体外抗鸭坦布苏病毒的药物筛选

为了探讨抗病毒药物对鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu, virus, DTMUV）的作用,作者对5种常见的抗病毒药金刚乙胺、脱氧若卡素钠、病毒灵、利巴韦林、阿昔洛韦进行抗鸭坦布苏病毒体外筛选试验。结果表明利巴韦林药物浓度为0.156~0.625 mg/mL时在DF-1细胞中能抑制鸭坦布苏病毒的增殖,利巴韦林在体外对鸭坦布苏病毒具有抗病毒作用。     

采用实时定量PCR技术评价三种药物体外抗鸭瘟病毒效果

采用实时定量PCR技术,对阿昔洛韦、利巴韦林及禽重组干扰素等三种药物体外抗鸭瘟病毒的作用进行了评价。结果显示,阿昔洛韦能有效抑制鸭瘟病毒在鸭胚成纤维细胞中的增殖。研究结果为抗鸭瘟病毒药物筛选提供了一种有效的技术平台,同时提示阿昔洛韦制剂有可能作为一种有效的抗鸭瘟病毒药物用于其感染的防治。     

免疫抗病毒新药糖萜素

随着现代养殖业集约化规模化发展,畜禽疫病的危险性也在逐渐加大．为了预防疾病,人们往往在饲料中添加抗生素进行预防,但由于其频繁应用,使病原微生物耐药性增加,药物残留增多。另外。近年来病毒病的发生也不断呈上升趋势,而抗病毒的西药金刚烷胺、金刚乙胺、阿昔洛韦、吗啉（双）胍（病毒灵）、利巴韦林已被禁止应用于兽医临床（农业部560号公告）。因此,饲用抗生素替代物和免疫抗病毒新产品成为当前研究的热门。     

九种药物对新城疫病毒的体外敏感性试验

利巴韦林、盐酸吗啉双胍(病毒灵)、聚肌胞、干扰素、黄芪多糖、双黄连、阿昔洛韦、胸腺肽、三黄植物血凝素这9种药物是临床上常用的抗病毒药物,它们对新城疫病毒的作用效果不一,试验测定了9种药物对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,并进一步对药物阻止病毒侵入CEF、抑制病毒在CEF内复制进行了测定,同时还筛选出有效的抗新城疫病毒的药物,为临床使用抗病毒药物提供了科学的理论依据.     

九种药物对新城疫病毒的体外敏感性试验

利巴韦林、盐酸吗啉双胍(病毒灵)、聚肌胞、干扰素、黄芪多糖、双黄连、阿昔洛韦、胸腺肽、三黄植物血凝素这9种药物是临床上常用的抗病毒药物,它们对新城疫病毒的作用效果不一,试验测定了9种药物对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,并进一步对药物阻止病毒侵入CEF、抑制病毒在CEF内复制进行了测定,同时还筛选出有效的抗新城疫病毒的药物,为临床使用抗病毒药物提供了科学的理论依据.     

采用Real-time PCR技术评价三种药物体外抗鸭瘟病毒效果

本研究采用real-time PCR技术,对阿昔洛韦、利巴韦林及禽重组干扰素等三种药物体外抗鸭瘟病毒的作用进行了评价。结果显示,该方法具有客观、快速、敏感、高通量等特点;阿昔洛韦能有效抑制鸭瘟病毒在鸭胚成纤维细胞中的增殖。研究结果为抗鸭瘟病毒药物筛选提供了一种有效的技术平台,同时说明阿昔洛韦制剂有可能作为一种有效的抗鸭瘟病毒药物用于其感染的防治。     

利巴韦林、病毒灵、黄芪多糖体外抗ALV-J的活性试验

为寻求抗ALV—J感染雏鸡用药物,通过CCK-8试剂盒检测细胞活力以确定利巴韦林、病毒灵和黄芪多糖对DFl细胞的最大安全浓度,用ELISA试剂盒检测ALV—JP27抗原表达量,以确定上述抗病毒药物体外抗ALV—J活性。结果显示,利巴韦林、病毒灵和黄芪多糖对DFl细胞的最大安全浓度分别为0．0391、0．0625和0．0625mg／mL。在安全范围内,利巴韦林对P27的表达量具有明显的抑制作用,黄芪多糖在0．0039～O．0625mg／mL安全浓度范围内明显抑制P27的表达,病毒灵在安全范围内对P27的表达基本上没有抑制作用。试验表明,利巴韦林和黄芪多糖对ALV-J的增殖有明显的抑制作用,有望作为该病净化的辅助性防制药物。     

