鉴定

为查明2018年8月云南省曲靖市富源县某规模化猪场发生母猪产死胎、弱仔猪的病因,本试验采集弱仔猪内脏组织病料进行病原菌的分离培养、生化鉴定、16S rRNA扩增、药敏试验及致病性试验。结果显示,从弱仔猪大脑组织内分离培养出1株菌落形态呈圆形、半透明的革兰氏阴性短杆菌。生化鉴定结果显示,衣康酸盐同化（ITA）、辛二酸盐同化（SUB）、乙酸盐（ACE）、DL-乳酸盐同化（LAT）、丙酸盐同化（PROP）、3-羟基-丁酸盐（3OB）、脯氨酸（PRO）生化反应结果呈阳性;丙氨酸同化（ALA）、D-甘露醇（MAN）、D-葡萄糖（GLU）、癸酸盐（CAP）、丝氨酸同化（SER）等生化反应结果呈阴性,其16S rRNA序列与GenBank中丛毛单胞菌属（Comamonas sp.）EB172株（登录号：EU847238.1）的16S rRNA核苷酸序列同源性达99%。药敏试验结果显示,其对阿莫西林/克拉维酸、头孢噻吩、多黏菌素E、复方新诺明、大观霉素、呋喃妥因和多西环素敏感。致病性试验结果显示,以0.3 mL 9.3×10⁸ CFU/mL的细菌悬液腹腔接种小鼠,72 h内共有7只死亡（7/12）。本试验结果表明,弱仔猪及流产胎儿存在睾丸酮丛毛单胞菌感染。     

五株猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及序列分析

为研究猪流行性腹泻病毒的流行情况并分析该病毒的培养特性,对甘肃、北京、河北、山西、浙江五个猪场送检的疑似猪流行性腹泻病猪小肠内容物,用RT-PCR方法进行检测,证明为猪流行性腹泻病毒核酸阳性。然后将阳性病料进行传代培养、病毒含量测定以及特异性检验,证明获得五株猪流行性腹泻病毒,分别命名为Ningxia9、Beijing5、Gaocheng8、Shanxi1、Zhejiang08。对分离的毒株进行S基因全长测序及氨基酸序列分析。结果表明:五株分离毒株在盲传19代开始出现明显的细胞病变,盲传到24代,出现稳定的细胞病变且五株分离毒株的24代病毒含量在104.5~5.0TCID50/m L之间;用S蛋白进行进化树分析表明,五株分离毒株与近年来国内流行毒株亲缘关系很近,在同一个进化分支上;分离的五株野毒株之间的氨基酸同源性高达99.2%~99.9%,而这五株野毒与Gen Bank上提交的2011年、2012年分离的野毒株的之间的氨基酸同源性为98.4%~99.9%;实验室分离毒株及国内近年流行毒株均与国内外经典毒株存在一定的共性,即特定位置氨基酸的插入、缺失或置换。     

猪源副黏病毒HX01株分离鉴定、全基因测序与遗传变异分析

从陕西省户县某猪场患流感样症状病死仔猪肺脏分离得到1株副黏病毒,命名为猪源副黏病毒（PPMV）HX01株,对分离毒株鉴定后进行部分生物学特性研究和全基因测序分析。参考PPMV JL-1株基因组序列设计10对引物,对PPMV HX01株分段扩增并测序,将测序成功的各序列依次拼接得到全基因序列并进行序列比对。该病毒MDT为91.2h,ICPI和IVPI为0,EID50为10-10.25/mL,表明该毒株属于新城疫弱毒株。序列分析结果表明,PPMV HX01株（全基因序列GenBank登录号：JF795531）与NDV参考毒株全基因核苷酸同源性83.3%～99.8%,该病毒与基因Ⅱ型我国传统弱毒疫苗株La Sota全基因水平和各个基因编码开放阅读框的同源性均在99.5%以上,而与基因Ⅸ型国家标准强毒株F48E9和目前流行的基因Ⅶ型毒株亲缘关系较远。     

牛蜱龙岩分离株的分子鉴定

为了解福建省龙岩地区牛场体表蜱的种类,试验采集龙岩地区牛体表寄生蜱样本,基于蜱的核糖体rDNA内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列PCR扩增方法进行分子鉴定,获得ITS1和ITS2基因序列,进行blastn相似性搜索,应用MegAlign和MEGA 7.0软件完成同源性分析及种系发育分析。结果表明,该蜱ITS1序列与中国甘肃微小扇头蜱分离株同源性达99.32%(JQ737124.1、JQ737125.1),与中国湖南微小扇头蜱HAI2分离株同源性达99.16%(MK224531.1);ITS2序列与中国河南、南非豪登微小扇头蜱分离株同源性均为100%(KX450287.1、KY457506.1);种系发育分析结果显示,龙岩地区牛体表分离的牛蜱ITS基因序列与扇头蜱属ITS基因序列聚类,与革蜱属和璃眼蜱属处于两个不同的分支。说明福建龙岩牛蜱分离株为微小扇头蜱。     

鸭副粘病毒的分离与初步鉴定

从疑为流感的病死鸭肝、脾和肾脏中分离到1株病毒,该病毒能凝集鸽红细胞,并能被康复鸭血清、新城疫标准阳性血清抑制,但不能被EDS、禽流感H5、H7、H9血清抑制;电镜观察见到形态不规则、囊膜表面具有密集纤突的病毒粒子,直径100～200nm.部分生物学特性表明:该分离毒具有较强的毒力,其对鸡胚和番鸭胚的最小致死量的平均致死时间(MDT)为43.6和48.6 h;接种鸡胚成纤维细胞和番鸭胚成纤维细胞均能引起细胞病变,且该病变能被康复鸭血清、新城疫标准阳性血清中和,而不能被GPV、MPV、H5、EDS血清所中和.人工感染1日龄雏番鸭和50日龄鸡均可发病并能回收到病毒.上述结果初步表明该分离毒为鸭副粘病毒.     

