生长板软骨细胞分化过程中的主动激泌素、副激泌素及激素信号

生长板软骨细胞分化过程中的主动激泌素、副激泌素及激素信号吴绍强摘译曹光荣校１引言长骨的生长是骺端生长板软骨细胞周期代谢发生过程的最终结果。该组织可分成五个形态区域：歇息区、增殖区、肥大前区、肥大区及钙化区。骺端血管侵入软骨钙化区而形成骨小梁、生长板软...     

肉鸡骨骼发育的调控机制

肉鸡骨骼发育主要是通过软骨内骨化完成的。在软骨内骨化的进程中,生长板软骨细胞经历增殖、肥大、转分化和软骨基质矿化等,最终成骨逐渐取代软骨原基,实现骨骼的线性延长。软骨内成骨是一个复杂精密的过程,由SOX9、RUNX2、MEF2C、OSX、TGF-β、BMP2、FGFs、IHH和PTHrP等多种信号因子和转录因子协调调控,这些调控因子由生长板不同区的软骨细胞表达或特异性的调控软骨细胞的增殖、分化及血管侵入等过程。在家禽养殖中,肉鸡常发腿病且治疗难度大,而有关肉鸡腿病发病机制的研究报道相对较少。本文综述了骨形成过程及具体的分子调控机制,为了解肉鸡腿病的发生以及提供有效治疗方案提供参考。     

关于骨软症病因研究的进展

骨软症是由于软骨细胞分化异常所致的一种疾病。必须了解正常软骨与患骨软症软骨尽管在生化方面相同,但其微细构造是不同的。由于有的骨软症家畜往往骨骺肿大,所以有必要了解激素对软骨生长的调节和影响。对幼龄土拨鼠投给生长激素在成骨板和关节软骨的细胞肥大,机能亢进,其结果是骨板很早闭锁,由于继续增殖防碍钙     

肉鸡胫骨软骨发育不良早期钙黏蛋白1(CDH1)差异表达研究

为研究福美双诱发肉鸡胫骨软骨发育不良(Tibial Dyschondroplasia,TD)早期钙黏蛋白1(CDH1)的差异表达,基础日粮中添加福美双,在试验第1、2、6天,对试验鸡进行剖杀,迅速采取胫骨生长板故入4％多聚甲醛溶液于4℃固定,做CDH1免疫组化分析;提取对照组和饲喂福美双组的生长板总RNA,采用Real-time PCR对CDH1 基因进行差异表达验证.结果钙黏蛋白1 (CDH1/E-cadherin)基因在TD生长板表达上调,在对照和TD软骨生长板,其蛋白合成主要在前肥大、肥大区软骨细胞质,增殖区软骨细胞无表达,钙化区软骨细胞表达少,在饲喂福美双第1、2、6天其表达增加与定量PCR变化结果相一致,且在饲喂福美双第2、6天呈明显高表达.结果表明CDH1 参与细胞黏附、血管入侵及调节Wnt/β-cat的信号传递,和其它分子共同调节软骨内骨化.     

蒙古羊骨髓间充质干细胞的分离培养及多向诱导分化

本研究旨在建立蒙古羊骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)体外分离、纯化、增殖方法,诱导其向脂肪细胞、成骨细胞及软骨细胞分化。穿刺法抽取蒙古羊骨髓组织,采用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化BMSC,增殖,并测定其生长曲线及细胞倍增时间。对第3代蒙古羊BMSC进行成脂、成骨及成软骨诱导,观察诱导后的细胞形态。采用油红O、茜素红、HE等染色法在组织学水平对BMSC进行成脂、成骨和成软骨分化鉴定。结果显示,蒙古羊BMSC呈现均一梭形成纤维细胞样生长,生长曲线呈S型,生长增殖能力良好。在不同分化诱导之后,细胞呈现脂肪细胞、成骨细胞及软骨细胞的表型特征。表明获得的蒙古羊BMSC具有多向分化潜能,所分离细胞确为骨髓间充质干细胞。     

鹿茸的软骨内骨化及其调控机理的研究进展

对鹿茸软骨内骨化过程的组织学基础及调控机理进行了综述。鹿茸的骨化是在睾酮等一系列因素的影响下发生的软骨内骨化过程。这种骨化方式由膜内骨化转变而来,标志是角柄顶端软骨膜下出现连续的骨小梁。在整个生茸期内,软骨膜持续存在,通过附加增生来实现鹿茸的生长。发育到一定程度的肥大软骨细胞向细胞间质中分泌X型胶原纤维等,引起间质的钙化,进而骨组织替换软骨组织。     

禽胫骨软骨发育异常的病因和发病机制

禽胫骨软骨发育异常的病因和发病机制朱连德王统石卢正兴（中国农业大学动物医学院，北京１０００９４）软骨发育异常（Ｄｙｓｃｈｏｎｄｒｏｐｌａｓｉａ）是禽常见的与生长板有关的软骨内骨化缺陷，患病软骨细胞不能完全肥大成熟，无血管、未钙化的软骨积聚于生长板下并...     