诃子、矮紫堇、甘青乌头提取物对牛病毒性腹泻病毒的体外抑制作用

为探讨诃子、矮紫堇、甘青乌头3种藏药的体外抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)作用效果,利用细胞培养技术,对BVDV进行增殖并检测TCID50;通过CPE观察和CCK8检测相结合的方法测定3种藏药和利巴韦林的最大药物安全浓度和药物半数中毒浓度(CC50);采用先加药后加病毒、先加病毒后加药、药和病毒预先作用的3种不同加药方式进行体外抗病毒抑制试验,计算不同作用方式下抗病毒有效率、药物半数有效浓度(EC50)和治疗指数(TI),进一步明确各个药物对BVDV的抑制作用。结果表明,经Reed-Muench氏法计算出病毒的TCID50为10-4.67·0.1mL~(-1);诃子、矮紫堇、甘青乌头和利巴韦林的最大安全浓度分别为1mg·mL~(-1)、1mg·mL~(-1)、8mg·mL~(-1)和2μg·mL~(-1);3种藏药及利巴韦林在药物和病毒预先作用方式下的最大有效抑制率均高于50%,其中矮紫堇浓度为1mg·mL~(-1)时,有效抑制率可达到72.86%,抑制效果极显著高于利巴韦林(P0.01);在先加药后加病毒、先加病毒后加药两种作用方式下的最大有效抑制率均小于30%,药物的吸附阻断作用和复制阻断作用并不明显。综上所述,3种藏药对BVDV均有一定的直接杀灭作用。其中,矮紫堇直接杀灭效果最佳且优于利巴韦林,有望被进一步开发成抗病毒药物。     

鸡蛋中金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林和吗啉胍多残留检测方法的研究

研究采用高效液相色谱-电喷雾串联质谱法建立了鸡蛋中金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林和吗啉胍4种抗病毒药物多残留的检测方法。样品经过-26℃低温反复冻融清除蛋白质后,在水饱和的正己烷处理条件下,采用超声法去除脂肪,并通过Cleanert PCX阳离子交换固相萃取柱净化,使用Eclipse Plus C18反相色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.8μm)进行分离,以5 mmol/L乙酸铵和乙腈水溶液作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子(ESI+)模式电离,多反应监测模式进行定性定量测定。结果表明:金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林、吗啉胍4种待测物在0.01~200.0 ng/m L浓度范围内均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.999,该方法测定鸡蛋中金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林、吗啉胍的最低检出限(S/N=3)为1.0μg/kg,定量限(S/N=10)为2.0μg/kg,平均回收率多集中于80%~100%,批内和批间变异系数均≤12%。该方法的建立对于监控鸡蛋等动物源性食品中的兽药残留具有积极作用。     

猪群利巴韦林中毒病例

利巴韦林,又名三氮唑核苷、病毒唑,具有广谱抗病毒作用,对流感病毒、副流感病毒、甲型肝炎病毒、口蹄疫病毒、新城疫病毒、轮状病毒等均有抗病毒活性,虽然在医学上广泛使用,但是在兽医临床已经禁止使用.2005年10农业部颁发第560号公告,宣布猪、禽等动物禁止使用利巴韦林、金刚烷胺、病毒灵等人用抗病毒西药,同时2005年兽药典也未收录该类抗病毒药物.虽然禁用但是关于利巴韦林中毒的病例时有报道[1-3].当前广大养殖户面对复杂的猪病束手无策,病急乱投医,违规使用药物时有发生,造成严重损失.现将1起典型猪群利巴韦林中毒病例报告如下,旨在引起广大兽医工作者和养猪农户的重视.     

