猪胎盘营养转运相关基因在不同妊娠期的表达

【目的】探究不同妊娠时期猪胎盘的氨基酸、葡萄糖、脂肪酸转运体的表达模式。【方法】选择15头遗传背景、产仔数接近的杜洛克2~4胎经产健康母猪平均分为3组,所有母猪发情后使用相同公猪精液进行人工授精,在妊娠第40天(D40)、65天(D65)和95天(D95)通过麻醉分别取出每组母猪子宫,快速打开子宫分离出每个胎儿的胎盘组织,提取胎盘组织总RNA并反转录合成cDNA,利用合成的引物进行普通PCR扩增,用2.0%琼脂糖凝胶检测扩增产物。采用实时荧光定量PCR检测并比较3个时期胎盘中氨基酸、葡萄糖、脂肪酸转运体相关基因mRNA相对表达水平。【结果】PCR检测结果显示,氨基酸转运体相关基因(SLC7A1、SLC7A2、SLC7A3、SLC7A4、SLC7A10、SLC1A3、SLC1A5、SLC38A10、SLC36A1)、葡萄糖转运体相关基因(SLC2A1、SLC2A2、SLC2A3、SLC2A10、SLC2A12、SLC2A13)及脂肪酸转运体相关基因(FATP1、FATP2、FATP3、FATP4、FABP3、FABP5、FABP7、CD36)的片段长度均与预期相符。实时荧光定量PCR结果显示,在氨基酸转运体中,D65胎盘中SLC7A4、SLC7A10、SLC38A10基因表达水平显著高于D40胎盘(P＜0.05),而SLC7A2基因表达水平显著低于D40胎盘(P＜0.05),且D65胎盘的SLC1A3和SLC7A4基因表达水平均显著低于D95胎盘(P＜0.05);在葡萄糖转运体中,D65和D95胎盘的SLC2A3和SLC2A13基因表达水平显著高于D40胎盘(P＜0.05),D95胎盘的SLC2A1、SLC2A2和SLC2A12基因表达水平显著低于D65胎盘(P＜0.05);在脂肪酸转运体中,D65胎盘的FATP2、FATP4、FABP3、FABP5、FABP7和CD36基因表达水平显著高于D40胎盘(P＜0.05),而FATP1、FATP4和CD36基因表达水平显著低于D95胎盘(P＜0.05)。【结论】在猪妊娠过程中,胎盘中SLC7A10、SLC38A10、SLC7A4、SLC2A3、FATP1、FATP4、FABP5、CD36等基因可能是影响胎儿生长发育的重要营养转运基因。     

人胎盘组织液对奶牛同期发情受胎率的影响

[目的]为提高奶牛受胎率本试验针对人胎盘组织液提高受胎率,[方法]同时做了两批同期发情,分别为A组和B组,A组没有使用人胎盘组织液,B组使用了胎盘组织液,奶牛发情后,进行人工授精,40天后用B超进行孕检,从试验结果看到注射胎盘组织液的A组受胎率明显高于没有注射的B组。[结论]证明人胎盘组织液对提高奶牛发情具有良好作用。     

羊驼胎盘中孕酮、雌三醇和人绒毛膜促性腺激素的测定

利用放射免疫分析方法测定了每只足月分娩羊驼胎盘中孕酮、雌三醇和人绒毛膜促性腺激素的含量分别为（19．5770±17．1303）μg／mL、（6．4110±4．8459）pg／mL和（15．1550±6．2750）pg／mL，为羊驼胎盘的再利用奠定了理论基础。     

