基于萤火虫荧光素酶ATP生物发光法灵敏度的研究进展

在工业化制造过程中,对微生物总数的监测至关重要,尤其是在食品、药品、电子和化妆品等产业.基于萤火虫荧光素酶的ATP生物发光法是一种快速、简便的方法.尽管在上述领域中有部分认可,但由于该法存在对环境的敏感性、微生物的检测限偏高、缺乏检测结果RLU的标准等局限性,限制其更为广泛的应用.该研究综合分析了该方法的原理、检测步骤、存在的问题,讨论了通过ATP提取方法、提高荧光素酶活性稳定性、引入扩增体系的研究作为提高方法的灵敏度的切入点,并综述了国内外在此方面的研究进展,为研制更稳定、更精确的生物发光方法提供思路.     

ATP生物发光法快速测定生乳中微生物总数的研究

本试验对ATP生物发光法应用于生乳中微生物检测进行了初步摸索,确定了加体细胞裂解液次数为3次;乳样最佳稀释倍数为20倍;用ATP生物发光法对大批乳样进行检测,同时用国标法进行了平皿菌落培养。结果表明,乳中微生物总数对数与光值对数呈正的直线相关(r=0.9485),相关程度为显著相关(P<0.001)。     

SKE法在ATP生物发光快速检测中的应用

通过研究ATP缓冲液种类和浓度,ATP提取时间等实验因素,优化SKE法中的细菌ATP提取条件,并对优化后的SKE法和TCA法进行对比,得出采用0.2mol/L Tis-乙酸作为ATP缓冲液,提取时间为1min的SKE法作为食品样品前处理的最佳条件。     

优化的ATP生物发光法快速检测面粉中细菌总数

[目的]建立一种快速检测面粉中细菌总数的方法。[方法]采用优化的ATP生物发光法检测面粉中的细菌总数,考察D-荧光素（Ln）浓度、萤火虫荧光素酶（FL）浓度、Mg2＋浓度对生物发光反应的影响。[结果]Ln浓度为70 mg/L,FL浓度为50 mg/L,Mg2＋浓度为0.250 0 mmol/L时,ATP生物发光法的测定结果较理想。该法最低检测细菌总数为1.0×103cfu/ml,与传统的平板计数法具有良好的相关性（P〉0.05）,RSD为4.0%。[结论]优化的ATP生物发光法成本低、操作简便、反应迅速、准确可靠,能快速检测出食品中的细菌总数。     

ATP生物发光法在快速检测物体表面清洁度中的应用

[目的]建立一种快速、准确检测物体表面清洁度的方法。[方法]以ATP生物发光微生物检测技术为指导,提取重组的萤火虫荧光素酶并配制成荧光反应试剂,测定其与ATP发光反应值的线性关系;根据ATP含量与细菌数量成正比例关系原理,测定物体表面ATP发光强度值,同时用国标平皿计数法测定其菌落总数,两者对比分析。[结果]ATP生物发光法检测的相对荧光值与物体表面的菌落总数存在良好的线性相关性,利用ATP发光法实时检测细菌总数可以很好地弥补国标法的不足。[结论]ATP生物发光法与传统的细菌总数国标平板计数法相比较具有操作简便、快速灵敏、成本低廉、绿色环保等优点,可以快速、准确地检测物体表面清洁程度。     

利用ATP生物发光法测定西湖水体微生物量

介绍了ATP生物发光法的基本原理和测量方法,将该方法应用于西湖水体微生物量的实际测量,得到西湖水体微生物浓度为106～107个·mL-1,总体分布为近岸高于湖心,夏季高于春季,旅游、垂钓等人为活动对西湖水体微生物的分布有较大影响,另外,饭店养鱼池附近的微生物浓度较高,但对西湖主体并没有明显的影响,引水工程对西湖水体有一定的稀释作用,有利于净化水质.     

