鸡血红素加氧酶-1（HO-1）和胆绿素还原酶A（BLVRA）基因表达量对蛋壳颜色的影响

研究旨在检测血红素加氧酶(HO-1)和胆绿素还原酶A(BLVRA)在卢氏鸡和固始鸡输卵管子宫部的表达量差异,探索绿壳蛋的形成机理。以24周龄产绿壳蛋卢氏鸡和产褐壳蛋固始鸡为素材,采集每只鸡输卵管子宫部,提取总RNA,经过RT-PCR反转录为cDNA,以与色素相关的血红素加氧酶-1(Heme Oxygenase,HO-1)和胆绿素还原酶A(BLVRA)为目的基因,选择GAPDH作为参照基因,通过实时荧光定量PCR,分析HO-1和BLVRA在不同品种鸡的机体内转录水平的差异。结果表明：卢氏鸡子宫部组织中HO-1的mRNA相对表达量显著高于固始鸡(P＜0.05)。固始鸡子宫部组织中BLVRA mRNA相对表达量极显著高于卢氏鸡(P＜0.01)。     

牦牛ANXA5基因的克隆、序列分析及表达研究

为了深入地讨论牦牛ANXA5基因序列的特点，阐述其组织及细胞表达特性，通过采集牦牛不同组织样品，如心、肝、脾、肺、肾、子宫、卵巢、输卵管等，提取总RNA。采用PCR、生物信息学软件、实时荧光定量PCR、免疫组化等技术对牦牛ANXA5基因进行克隆、序列分析及表达特性研究。结果显示，牦牛ANXA5基因CDS区长为966 bp,共编码321个氨基酸。与黄牛比较，发现共有6个碱基突变存在于牦牛ANXA5基因中。黄牛与牦牛的核苷酸和氨基酸同源性大于99%,与其他哺乳动物进行氨基酸同源性比较，结果也均在90%以上，说明ANXA5基因在长期进化中保守。在牦牛的肺组织中，ANXA5基因表达量最高，与其他组织差异极显著(P<0.01);在子宫和输卵管组织中表达量次之。ANXA5在牦牛不同时期卵巢颗粒细胞中均有表达，且表达量随时间增长而逐渐升高。结果显示，培养72 h颗粒细胞中ANXA5表达量极显著高于培养24,36 h颗粒细胞(P<0.01);培养48 h颗粒细胞中ANXA5表达量极显著高于培养24 h颗粒细胞(P<0.01),显著高于培养36 h颗粒细胞(P<0.05),表明A...     

牛GDF-9基因的克隆与组织表达的分析

为了检测牛GDF-9基因mRNA在怀孕期牛生殖系统的表达情况,为GDF-9基因在雌性动物繁殖上的研究提供一定的理论依据。本试验根据GenBank中报道的牛GDF-9基因序列设计引物,从牛卵巢、输卵管、子宫、肾脏中提取RNA,采用RT-PCR技术进行cDNA扩增,扩增产物与载体pGM-T连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,测序。结果表明,已成功克隆的阳性重组子经测序鉴定其片段大小与预期大小完全一致,为264 bp。序列同源性分析比较表明,该cDNA及其推导的氨基酸序列与绵羊GDF-9cDNA和氨基酸序列同源性分别为97%和94%。以-βactin为内参照物,采用RT-PCR技术进行半定量分析,通过检测比较牛GDF-9基因在卵巢、输卵管、子宫、肾脏组织中mRNA的表达情况。结果表明,牛GDF-9基因在卵巢中表达量最高,在输卵管、子宫、肾脏中均有表达,但表达量不高。     

牦牛DDIT3基因克隆及组织表达特性分析

旨在探究DNA损伤诱导转录本3(DDIT3)基因序列特征及其在母牦牛组织表达特性。以母牦牛为研究对象,利用RT-PCR技术克隆牦牛DDIT3基因,利用生物信息学软件分析DDIT3蛋白的结构和功能,并利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测DDIT3基因在牦牛不同组织及不同生理阶段的生殖器官和卵母细胞中的表达特征。结果显示:牦牛DDIT3基因CDS区全长507 bp,共编码168个氨基酸;核苷酸序列比对发现,牦牛与野牛同源性最高,为99.71%,与其他物种的同源性均在88%以上,说明DDIT3基因在进化过程中表现出高度保守性;牦牛DDIT3基因在卵巢中的表达量极显著高于心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肺、子宫和输卵管(P0.01);在卵巢中,妊娠期DDIT3基因的表达水平显著高于卵泡期、黄体期和胎儿期(P0.05),黄体期的表达量显著高于胎牛期(P0.05);在子宫中,妊娠期DDIT3基因的表达水平显著高于卵泡期和胎牛期(P0.05);DDIT3在各时期输卵管中表达水平差异不显著;MⅡ期卵母细胞中DDIT3基因的表达水平显著高于GV期和MⅠ期(P0.05),MⅡ颗粒细胞DDIT3基因的表达量也显著高于GV期和MⅠ期(P0.05),GV期、MⅠ期的卵母细胞和颗粒细胞DDIT3表达量差异不显著。综上,牦牛DDIT3基因可能在维持母牦牛卵巢机能与妊娠以及卵泡发育与成熟过程中发挥重要的调控作用。     