山羊妊娠早期胎儿胎盘血管形成及相关基因的表达

旨在探究大足黑山羊妊娠早期胎儿胎盘血管发育、分布和血管生成相关因子表达状况,并对血管生成相关因子表达之间和血管发育进行相关性分析。本研究随机选取15只8月龄、体格相近、身体健康的国家级畜禽遗传资源—大足黑山羊青年母羊,经同一种公羊自然交配后(以末次配种当天记为0 d),经剖腹产手术采集妊娠第20、25和30天的胎儿和胎儿胎盘以及经屠宰采集妊娠第45和60天的胎儿和胎儿胎盘作为研究对象,通过免疫组化法评估胎盘血管发育和分布情况,采用qRT-PCR技术检测主要血管生成相关基因的mRNA表达水平,分析血管生成相关基因之间以及与胎盘血管发育分布的相关性。结果显示,胎儿体重和体长随着妊娠的进行逐渐增加,且血管内皮细胞阳性率处于较高水平(>26%)。山羊胎儿胎盘毛细血管总面积/组织区域面积(CAD)逐渐升高;毛细血管总数/单位组织区域面积(CND)在妊娠25~30 d增加,30~60 d降低,毛细血管总面积/毛细血管根数(APC)呈相反趋势;毛细血管总周长/单位组织区域面积(CSD)无显著变化。妊娠早期胎儿胎盘VEGFA的表达量随着妊娠的进行逐渐升高,且与血管分布存在一定的相关性,其受体FLT1和KDR表达量呈先增高后降低的趋势,分别在30和45 d达到峰值。血管生成相关基因ANGPT1/2及其受体TEK和FGF2及其受体FGFR2的表达均在妊娠30 d时较高。综上表明,在妊娠30 d前,胎儿胎盘主要通过毛细血管形成分支促进血管面积的增加;而在30~60 d,主要通过单位血管的增粗促进血管面积的增加,并且血管生成相关基因的表达在妊娠30 d时较高,这可能和子叶开始形成有关。山羊妊娠早期胎儿胎盘中VEGFA可能通过其受体结合与其他血管生成因子共同作用调控胎儿胎盘血管形成。     

猪胎盘PPARγ编码序列的克隆、序列分析和表达

过氧化物酶增殖物激活受体r(peroxisome proliferator-activated receptor type gamma,PPARγ)对人和小鼠的胎盘形成起重要作用,但在猪胎盘中其编码序列和作用还不明确。为了掌握母猪胎盘PPARγ剪辑方式和准确的编码序列,分析其结构与功能的关系,应用高保真PCR技术从4个不同妊娠时期的7份胎盘样品(61个胎囊)克隆出了一致性的PPARγ目的片段(KM382175),其编码序列和预测蛋白序列与人、鼠、牛、羊的具有较高的相似性;同时发现胎盘PPARγ蛋白与猪卵巢来源和猪皮下脂肪来源PPARγ蛋白在配体结合区分别存在1个和2个氨基酸残基差异。构建pET28α(+)-PPARγ表达质粒,重组蛋白应用兔抗PPARγ和鼠抗His单克隆抗体2种抗体Western blot双重检测阳性。研究表明,妊娠期猪胎盘PPARγ剪辑方式一致(1 428bp),稳定的PPARγ结构对正常生理功能的维持具有重要意义,但配体结合区氨基酸的改变可能意味着组织差异性的存在;本研究同时实现了PPARγ的原核表达,将为进一步研究PPARγ对胎盘的作用及其与母猪产仔性能的关联性提供基础理论指导。     

人神经母细胞瘤细胞异种克隆胞质受体的选择

本研究检测人神经母细胞瘤细胞-水牛和人神经母细胞瘤细胞-猪重构胚胎的体外发育潜能,以期建立人神经细胞母细胞瘤细胞的异种治疗性克隆模型,为进一步研究人癌症发生过程中的表观遗传学修饰机制及分离得到正常的人类胚胎干细胞奠定基础。分别以水牛颗粒细胞和人神经母细胞瘤细胞为供体,水牛卵母细胞为受体构建克隆胚胎,然后检测这2种重构胚胎的体外发育效率;再以猪卵母细胞为胞质受体,同样以上述2种体细胞为供体细胞构建重构胚胎。结果显示,人神经母细胞瘤细胞-水牛重构胚胎囊胚发育率显著低于水牛同种克隆胚胎的（1.1%∶12.1%,P〈0.05）,而融合率（83.7%∶79.4%,P〉0.05）和卵裂率（55.8%∶58.2%,P〉0.05）无显著差异。但是,当以猪卵母细胞为受体胞质时,人-猪重构胚胎卵裂率显著低于水牛-猪重构胚胎（43.7%∶89.8%,P〈0.05）,但重构胚胎融合率和囊胚率差异不显著（85.8%∶82.5%,0∶1.4%,P〉0.05）。结果表明,人神经母细胞瘤细胞-水牛和人神经母细胞瘤细胞-猪异种重构胚胎可以在体外发育,尽管其囊胚发育率相对比较低。     