日粮中锰对公鸡胆固醇含量及ATP酶活性的影响

摘要经添加锰0(Ⅰ组)、50(Ⅱ组)、100(Ⅲ组)和300(Ⅳ组)PPM日粮处理后的种用公鸡,检测其胆固醇含量和三磷酸腺苷酶(ATP酶)活性。结果表明,缺锰或高锰日粮使肝脏、睾丸匀浆中胆固醇含量下降,血清、肝脏和睾丸匀浆中ATP酶活性降低。结果提示,日粮中锰含量的高低对胆固醇的合成有影响作用,而这种影响作用同锰引起的ATP酶活性的改变以及ATP供能速率的变化有关。     

生物发光法在农产品安全性检测中的应用前景

综述了发光细菌法急性毒性检测、生物发光法基因毒性检测和生物发光ATP法微生物检测等农产品检测方法的特点和实际应用情况,并经过对比指出其中生物发光法作为一种速度快、操作方便、成本低廉的生物监测方法,将在农产品安全快速检测中有广泛的应用前景。     

脱水香菇细菌污染的生物发光快速检测试验

利用ATP生物发光分析技术对脱水香菇细菌污染情况进行了快速检测试验。结果表明,非细菌ATP因发光强度对总体发光强度的影响小于0.9%,可忽略不计;采取Tris/EDTA加热法提取细菌ATP,提取时间确定为90 s;整个检测过程可在1～2h内完成,与标准的细菌培养方法有良好的相关性,且不需要复杂的设备,可用于食品的快速筛选和现场检测,是一项值得广泛推广应用的新技术。     

环境温度对鸡肉宰后僵直过程中ATP降解的影响

采用反相高效液相色谱法测定三黄母鸡胸肉在不同温度条件下僵直过程中三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、一磷酸腺苷以及肌苷酸含量的变化。结果表明,不同环境温度处理组的三黄母鸡宰后4 h内胸肉中的ATP含量总体呈不断下降的趋势IMP含量总体呈不断上升的趋势,AMP含量先上升再下降,ADP含量在一定范围内波动。不同环境温度处理对三黄鸡宰后僵直过程中胸肉中的ATP、ADP、AMP和IMP含量影响显著(P<0.05)。     

囊素对杂交瘤细胞内第二信使物质的影响

以分泌抗人IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞为对象,通过免疫试验测定了囊素对其第二信使物质的影响.结果表明,囊素处理对杂交瘤细胞内cAMP浓度的影响不明显(P>0.05),而对cGMP浓度的影响与囊素作用的时间和剂量有关.分别用50μg/mL和500μg/mL囊素处理5 min后,两组细胞cGMP浓度均显著下降(P<0.05),导致cAMP/cGMP值明显上升(P<0.05),10 min后,前者的cGMP浓度不再变化,而后者的cGMP浓度继续下降.提示囊素可能以cGMP浓度或cAMP/cGMP值的变化为介导而起作用.     

季铵盐类表面活性剂对细菌ATP提取作用的研究

通过研究几种季铵盐类表面活性剂在ATP生物发光法中不同浓度、不同提取时间对细菌ATP的提取效果,确定了浓度为0．2％的苯扎氯铵（BAC）提取细菌ATP2min,检测发光值效果最佳;与传统的TCA法进行对比,BAC法对细菌ATP的提取率更高。     

玉米杂种与其亲本根系活力及三磷酸腺苷酶、核糖核酸酶活性的比较研究

玉米伤流量及伤流液中离子浓度均是夜间大于白天。杂种植株伤流量明显多于双亲,伤流液中的离子浓度均低于亲本,而杂种每株伤流液中钾的绝对含量却高于亲本。试验结果还表明,杂种伤流液中钾的含量和与双亲相比钾的平均优势与籽粒产量间呈正相关关系。杂种幼苗根系的水势低于亲本。杂种幼苗根端细胞三磷酸腺苷酶（ATP酶）活性大于双亲或介于双亲之间。而核糖核酸（RNA酶）活性介于或大于双亲。由此说明：杂种植株根系发达,根系吸收水分和矿质元素的能力较强,且杂种根系吸收水分能力的增强要大于吸收矿质元素能力的增加。     