不同强度光照对母鸡中脑和间脑c-fos基因表达的影响

为进一步理解光照对母鸡产蛋性能的影响机制,本文用c-fos法探讨了母鸡对不同强度光照刺激的反应。将150日龄的母鸡右眼遮光7d后接受不同强度光照刺激1.5h,暗适应1.5h后灌流固定,取脑制作石蜡切片,采用免疫组化方法检测c-fos基因在中脑和间脑的表达。结果显示：间脑和中脑内有大量Fos样免疫反应阳性神经元,主要见于左侧,分布于视顶盖中央灰质层（SGC）,圆核（ROT）,外侧膝状腹侧核( Glv),半月核（SLu）,峡核大细胞部(Imc),狭核小细胞部(Ipc) ,室旁核(PVN),弓状核(ARC),动眼神经核（OMv）。不同强度光照诱导母鸡c-fos基因的表达不同,在 SGC ,ROT,SLu,Imc ,Ipc,Glv,20Lux,30Lux组的表达较对照组明显增加,40Lux组次之,10Lux组最低;PVN,ARC为20Lux组表达最强, 30Lux,40Lux组逐渐减弱;而OMv的表达随着强度的增加而加强。表明母鸡对不同强度光照的刺激反应不同。     

海马齿Spmet基因表达产物的亚细胞定位

为研究从海马齿(Sesuvium portulacastrumand L.)中克隆的Spmet基因在植株体内亚细胞水平上的分布情况及组织表达的特异性,将Spmet基因的编码区定向克隆至植物表达载体pCAMBIA-1304上,使其与mgfp（绿色荧光蛋白）基因融合,构建Spmet基因植物瞬时表达载体,使用基因枪法将该表达载体导入洋葱表皮细胞,通过荧光激发,在荧光显微镜下观察洋葱表皮细胞中的绿色荧光部位,确定其在细胞中的表达部位。同时利用半定量PCR的方法对其在根、茎、叶中的表达特性进行分析。结果表明,该基因在海马齿植物的根、茎、叶中均有表达,表达量为叶>茎>根,融合蛋白主要分布在洋葱表皮细胞的细胞核上,细胞膜上也有微量表达。说明海马齿2型金属硫蛋白基因在海马齿植物中属于组成型表达,同时是一个核表达的基因,该结果为进一步研究Spmet基因在抗重金属方面发挥的作用打下了基础。     

荆豆凝集素-1受体在犬子宫内的分布与激素调节

采用组织化学方法对荆豆凝集素-1(ulex europaeus agglutinin-1,UEA-1)受体在发情周期和早期妊娠犬子宫内的分布以及激素调节进行了研究。结果显示,UEA-1受体主要存在于犬子宫内膜腔上皮和腺上皮,其表达量随妊娠阶段的不同而发生动态性变化。UEA-1受体在休情期犬子宫内未见表达,而在发情期犬子宫内膜腔上皮和腺上皮内的表达量很高。在早期妊娠犬子宫内,在妊娠第6天和12天犬子宫内的表达量较低,此后其表达量逐渐增加,在妊娠第17天时,UEA-1受体在子宫内膜腔上皮和腺上皮内的表达量达到峰值,此后其表达量又逐渐下降,在妊娠第23天时未见表达。注射雌激素可明显促进卵巢切除后犬子宫内膜UEA-1受体的表达。结果表明,犬子宫内UEA-1受体的分布与胚胎着床前胚胎与子宫内膜之间的黏附和植入有关,UEA-1受体在犬子宫内的表达受母体分泌的激素所调控。     