鸭坦布苏病毒SC2013株的分离鉴定

利用RT-PCR从疑似鸭坦布苏病毒感染的致死产蛋鸭的肝、脾和卵泡膜等组织中扩增出鸭坦布苏病毒E基因,并利用10日龄鸭胚分离出病毒SC2013株。该毒株对氯仿和胰蛋白酶敏感,不凝集鸡红细胞;E基因核苷酸序列与坦布苏病毒GX2013G(Gen Bank:KM275941.1)的相似性在99%以上;对10日龄鸭胚的半数致死量为10-4.59/0.2 m L,人工接种能引起2日龄雏鸭发病死亡并呈现典型的临床症状与病理变化。以上结果表明,分离病毒SC2013株为致病性的鸭坦布苏病毒,在今后养鸭业中除注重鸭坦布苏病毒对产蛋鸭的危害外,也应加强防止幼龄鸭感染。     

三种药物对PRRSV的体外抑制试验

选取干扰素、黄芪多糖、利巴韦林作为抗病毒药物,利用MTT法与细胞病变(CPE)抑制试验,通过PRRSV感染Marc-145细胞、病毒在细胞中复制、药物直接和病毒作用三个环节,对药物的作用效果进行评价。结果显示,3种药物体外对PRRSV的都具有抑制作用,干扰素、黄芪多糖体外对PRRSV具有明显的阻断作用,利巴韦林体外对PRRSV具有杀灭作用。因此,这3种药物在细胞水平上均有抑制病毒的作用,为防控PRRS提供了理论依据。     

UPLC-MS-MS法检测兽用中成药中非法添加利巴韦林、阿昔洛韦和吗啉胍的研究应用

为了打击在中成药中非法添加兽药的不法行为,通过高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS-MS)的方法建立了检测利巴韦林、阿昔洛韦、吗啉胍三种典型的非法添加抗病毒药物的方法。结果表明,BEHC_(18)柱为分离柱,0.2%甲酸水溶液和乙腈为流动相,洗脱速度为0.2 m L/min。利巴韦林、阿昔洛韦、吗啉胍的检出限和定量限均为10μg/kg和20μg/kg,精密度和变异系数良好。对随机抽取的36批次市售抗病毒类中成药进行监测,结果发现有1批次药品添加了利巴韦林,1批次药品添加了阿昔洛韦和吗啉胍。     

1株鸭坦布苏病毒的分离鉴定及产蛋鸭发病模型的建立

本研究采集疑似感染鸭坦布苏病毒的蛋鸭卵巢病变组织,经RT-PCR鉴定其结果为鸭坦布苏病毒阳性。将组织处理液接种到SPF鸡胚并盲传3代后成功分离到1株鸭坦布苏病毒,连续传代10代后,病毒含量达到10~(5.0)ELD_(50)/m L。为建立鸭坦布苏病毒病的发病模型,将分离到的鸭坦布苏病毒腿部肌肉接种蛋鸭,每日对鸭只采血并对分离的血清进行病毒分离,摸索鸭坦布苏病毒病的病毒血症规律;另外每日随机挑选10只感染鸭进行剖杀,观察卵泡病变情况,摸索卵泡病变规律。结果显示,感染鸭只第1～3日血清中病毒分离率均为100%,第4日病毒血症阳性率开始下降,第6日病毒血症消失;感染鸭只卵泡第3日开始出现变形、破裂或出血等病理变化,第8～10日病变率达到100%。本研究建立了一种鸭坦布苏病毒感染产蛋鸭的发病模型并确定了发病评判标准,为鸭坦布苏疫苗的免疫效果评价提供了基础。     

抗病毒药物的毒性及残留检测方法研究进展

曾试用于兽医临床后来又被禁用的金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林、阿昔洛韦和吗啉胍等抗病毒药物,常被一些不发分子用于预防和治疗动物疾病。长期大量使用这些药物会引起动物中毒、免疫抑制、耐药性和药物残留等问题,甚至给动物疫病防控带来巨大困难。2012年的“速成鸡”事件就检出鸡肉中残留有金刚烷胺,给我国家禽业带来了负面影响。文章就常见抗病毒药物的理化性质、代谢、毒性以及残留检测方法等四个方面的研究进展进行了综述。     