miR-127和miR-136在转基因克隆绵羊胎盘中的表达分析及其靶基因的鉴定

克隆动物胎盘发育缺陷是造成动物克隆效率低下的一个重要原因。目前认为克隆胎盘发育异常通常是由于一些基因表达的异常所致,与表观遗传修饰有关。microRNA是一种重要的表观遗传修饰方式,对动物胚胎发育和胎盘的形成有着重要的调控作用。为研究miR-127和miR-136在克隆动物胎盘中的表达情况及其与克隆动物发育缺陷的关系,本实验运用荧光定量PCR分析了死亡克隆绵羊胎盘和同期普通绵羊胎盘组织中miR-127和miR-136的相对表达量,并鉴定了miR-127和miR-136的靶基因及靶基因在胎盘中的表达情况。结果显示,miR-127和miR-136在克隆绵羊胎盘中的表达量分别增加了3.1和2.8倍。EGFP荧光敲除实验证实,胎盘发育相关基因Rtl1是miR-127和miR-136的靶基因,同时定量PCR分析发现Rtl1基因在克隆绵羊胎盘中的表达量降低了3/5。结果说明,miR-127和miR-136在克隆胎盘中的异常表达可导致Rtl1基因的低表达,这很可能是导致克隆动物死亡的一个重要原因。     

蛋清溶菌酶淀粉样纤维对人神经母细胞瘤细胞的毒性

本研究旨在探讨一定理化条件下形成的蛋清溶菌酶淀粉样纤维对人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）的毒性作用。采用高温（57±0.1）℃、pH 2.0甘氨酸溶液、振荡条件下孵育100 μmol·L^-1的蛋清溶菌酶蛋白,使其聚集成为蛋清溶菌酶淀粉样纤维;透射电子显微镜观察蛋清溶菌酶淀粉样纤维的超微结构,ANS荧光法测定纤维的疏水性,圆二色谱法测定并计算纤维的二级结构含量;将此纤维作用于培养的SH-SY5Y神经细胞,MTT法检测细胞活力,核染色法检测细胞凋亡状况。透射电镜结果显示,蛋清溶菌酶在孵育4 d后形成了呈短杆状超微结构的淀粉样纤维;与天然蛋清溶菌酶蛋白相比,纤维的疏水性和二级结构β折叠含量均显著提高;且1~3 μmol·L^-1纤维作用于SH-SY5Y细胞12、24和48 h均产生了显著的毒性作用（P<0.01）,1、2和3 μmol·L^-1纤维作用细胞12 h时的细胞活力分别为75.16%±15.51%、67.54%±12.13%和67.89%±10.26%,作用24 h的细胞活力分别为75.78±13.01%、58.41%±5.55%和61.90%±8.94%,作用48 h的细胞活力分别为71.59%±14.75%、55.65%±5.78%和46.45%±6.23%,细胞活力降低呈现明显的浓度依赖性和时间依赖性,且细胞核染色呈现典型的核凋亡变化。结果提示,蛋清溶菌酶在一定理化条件下可形成具有神经细胞毒性的淀粉样纤维,为解释朊蛋白或其他蛋白质形成淀粉样纤维的机制提供参考。     

绵羊日粮中添加亚硒酸钠对胎盘中SelP和ApoER-2蛋白表达的影响

试验通过在妊娠母羊日粮中添加不同水平的亚硒酸钠,研究硒对绵羊胎盘SelP和ApoER-2的蛋白表达的影响,为进一步揭示硒的胎盘转运及硒对胎儿发育的调控机制提供实验依据。选取体重、体型、年龄、胎次相近的湖羊妊娠母羊80只,随机分为两组,分别饲喂基础日粮和添加0.5 mg/(kg DM·d)亚硒酸钠的日粮。预试期7 d,正试期150 d。结果表明:SelP和ApoER-2主要在妊娠母羊胎盘滋养层细胞中表达。日粮中亚硒酸钠的添加,极显著提高了妊娠母羊胎盘滋养层细胞中SelP的表达量(P<0.01),却极显著降低了ApoER-2蛋白的表达量(P<0.01)。     