鸡 CVH启动子调控的绿色荧光蛋白报告载体的构建及鉴定

探索建立一种用绿色荧光蛋白对鸡原始生殖细胞进行标记分离的方法。本研究克隆并测序鸡原始生殖细胞特异表达基因CVH1.6Kb启动子序列。序列分析表明它含有类似于TATA box和CAAT box的元件,在其远端上游区域还有多个GC富含区。将CVH基因启动子亚克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-1的多克隆位点,成功构建表达载体pCVH-EGFP。重组质粒在脂质体LipofectamineTM2000介导下分别转染鸡Ⅹ期胚盘细胞和鸡胚成纤维细胞,并于转染后12 h在荧光显微镜下观察转染效果。实验结果显示：在胚盘细胞转染后12 h可观测到绿色荧光表达,转染后24 h荧光细胞增多,细胞形态均呈圆形、体积较大;在鸡胚成纤维细胞未检测到GFP表达。实验结果说明,由CVH基因启动子控制下的EGFP可在Ⅹ期胚盘细胞特异表达,为利用流式分离技术PGCs标记分离、纯化研究奠定基础。     

PPARγ基因在荷斯坦公牛不同组织部位表达差异性研究

为研究P以脚基因在荷斯坦公牛组织及月龄间的相对表达差异性。运用实时荧光定量PCR法检测了PPARy基因在15和17月龄荷斯坦公牛脂肪组织（背部脂肪、腰部脂肪、肾周脂肪、肠系膜脂肪）和肌肉组织（背最长肌和半腱肌）间的相对表达差异性。结果表明：PPARY基因的表达在荷斯坦公牛不同月龄问没有发现差异性,而组织间差异表达分析表明：肠系膜脂肪、肾周脂肪和腰部脂肪的相对表达量显著高于背最长肌和半腱肌（P〈0．05）;肠系膜脂肪和肾周脂肪相对表达量显著高于背部脂肪俨〈0．05）。由此可见,PPARY基因在荷斯坦公牛不同部位脂肪组织和肌肉组织中均有表达且部位不同表达不同,存在部位差异性。     

BpERF1.1基因在低温下的表达特性及过表达载体构建

分析白桦BpERF1.1基因不同组织部位以及低温胁迫后的表达模式,定位基因表达部位,并为获得转基因白桦做初步准备.通过实时荧光定量PRC技术测定BpERF1.1基因的相对表达量;利用基因枪法在洋葱表皮细胞瞬时表达35S::BpERF1.1-GFP,激光共聚焦显微镜观察GFP发光情况,获得BpERF1.1基因表达产物的亚细胞定位信息;此外,利用双酶切法将BpERF1.1基因连接到pRokⅡ过表达载体,以及热激法转化到大肠杆菌感受态细胞中.BpERF1.1基因在叶片中相对表达量最高;低温胁迫后的24 h内,白桦BpERF1.1基因持续上调表达;BpERF1.1基因的表达产物定位在细胞核;pRokⅡ-BpERF1.1植物过表达载体菌液PCR的目的 条带位置正确,测序结果BLAST比对后与序列吻合.白桦BpERF1.1基因主要表达部位在叶片,其可以响应低温逆境,且过表达载体pRokⅡ-BpERF1.1构建成功.     

基于转录组测序筛选鸡皮肤毛囊性状相关基因和关键通路

旨在通过对崇仁麻鸡背部皮肤毛囊组织的转录组学分析，筛选关键的差异表达基因和信号通路，探讨鸡皮肤毛囊性状的分子调控机制。采用TRIzol法提取皮肤毛囊组织总RNA,通过Illumina平台进行转录组高通量测序(RNA-Seq)。最后采用实时荧光定量的方法对转录组测序进行验证。研究结果如下：共筛选出了3 856个差异表达基因，在公鸡(BGB vs YGB)比较组合中筛选出了971个差异表达基因，其中274个表达上调，697个表达下调。在母鸡(BMB vs YMB)比较组合中筛选出了3 529个差异表达基因，其中1 477个上调，2 052个下调。在公鸡、母鸡共同的差异表达基因中筛选出了3个与皮肤毛囊性状有关的高表达基因KRT75、KRT6A和KRT14。在GO功能显著富集中，BGB vs YGB比较组合富集到了516个GO term, BMB vs YMB比较组合富集到了1 020个GO term,基因主要集中参与细胞黏附等活动。显著富集了多条KEGG通路，在BGB vs YGB比较组合中富集了8条显著的KEGG通路，在BMB vs YMB比较组合中富集了20条显著的KEGG通路，筛选出了...     