蒙古绵羊早期胚胎骨骼的组织发生

蒙古绵羊胚胎发育到15天3时(胚长2．3mm)，由中胚层分化出第1对体节，到17天17时体节数目进一步增多，并分化出生皮节、生肌节和生骨节，生骨节细胞向脊索方向聚集，最后形成脊柱的原基。纤维性结缔组织的原基发生于绵羊交配12天后结腹面中胚层的间充质细胞。当胚胎发育到21天时，多突的间充质细胞分化为原成纤维细胞，此细胞分泌出胶原原纤维。胚胎发育到30天时成纤维细胞间可见有成束的肢原纤维分布。软骨组织发生于中胚层的间充质细胞，该细胞的突起逐渐消失变为成软骨细胞，并分泌软骨基质，最后分化为软骨细胞。胚胎发育到15mm时，扁骨(以顶骨为例)开始由间充质分化为纤维性结缔组织。到35mm时，纤维性结缔组织进一步成熟。到50mm时，顶骨原基由纤维性结缔组织分化为类骨质，并出现钙化形成骨化中心。胚胎发育到10mm时，长骨(以前肢骨为例)所在的区域间充质细胞大量聚集，到14mm时，前肢骨的软骨原基形成，到35mn时前肢软骨内出现初级骨化中心及原始骨髓腔。     

铜对软骨细胞碱性磷酸酶活性影响的实验观察

碱性磷酸酶(AKP)是新骨形成过程中一个非常重要的酶，是骨形成必需的催化剂，是参与骨与软骨等钙化组织代谢和再生的一种功能性标志酶，对骨的矿化，骨的形成均有重要意义。AKP活性是成骨样细胞分化成熟的重要标志之一，其活性高低可反映出相应组织、细胞的钙化能力和向成骨方向转化的趋势。本研究拟通过在软骨细胞培养液中添加不同水平的铜，观测不同水平的铜对软骨细胞碱性磷酸酶活性的影响，为探明铜促进软骨细胞生长提供实验依据。     

原癌基因c-fos在塔里木马鹿茸组织中表达特性的研究

为探讨原癌基因c-fos对鹿茸生长的调控作用,采用3头成年塔里木马鹿Cervus elaphus生长期为30、60d的新鲜鹿茸,剖分成茸皮层、间充质细胞层、成软骨细胞层和软骨细胞层。首先用2种免疫组化的方法进行基因表达定位,然后通过荧光定量PCR技术对不同组织基因的表达进行定量分析。免疫组化分析结果表明,该基因在茸皮的毛囊内根鞘和毛母质及皮脂腺、动脉血管的环形平滑肌处呈阳性反应;真皮乳头层与表皮基部连接的基底层呈阳性反应。在静脉血管、神经和其他附属器反应均未观察到阳性细胞。在间充质细胞层、成软骨层和软骨层2种方法均没有观察到c-fos的阳性表达细胞。定量分析发现,c-fos基因在不同生长阶段不同组织层均有表达,且在茸皮的表达量显著的高于间充质细胞层,成软骨层和软骨层(P<0.05)。在同一生长期间充质细胞层、成软骨层和软骨层c-fos的表达量很低;生长30与60d比较,c-fos在间充质细胞层和成软骨层变化不大,在茸皮层和软骨层表现为下调表达。本研究表明c-fos基因在鹿茸快速生长期参与了茸皮干细胞的增殖与分化,并对成骨细胞的分化起着调控作用。     