硫化氢调节谷子幼苗P-ATPase响应镉胁迫

为了研究H_2S对谷子幼苗中ATPases活性的影响及其与金属转运蛋白HMAs基因表达调控的关系,以及H_2S对谷子幼苗细胞内Cd离子的解毒作用。在Cd胁迫条件下,对可溶性糖和可溶性蛋白以及ATPase活性进行测定,对谷子HMA家族转运蛋白进行系统进化分析并对H_2S对转运蛋白HMAs转录水平的影响进行分析。结果表明,在Cd胁迫条件下,谷子幼苗的可溶性糖和可溶性蛋白含量降低,ATPase活性被抑制,同时HMA家族基因表达量升高;H_2S处理可使可溶性糖含量提高的同时增强ATPase的活性,此外HMA的基因表达量也有相应变化。研究表明,硫化氢可以调节谷子幼苗P-ATPase的表达和活性,进而缓解Cd胁迫对谷子幼苗的毒害作用。     

重金属快速检测方法的研究进展

由于重金属污染问题日趋严重,在食品、医药、环境等诸多方面都引起了人们广泛的重视,对重金属快速检测方法的研究也随之在近年来增多。重金属快速检测法主要包括酶分析法、免疫分析法、生物化学传感器法、试纸法等,对方法原理、研究现状、适用检测离子、方法检出限和它们在环境中的应用进行了综合评述,并阐述了重金属快速检测方法的发展方向和存在的问题。     

中耳使用碘附对内耳Ca~(2+)ATPase活性的影响

为探讨耳外科术使用消毒药物出现感觉神经性聋的发病机理.在豚鼠中耳使用碘附.经组织化学方法研究,显示能使内耳Ca~(2+)ATPase活性明显下降。Ca~(2+)ATPase即钙泵、存在于细胞生物膜上.对保持细胞Ca~(2+)的相对衡定有重要作用。碘附对内耳的毒性作用是I~+经圆窗膜透入内耳后.卤化蛋白质使酶失活,从而导致血管纹维持耳蜗内环境及毛细胞听觉转换功能的丧失。     

植物叶酸的合成、代谢及基因工程研究进展

人体叶酸缺乏会导致很多重大疾病的发生,而植物是人类最主要的叶酸来源。叶酸分子是由喋呤和对氨基苯甲酸从头合成的,二者合成的关键酶腺苷三磷酸环化水解酶和氨基脱氧分支酸合成酶已得到克隆鉴定。除合成过程之外,叶酸在植物体内的运输和区域化、叶酸的分解代谢也是影响叶酸含量的重要因素。就近年来在植物叶酸的合成分解代谢机制及基因工程等相关研究进展进行综述。     

聚乙烯醇与腺苷三磷酸混合浸种处理对小麦幼苗抗寒性的影响

本文研究了ＰＶＡ＋ＡＴＰ混合浸种处理对小麦幼苗抗寒性的影响。结果表明这一处理能明显增强小麦幼苗抗寒性，其生理生化基础表现为呼吸减弱，束缚水／自由水比值增大，可溶性糖、蛋白质等保护物质积累较多，ＳＯＤ、过氧化氢酶、过氧化物酶等保护酶系统活性提高，自由基清除能力增强，膜脂过氧化水平降低。     

快速酶免法（EIA）检测弓形体试剂盒的研究

快速酶免法系采用聚乙二醇(PEG)稀释抗体,可使弓形体抗原与抗体反应由原来37℃2小时缩短为10分钟。通过对388份样品测定,快速EIA法阳性率为36％,间接血凝(IHA)作对比,阳性率为26％。两法阳性反应完全相符,但检出率快速EIA高于IHA。人工造病12头猪,于11天和21天采血检测抗体水平,EIA法阳性两次皆为100％。由于EIA技术中实行包被一步标准化,使本法操作更为简便、灵敏、快速。     

免疫试剂盒法与小鼠生物法用于检测雪卡毒素的比较

目的 比较免疫试剂盒法和小鼠生物法检测雪卡毒素(CTX)的优缺点,为雪卡毒素大规模筛选实验提供参考.方法 免疫试剂盒法和小鼠生物法检测同一批(40份)深海珊瑚鱼样品,并以高效液相色谱-质谱联用法(HPLCMS/MS)作对照,对检测结果进行比较分析.结果 免疫试剂盒法检测雪卡毒素的阳性率和假阳性率分别为22.5％和20.5％,均高于小鼠生物法(12.5％和10.3％).结论 免疫试剂盒法与小鼠生物法相比,敏感性高,且有省时、操作简便等优点,更适用于进行现场大规模快速筛选雪卡毒素实验.