槐猪和杜洛克猪瘦素及其受体基因的差异表达研究

为了解7月龄、12月龄的槐猪和杜洛克猪5个不同部位脂肪组织LEP和LEPR基因的表达差异。采用荧光定量PCR技术,使用2-△△Ct方法计算LEP和LEPR基因的相对表达量,结果表明：LEP基因在背部皮下脂肪下层的表达量最高,其次是背部皮下脂肪上层、腹部皮下脂肪和板油,在冠状动脉脂肪中表达最低;7月龄槐猪脂肪组织LEP基因的表达量与12月龄槐猪、7月龄杜洛克猪差异显著(P＜0.05),12月龄槐猪脂肪组织LEP基因表达量与7月龄杜洛克猪差异极显著(P＜0.01)。7月龄槐猪脂肪组织LEPR基因的表达量与12月龄槐猪相比,只有冠状动脉脂肪差异显著(P＜0.05)。     

鸭IGF-IR基因部分序列克隆、鉴定及在胚胎期胸肌组织中的差异表达分析

为了克隆分析鸭IGF-IR基因部分的cDNA序列,并研究该基因的组织表达规律。通过同源性比对,克隆了IGF-IR基因cDNA部分片段,并运用生物信息学方法分析了不同物种序列进化关系,运用荧光绝对定量PCR技术检测了IGF-IR mRNA在肉用型品种高邮鸭和蛋用型品种金定鸭胚胎期不同发育时期胸肌中的表达。序列分析结果表明：克隆得到的鸭IGF-IR基因cDNA270 bp片段长度,其核苷酸序列与鸡、人、小鼠、大鼠、猪、牛的IGF-IR基因相应核苷酸序列的同源性分别为95%、79%、78%、77%、78%、76%;荧光绝对定量结果表明：IGF-IR基因在胸肌中呈“波浪形”表达,在21胚龄表达量最高,与17、25、27胚龄和7日龄差异显著(P<0.05);IGF-IR基因在品种间表达量除21胚龄时差异显著外(P<0.05),其余各胚龄差异均不显著(P>0.05),表明IGF-IR mRNA的表达在所研究品种胚胎期的胸肌中相对稳定。     

‘兴国灰鹅’均衡生产VIP基因的表达规律

为了解‘兴国灰鹅’在不同繁殖季节VIP基因在下丘脑、垂体、输卵管和卵巢中的表达情况,本试验抽取不同光照长度下‘兴国灰鹅’下丘脑、垂体、输卵管和卵巢的组织样本,进行荧光定量PCR。对照组在整个试验阶段自然产蛋和休产,试验组通过人工控制光照在整个试验阶段接受短或长光照处理,使其与对照组在相反的季节开产和休产。利用荧光定量PCR检测试验组和对照组产蛋期和休产期的VIP表达情况。结果表明:试验组休产时垂体VIP的表达明显高于开产的对照组(P0.05);试验组开产时下丘脑VIP的表达明显低于休产的对照组(P0.05),卵巢和输卵管表达试验组和对照组无明显差异。结果证明VIP的表达在休产期高于产蛋期。     

β-catenin在人工诱导发情绵羊子宫的表达研究

为探讨β-catenin在人工诱导发情绵羊子宫组织中的表达情况,本试验采用实时荧光定量PCR与半定量PCR检测绵羊发情后第10、12、14、16、18天子宫组织中β-catenin mRNA的表达情况。实时荧光定量PCR与半定量PCR结果显示:2种检测方法均能检测出不同时期的绵羊子宫中β-catenin mRNA表达,其中绵羊发情后第10天β-catenin mRNA的相对表达量最大,显著高于其他4个时间点(P0.05),第12天相对表达量显著降低(P0.05),之后相对保持恒定,到第18天又显著升高(P0.05)。结果表明:实时荧光定量PCR与半定量PCR均可用于检测绵羊子宫组织中β-catenin mRNA的相对表达量;在绵羊发情后第10~18天,β-catenin在子宫中的呈现先减少后增加的波动变化趋势。     