BMP4对SVZa神经干细胞增殖和分化的调控

为了解BMPs在SVZa神经干细胞增殖和分化过程中的作用，在使用不同浓度BMP4诱导SVZa神经干细胞增殖分化的基础上，利用启动子活体荧光标记技术，动态显示BMP4的表达．结果表明，低浓度(1～5ng／mL)BMP4促进sVZa神经干细胞的增殖，而高浓度BMP4(10～100ng／mL)抑制其增殖；BMP4在分化的早期(10d)促进神经元的分化，而在4d以后抑制神经元的分化；加入BMP4的拮抗剂Noggin可以阻断其作用,在嗅球，BMP4的主要作用可能是促使神经元祖细胞退出细胞周期启动分化，在RMS可能为促进其增殖并维持神经元祖细胞状态，而在SVZa，BMP4则主要促进神经干细胞向星形胶质细胞分化。     

猪妊娠过程中胎盘发育及其调控基因研究进展

胎盘是母体与胎儿进行营养物质、气体及废弃物交换的重要器官。妊娠过程中,猪胎盘功能是影响母猪产仔数、死胎数及断奶前死亡率的最重要因素之一。作者介绍了猪妊娠早期胎盘的建立过程及形态变化、妊娠中期胎盘褶皱的形成、妊娠后期胎盘的进一步发育,阐述了这3个妊娠阶段猪胎盘的形态变化与其对应的胎盘功能之间的关系,并介绍了目前所发现的调控猪胎盘建立和发育的相关基因,包括透明质酸酶（HYAL）、组织蛋白酶（CTSB和CTSL1）及乙酰肝素酶（HPSE）基因,为提高母猪胎盘效率、增加母猪繁殖力提供科学依据。     

胎盘提取物的制备与免疫调节功能及应用研究进展

主要介绍了胎盘提取物的制备方法、免疫调节功能以及在生产生活中的应用。总结出, 胎盘提取物有着免疫调节、抗氧化、抗肿瘤和营养作用;其制备方法主要有超滤法、酶解法和微生物发酵法, 各自具有优势和不足, 选择胎盘提取物制备方法时可以根据自有的条件和要求及前人的经验综合判断;在皮肤护理方面, 胎盘提取物可以作为抗氧化成分添加到护肤品中以起到延缓皮肤衰老的作用;在疫病治疗方面, 能改善肝炎患者的临床症状和肝功能, 对胰腺癌细胞的增殖有负调控作用, 对于超敏反应也有一定的治疗效果, 在神经再生方向效果显著。胎盘提取物在保健品和护肤品研发、疾病治疗方面应用前景广阔。     

猪胎儿神经干细胞的分离培养和分化

本研究旨在从猪胎儿脑组织中分离培养神经干细胞,观察神经干细胞生长特性和体外增殖、分化特点.利用神经干细胞培养体系,从胎龄30 d的猪胎儿脑组织中分离培养神经干细胞并诱导神经干细胞贴壁分化,采用RT-PCR技术检测干细胞和分化细胞表面标志或相关基因.结果成功分离培养出神经干细胞,神经干细胞具有分化潜能.神经干细胞中Nestin表达强阳性,β-actin、DCX、Hesl、Oct4、Desmin、CD-90、Nanog和Sox2表达阳性;体外诱导的神经干细胞可以分化为星形胶质细胞(表达GFAP)、少突胶质细胞(表达GalC)和神经元细胞(表达NF、NSE和MAP2).结果提示,从猪胎儿脑组织分离神经干细胞具有可行性和有效性,神经干细胞具有自我更新、增殖和分化潜能.     

Wnt信号通路在牛胎盘发育过程中的功能研究进展

胎盘是哺乳动物在妊娠期间胎儿和母体之间的联系枢纽,因此,胎盘发育是否正常在妊娠中起着关键的作用。Wnt信号通路在胚胎发育和胎盘形成的过程中有着重要的作用,作者通过回顾几条已经研究较为清楚的Wnt信号通路和牛早期胚胎和胎盘的形成过程,介绍了Wnt信号通路的组成部分在体细胞核移植（somatic cell nuclear transfer,SCNT）牛和正常人工授精的牛的胚胎早期表达,提出了DKK-1和Fzd4的表达对于早期胎盘形成和发育有特殊的作用。此外,抑制MAP2K和GSK3信号可以激活Wnt信号通路,增加内细胞团和滋养层细胞的数量,加速囊胚的发育。SCNT牛和正常人工授精的牛早期胎盘中E-cadherin和β-catenin蛋白的磷酸化程度相似,所以对于Wnt信号通路在牛胎盘的早期形成和发育中的作用还需进一步的了解和研究。     