Cbfa1对成骨细胞调控作用的研究进展

核心结合因子α1(Cbfa1),是成骨细胞发生和分化的特异性转录因子。Cbfa1/p56能激活T细胞特异性基因表达,Cbfa1/p57的超表达能诱导多潜能间充质干细胞向成骨细胞表型分化,并激活骨钙蛋白、I型胶原蛋白、骨桥蛋白、骨唾液蛋白等成骨基因转录。Cbfa1基因反义寡核苷酸则阻止OB分化和骨化形成,如果Cbfal基因缺失,将导致形成以破骨细胞、软骨细胞和软骨组织为主而缺乏成骨细胞的骨骼系统。骨形态发生蛋白、转移生长因子、肿瘤坏死因子α、成纤维细胞生长因子2、甲状旁腺激素、糖皮质激素地塞米松和l,25(OH)2D3等因子可上调或抑制Cbfal的表达,在骨的发育和组织钙化过程中起着重要的调节作用。     

IHH过表达对鸡原代软骨细胞增殖和分化的影响

为探究印度刺猬因子(IHH)基因对鸡原代软骨细胞增殖和分化的调控作用，本研究根据IHH基因序列信息，构建真核过表达载体(OV-IHH);采用双酶切和测序进行鉴定，并将其转染鸡原代软骨细胞；采用CCK-8法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡，对软骨细胞进行成骨诱导分化至21 d,采用ALP试剂盒检测细胞ALP活性。结果表明，IHH真核过表达载体构建成功，与对照组和空载体组(OV-NC)相比，过表达组IHH基因的mRNA表达显著增加(P<0.01),过表达效率扩大2 700倍左右。过表达IHH促进细胞周期从G1期到S期的转换，从而促进增殖，抑制细胞凋亡，且ALP活性升高，促进细胞分化。综上，IHH基因显著影响鸡软骨细胞的生长发育，研究结果为进一步解析IHH基因调控鸡匍匐性状的作用机制提供理论依据。     

去势对育成期雄性水貂骨骼生长发育影响的研究

采用常规石蜡切片技术对去势雄性水貂的骨骼生长发育进行了研究.组织学研究结果表明:去势雄性水貂骺软骨板P区软骨细胞数目较多,D区较窄,细胞肥大过程延迟,钙化及骨化速度降低;加之对骺软骨板宽度变化的测定,表明雄性水貂骺软骨板闭合时间在145日龄左右,55、85日龄去势雄性水貂骺软骨板闭合延迟40天以上.骺软骨板闭合的延迟虽然使55日龄去势雄性水貂挠骨长度相对于体长增加,55、85日龄去势雄性水貂挠骨长度相对于体重增加.但是并没有使骨骼绝对长度增加.115日龄以后去势雄性水貂骺软骨板闭合并没有延迟.     

去势对育成期雄性水貂骨骼生长发育影响的研究

采用常规石蜡切片技术对去势雄性水貂的骨骼生长发育进行了研究。组织学研究结果表明；去势；雄性水貂骺软骨板Ｐ区软骨细胞数目较多，Ｄ区较窄，细胞肥大过程延迟，钙化及骨化速度降低；加之对骺软骨板宽度变化的测定，表明雄性水貂骺软骨板闭俣时间在１４５日龄左右，５５、８５日龄去势雄性水貂骺软骨板闭合延迟４０天以上。     

犬肥大性骨营养不良

犬肥大性骨营养不良谢富强（北京农业大学动物医学院，１０００９４）肥大性骨营养不良常发生于生长快速的大型犬，以３～７月龄为多。发病部位主要在挠骨、尺骨和胫骨等长骨的干骺端。病变表现为干骺端骨质减少，骨化不足，甚至骨小梁崩解，但骺板发育与钙化正常。此外还...     

Cbfal对成骨细胞调控作用的研究进展

核心结合因子α1（Cbfal），是成骨细胞发生和分化的特异性转录因子。Cbfal／p56能激活T细胞特异性基因表达，Cbfal／1357的超表达能诱导多潜能间充质干细胞向成骨细胞表型分化，并激活骨钙蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、骨桥蛋白、骨唾液蛋白等成骨基因转录。Cbfal基因反义寡核苷酸则阻止OB分化和骨化形成，如果Cbfal基因缺失，将导致形成以破骨细胞、软骨细胞和软骨组织为主而缺乏成骨细胞的骨骼系统。骨形态发生蛋白、转移生长因子、肿瘤坏死因子α、成纤维细胞生长因子2、甲状旁腺激素、糖皮质激素地塞米松和1，25（OH）2D3等因子可上调或抑制Cbfal的表达，在骨的发育和组织钙化过程中起着重要的调节作用。     