矮牵牛DFR-A基因的克隆与表达分析

通过分离矮牵牛DFR-A基因,研究其在不同部位的表达规律和酶活性变化,为花色素苷合成的结构基因分离及其他研究奠定基础。基于已公布的矮牵牛DFR序列,直接从矮牵牛花瓣中分离了DFRA基因序列,利用实时荧光定量PCR技术研究其在不同器官中的表达特性,同时测定了不同器官中的DFR酶活性。（1）矮牵牛DFR-A基因cDNA序列为1473 bp,该基因最大开放阅读框为1143 bp,编码380个氨基酸。（2）DFR-A基因在矮牵牛各种器官中均有表达,但不同组织中表达量存在差异,在花药中的表达量最高,其次是初开和盛开花瓣中,各期花蕾中的表达量都较低,而在叶中表达量最低。（3）DFR酶在叶片及花药中几乎无活性。在初开花瓣中达到最高峰。（4）除花药以外的部位,DFR酶活性与DFR mRNA浓度存在线性相关性。矮牵牛DFR酶活性主要受转录调控,活性在初开花瓣中最高。     

甜瓜CmERFIV-3基因cDNA的克隆及功能初步分析

为了研究甜瓜ERF(ethylene-responsive factor)亚家族基因在果实成熟过程中的功能,本研究以甜瓜(Cucumis melo L.)品种河套蜜瓜为材料,克隆得到甜瓜ERF亚家组成员之一Cm ERFIV-3(MELO3C021306)基因c DNA,其开放阅读框(ORF)长为702 bp,编码233个氨基酸。分别构建了Cm ERFIV-3基因的超表达载体p PZPIV-3和RNAi载体p ARTIV-3,采用农杆菌介导的瞬时表达技术将含有重组质粒的农杆菌菌液注射到成熟期甜瓜果实中。结果显示,注射超表达载体的部位与对照相比,23.3%样品出现提前变黄的表型,而注射RNAi载体的部位与对照相比,20%样品出现持绿的表型。实时荧光定量PCR结果表明,注射超表达载体部位的目的基因的表达量是对照的2.37倍,而注射RNAi载体部位的目的基因的表达量是对照的0.24倍。这些结果初步表明Cm ERFIV-3基因参与甜瓜果实成熟过程。     

花生凝集素受体在兔子宫内的分布与激素调节

采用组织化学方法对花生凝集素(peanut aggutinin,PNA)受体在兔发情周期和早期妊娠子宫内的分布以及雌、孕激素对其表达的影响进行了研究.结果显示,PNA受体主要存在于兔子宫内膜腔上皮和腺上皮,其表达量随妊娠阶段的不同而发生变化,PNA受体在休情期、发情期及妊娠第1天的兔子宫内未见表达,在妊娠第2至第4天时表达量逐渐增加,且在妊娠第3至4天时表达量最高,此后,在妊娠第5至7天时表达量逐渐减少,妊娠第7天时,着床区子宫内PNA受体的表达量略高于非着床区.假孕兔子宫内PNA受体的表达与正常妊娠时相似.注射孕酮可促进卵巢切除后兔子宫内膜PNA受体的表达,而注射雌激素对其表达有明显抑制作用.结果表明,PNA受体在兔子宫内的分布与着床前胚胎与子宫内膜之间的黏附有关,PNA受体在兔子宫内的表达受母体分泌的孕酮和雌激素所调节.     

莱芜猪和杜洛克猪不同部位肌肉H-FABP基因差异表达

为研究不同品种猪不同部位肌肉H-FABP基因表达差异,探讨莱芜猪肌内脂肪沉积的分子机理,本试验选择体重100 kg莱芜猪10头、杜洛克5头,采用荧光定量RT-PCR法测定H-FABP基因在莱芜猪和杜洛克猪背最长肌和半膜肌中的表达量.品种间背最长肌和半膜肌H-FABP基因mRMA的表达差异虽未达到显著水平,但莱芜猪背最长肌和半膜肌H-FABP基因的表达水平均高于杜洛克猪.莱芜猪和杜洛克猪背最长肌与半膜肌间H-FABP基因表达量差异显著(P<0.05).莱芜猪和杜洛克猪H-FABP基因mRNA表达量与肌内脂肪含量显著相关.     

日粮精粗比对围产期奶牛乳腺内参基因表达的影响

选择合适的内参基因是利用实时荧光定量PCR准确分析基因相对表达量的先决条件。选择了奶牛乳腺研究中广泛使用的7个候选内参基因,包括GAPDH、ACTB、18S rRNA、RPS9、RPS15、UXT、MYC。奶牛以精粗比不同的2种日粮饲喂,并在产后16 d采集乳腺组织。利用qRT-PCR技术探讨了候选内参基因在围产奶牛乳腺组织中的表达情况,并利用geNorm程序对数据进行分析。结果发现,UXT和RPS9表达稳定,不受日粮精粗比的影响,因此,可作为围产期奶牛乳腺组织基因表达分析中相对合适的内参基因。