Research Progress on the Function of Wnt Signaling Pathway in the Development of Bovine Placenta

Placenta is the link between the fetus and the maternal body during pregnancy.Therefore, the pregnancy outcome of the key was related by the normal development of the placenta.Wnt signaling pathway plays an important role in the development of embryo and placenta formation, several Wnt pathways which have been clear study and the formation process of early embryo and placenta in cattle are reviewed in this article,the early expression of the Wnt pathway components in the somatic cell nuclear transfer (SCNT) cattle and normal insemination of bovine embryos is introduced. The expression of DKK-1 and Fzd4 have a special role in the formation and development of early placenta, but its molecular mechanism is not clear. In addition, the Wnt signaling pathway is activated by inhibiting the MAP2K and GSK3, led to the inner cell mass and trophoblast cell number increased and blastocyst development speed. But it is similar to the extent of phosphorylation of E-cadherin and beta-catenin protein in the early placenta of cows with SCNT and normal insemination, therefore, the role of Wnt signaling pathway in the early formation and development of bovine placenta should be further understood and studied.     

神经干细胞的研究现状及展望

神经干细胞是一类具有自我复制、自我更新能力,高度增殖和多种分化潜能的神经前体细胞.为了进一步了解神经干细胞的特性,探求神经系统疾病治疗的新途径,文章参阅国内外相关文献,重点介绍了神经干细胞的分布、纯化培养的方法、增殖和分化的影响因素、应用及目前存在的问题等.     

NO对胎盘功能和胎儿生长发育的影响

一氧化氮(NO)化学结构简单,性质活跃,广泛参与机体的生理、病理调节。在妊娠期,NO可降低血管对加压物质的反应性,降低外周阻力及血压。目前认为,NO产生减少是妊娠高血压征合征发病的重要原因,是导致母体妊娠期心血管系统发生血容量增加、血压下降、血液重新分布等生理性改变的重要因素,胎盘局部NO及其相关因子对胎盘功能和胎儿的生长发育有直接的影响作用。     

羊驼胎盘中GH和PRL含量的测定

为了更好的研究羊驼胎盘的再利用,采用放射免疫分析(RIA)方法测定羊驼产后胎盘中生长激素(GH)和催乳素(PRL)的含量,对羊驼产后胎盘中GH和PRL的表达量进行了精确定量。RIA法测定结果显示,平均每只羊驼胎盘含GH为13.084 5 ng,含PRL约153.3μg,结果提示,羊驼胎盘可作为除垂体外GH和PRL,尤其是PRL天然产物的来源。     

Drug-metabolizing Enzymes in the Placenta and Foetus of Camel and Sheep

Contents The activities of cytochrome P-450 and the P-450 dependent aminopyrine -N-demethylase and aniline 4-hydroxylase (Phase I, drugmetabolizing enzymes) and UDP-glucurony-l-transferase (a Phase II drug-metabolizing enzyme) have been measured in vitro in the placenta and liver of camels and sheep during pregnancy. The placenta of late pregnancy of both species produced 50% of the activity in maternal liver of phase I drug-metabolizing enzymes. The rate of O-aminophenol glucuronide was low both in placenta and foetal liver. It is suggested that close to term the placenta and foetal liver are capable of metabolizing drugs by P-450 mediated phase I reactions. Inhalt: Arzneimittel-metabolisierende Enzyme von Plazenta und Fötus bei Kamel und Schaf Während der Trächtigkeit wurde die Aktivität der Cytochrom P-450 abhängigen Aminophyrine -N-Demethylase, Anilin 4-Hydroxylase (Phase I metabolisierendes Enzym) und der UDP-Glucuronyl-1 Transferase (Phase II metabolisierendes Enzym) unter in vitro Bedingungen in Plazenta- und Lebergewebe von Kamelen und Schafen gemessen. In beiden Tierarten produzierte die Plazenta während der späten Trächtigkeit 50% der Aktivität, wie sie die mütterliche Plazenta der “Phase I—Enzyme” produziert. Die O-Aminophenol Glucuronide waren dagegen gering in Plazenta und fetaler Leber. Es wird angenommen, daβ die Plazenta und die fetale Leber kurz vor der Geburt in der Lage sind, Arzneimittel durch die Cytochrom P-450 abhängige Phase I-Reaktionen zu metabolisieren.