盘羊脐带间充质干细胞的分离培养及诱导分化

试验旨在研究野生盘羊脐带间充质干细胞（umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs）的分离、培养及体外多向分化潜能等生物学特性。取盘羊分娩后的新生雄性胎儿脐带,采用组织块培养法分离盘羊UC-MSCs后进行体外培养,并对UC-MSCs进行成骨、成软骨和成脂诱导分化,检测其多向分化潜能。结果显示,应用组织块培养法获得的盘羊UC-MSCs具有UC-MSCs特有的呈簇、成纤维状的特性,细胞呈"S"型曲线生长,细胞的倍增时间平均为33.50 h,且可以向成骨细胞、成软骨细胞和成脂细胞分化。诱导分化特异性染色结果表明,野生盘羊UC-MSCs经诱导后的成骨细胞经茜素红S染色呈现典型的橙红色钙沉积物聚集,成软骨细胞经阿利新蓝染色呈现蓝色的软骨基质,成脂细胞经油红O染色呈现深红色的脂滴。实时荧光定量PCR检测结果发现,随着诱导时间的延长,成骨分化的细胞中骨内γ-羧基谷氨酸蛋白（BGLAP）、骨桥蛋白基因（OPN）、Runt相关转录因子2（RUNX2）基因的相对表达量极显著升高（P<0.01）;成软骨分化的细胞中光蛋白聚糖（LUM）基因的表达量明显增加,而双糖链蛋白多糖（BGN）和Y染色体性别决定区基因盒9（SOX9）基因表达量极显著提高（P<0.01）;成脂分化的细胞中脂蛋白酶（LPL）和过氧化物酶体增殖因子活化受体γ（PPAR-γ）基因的相对表达量极显著上升（P<0.01）。试验结果表明,用盘羊胎盘附带的脐带组织可以分离到盘羊UC-MSCs,且分离到的UC-MSCs具有分化为成骨细胞、成软骨细胞及成脂细胞等多向分化潜能。     

中西医结合治疗猪钙磷代谢障碍症

钙、磷代谢障碍症发生在幼年猪,导致的骨营养不良称佝偻病。病理特征是成骨细胞钙化作用不足,持久性软骨肥大及骨骺增大的暂时钙化作用不全。临床特征是消化紊乱,有异嗜癖,跛行及骨骼变形。是骨组织发育不良的一种非炎性疾病,维生素D缺乏在佝偻病发病中也起着重要作用。钙、磷代谢障碍症发生在成年猪,导致的骨营养不良称软骨病,或纤维性骨营养不良。病理特征是骨质的进行性脱钙,呈现骨质疏松及形成过剩的未钙化的骨基质,或软骨细胞性纤维组织增生,骨体增大而重量减轻。     

处于酸性环境中的肉鸡胫骨生长板软骨细胞发育周期时相

本文采用离体细胞培养技术，观察了环境酸碱度对肉鸡生长板软骨细胞发育周期时相的影响。将生长板软骨分别用０．２５％胰蛋白酶和０．２％Ⅱ型胶原酶消化以分离软骨细胞，用含有２０ｍＭＨＥＰＥＳ、１０％胎牛血清的ＤＭＥＭ培养基，３７℃培养，培养基ｐＨ值用１Ｎ盐酸调成ｐＨ７．４、７．２、７．０三组，每３天更换１次培养基。每日用倒置显微镜观察细胞形态变化及生长规律，到第９天时取培养细胞用流式细胞术做周期时相分析。同时取正常鸡及患ＴＤ病鸡生长板软骨细胞做周期时相分析。结果表明，酸性环境使生长板软骨细胞生长发育迟缓，Ｓ期与Ｇ２期细胞减少，Ｇ２期ＤＮＡ含量与Ｇ１期ＤＮＡ含量之比成不整倍性。ＴＤ病患鸡生长板软骨细胞之Ｓ期与Ｇ２期细胞数极度减少，与正常鸡生长板软骨细胞差异明显，酸性环境下生长板软骨细胞发育周期时相的变化与ＴＤ病患鸡生长板软骨细胞变化的结果相一致。     

锰、生物素、胆碱与家禽软腿病的关系

肉鸡的软腿病可以由许多病因引起,其后果也不尽相同.营养不足时,常常引起软骨的营养障碍,使长骨生长异常,腿骨短缩肥厚而且弯曲,跗关节也增大.软骨的营养障碍,可以由于锰、生物素和胆碱不足而引起.Wolback等(1953)发现,骨生长异常的首要标志是骨端软骨的组织学变化;Leach(1968)的研究表明,除了软骨细胞被破坏外,细胞增生是正常的.