基于双柱固相萃取-色质联用技术同时检测鸡肉中8种抗病毒药物残留

建立了双柱固相萃取-液相色谱-串联质谱法,可实现对鸡肉中金刚烷胺、金刚乙胺、美金刚胺、吗啉胍、利巴韦林、阿昔洛韦、更昔洛韦、奥司他韦等8种抗病毒药物的同时分析。采用三氯乙酸水溶液-乙腈对鸡肉中8种抗病毒药物残留同时提取,依次通过石墨化碳柱和强阳离子交换柱以实现对目标药物的富集、净化,选用石墨化碳色谱柱进行分离,超高效液相色谱-串联质谱检测。本文通过研究不同提取溶液、固相萃取柱及色谱柱对检测结果的影响,最终建立优化的检测方法,采用外标法计算,检测限1μg/kg,定量限2μg/kg,添加浓度在2~200μg/kg范围内的回收率大于80%,适用于鸡肉中8种抗病毒药物的同时分析。     

抗猫传染性鼻气管炎病毒药物的体外筛选

试验旨在检测抗病毒药物对猫传染性鼻气管炎病毒的有效性。利用F81细胞建立抗猫传染性鼻气管炎病毒药物的体外筛选模型,采用MTT法检测,计算病毒的抑制率。结果显示,阿昔洛韦、利巴韦林、L-赖氨酸、板蓝根和黄芪多糖的半数有效浓度（IC₅₀）分别为9.5、3.3、3.4、161.0和4.7 μg/mL,聚肌胞IC₅₀为6.0 mg/mL,治疗指数TI分别为76.8、39.3、2 588.0、4.5、78.7和5.8。结果表明,L-赖氨酸和黄芪多糖为高效抗猫传染性鼻气管炎病毒药物。     

首批兽药地方标准废止目录

序号类别名称/组方1禁用兽药β-兴奋剂类:沙丁胺醇及其盐、酯及制剂硝基呋喃类:呋喃西林、呋喃妥因及其盐、酯及制剂硝基咪唑类:替硝唑及其盐、酯及制剂喹噁啉类:卡巴氧及其盐、酯及制剂抗生素类:万古霉素及其盐、酯及制剂2抗病毒药物金刚烷胺、金刚乙胺、阿昔洛韦、吗啉(双)胍(病毒灵)、利巴韦林等及其盐、酯及单、复方制剂3抗生素、合成抗菌药及农药抗生素、合成抗菌药:头孢哌酮、头孢噻肟、头孢曲松(头孢三嗪)、头孢噻吩、头孢拉啶、头孢唑啉、头孢噻啶、罗红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、磷霉素、硫酸奈替米星(netilmicin)、氟罗沙星、司…     

鸭坦布苏病毒冻干卵黄抗体的研制

将鸭坦布苏病毒尿囊液浓缩灭活后制备灭活疫苗,依据制定的免疫程序免疫产蛋鸡,第三次免疫后14天,抗体中和效价≥1∶256,收集高免鸡蛋制备冻干卵黄抗体,并对制备的冻干卵黄抗体进行质量评价。结果表明,制备的冻干卵黄抗体中和效价为1∶90,能有效中和鸭坦布苏病毒,对鸭坦布苏病毒的致病性有较好的预防作用,为鸭坦布苏病毒的预防和治疗提供了一种可行的途径。     

一起疑似肉鸭坦布苏病毒与沙门氏菌混合感染诊疗体会

鸭坦布苏病毒病又称黄病毒病，是肉鸭常见疾病。本文对一例13日龄雏鸭的发病情况、临床症状、病理剖检病变、实验室分子生物学诊断及细菌培养鉴定结果进行分析。根据实验结果，该病例确诊为鸭坦布苏病毒与沙门氏菌混合感染，且病菌对氟氧沙星和头孢喹肟高敏，通过紧急免疫，并辅以抗生素和抗病毒中药治疗，经过治疗后，病情很快好转，以期为鸭坦布苏病毒与沙门氏菌混合感染的预防与治疗提供参考。