鹅副粘病毒F基因的克隆及遗传变异分析

以鹅副粘病毒LN-7-02株基因组RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出F基因片段,并克隆至T载体.经质粒PCR及酶切鉴定后,对阳性克隆进行测序.测序后拼接得到F基因上游539bp核苷酸序列,并推导出ATG后1～374bp氨基酸序列.序列分析表明,LN-7-02株F蛋白裂解位点区的氨基酸组成为112R-R-Q-K-R-F117,与禽Ⅰ型副粘病毒(APMV-1)强毒株特征相符.将LN-7-02与AMPV-1株CH2000、F48E9和LaSota进行同源性比较,结果LN-7-02与CH2000、F48E9和LaSota的同源性分别为91.8%、86%和84%,表明该毒株相对于经典的AP-MV-1在F基因上已发生了较大变异.根据国内外70株APMV-1的F基因核苷酸序列绘制系统发育进化树,结果疫苗株Lasota属于基因Ⅱ型,经典株F48E9属于我国特有的基因Ⅸ型,而LN-7-02株与鹅副粘病毒JS-9-01、ZJ-100和GD-QY97同属于APMV-1基因Ⅶ型.     

鹅副黏病毒的分离与鉴定

从鹅体内分离到一株副黏病毒（DG01株）,该病毒具有血凝活性且血凝活性能被新城疫标准阳性血清和鹅副黏病毒阳性血清所抑制,能使SPF鸡胚、非免疫鸭胚和鹅胚100％死亡。电镜观察见病毒颗粒呈多形性,多为圆形有囊膜,直径在200nm左右;ELD50为10^8.6／ml,MDT为56h,ICPI为1．94。对DG01株通过RT-PCR方法,扩增出F基因,鉴定为基因Ⅶ强毒株,测序结果与CH2000同源率为91．8％,因此确定DG01株属于禽副黏病毒Ⅰ型（APMV-1）的基因变异强毒株。动物接种试验表明DC01株对鸭无致病性,对鹅、鸡、鸽具有100％的发病率和致死率。     

The molecular biology of the porcine paramyxovirus LPMV.

Protein and genomic studies of a previously uncharacterized porcine paramyxovirus (designated LPMV) confirmed that it was a member of the paramyxovirus genus. The nucleotide sequences and deduced amino acids of the complete P-gene, M-gene, F-gene and HN-gene as well as the intergenic sequences have been determined. Comparative sequence analysis of the M-gene of LPMV revealed the closest relationship of LPMV was to human mumps virus with a homology of 46% and 55% at the amino acid and nucleotide levels respectively. The P-gene of LPMV is transcribed to V protein mRNA and by editing of the gene to the P protein mRNA. The LPMV P-gene has the coding capacity for an additional protein of 126 amino acids, a C protein.     

猪源副黏病毒JL-1株全基因获得及遗传变异分析

利用本实验室分离保存的猪源副黏病毒JL-1株来提取病毒基因组RNA.参考GenBank发表的相关禽副粘病毒Ⅰ型(Avian paramyxovirus serotype 1,APMV-1)基因组序列,设计了8对特异性引物,RT-PCR法分别特异性的扩增出病毒各基因片段,并将各目的基因片段回收纯化,将纯化后的PCR产物进行测序.测定结果得到NP、P、M、F、HN、La、Lb、Lc 8段基因序列,利用DNAMAN软件进行拼接得到基因组全长cDNA序列(GenBank登录号:EU546165).序列分析结果表明,PPMV JL-1株与各地代表株核苷酸同源性87.85%～99.78%,与鹅源新城疫(GPMV)ZJ-1、NA-1株核苷酸同源性分别为83.31%、83.46%,同时根据各毒株F基因开放阅读框前389个核苷酸序列绘制出系统发育进化树,结果表明PPMV JL-1株与LaSota同属于基因Ⅱ型,不同于基因Ⅶ型的ZJ-1和NA-1株的鹅源毒株.     

番鸭副粘病毒1型的分离鉴定

自表现神经症状、腹泻、病死率较高、腺胃粘膜局灶性出血或溃疡及肠道粘膜出血为特征的病死番鸭肝脏中分离到病毒,经电镜观察、血凝及血凝抑制试验鉴定为副粘病毒1型.以SPF鸡胚测定其平均致死时间(MDT)为51 h,对1日龄SPF鸡的脑内接种致死指数(ICPI)为1.74,表明该毒株属强毒株.经肌肉注射途径攻击10 d雏番鸭致死率达66.7%,表明该分离毒对雏鸭有高度的致病性.     

Biological and molecular characterization of a pigeon paramyxovirus type-1 isolate found in Argentina

In this report, we describe the biological and molecular characterization of a paramyxovirus type-1 (PPMV-1) isolate found in wild pigeons in an urban habitat in Buenos Aires, Argentina. Of the nine pigeons captured, three were moribund, and the other six showed diarrhea, ataxia, tremor, torticolis, and wing paralysis. The intracerebral pathogenicity index was 1.29, and the amino acid (aa) sequence at the fusion protein cleavage site was 112GRQ KRF117. These characteristics correspond to a virulent Newcastle disease virus isolate. Nevertheless, it was not possible to reproduce the disease in chickens experimentally although the chickens exhibited seroconversion after inoculation. On the other hand, pigeons inoculated with the isolate became sick. These results provide further evidence about the unusual pathogenicity of PPMV-1 for chickens and show once more the need for more biological determinations in these cases to arrive at a final conclusion.