运输应激对小鼠心脏和肝脏的病理损伤及对Bcl-2和Bax表达的影响

为了探究运输应激对小鼠心脏、肝脏组织的损伤以及对Bcl-2和Bax表达的影响,试验将小鼠分成对照组和处理组,处理组模拟短途运输环境处理2 h,处理完毕后处死所有小鼠,采取心脏、肝脏组织,采用H.E.染色、免疫组织化学和Western-blot等方法检测运输应激对小鼠心脏、肝脏组织的病理损伤及对Bcl-2和Bax表达量的变化影响。结果表明:处理组心脏组织血管充血,且心肌细胞核轻微肿大;肝脏血管充血,并可见炎性细胞浸润以及肝细胞颗粒变性。在心脏中,Bcl-2和Bax主要定位于心肌细胞质,Bcl-2在处理组的心脏血管内皮细胞中有表达;在肝脏中,Bcl-2和Bax主要在肝细胞质中表达。与对照组相比,处理组心脏Bcl-2和Bax表达量及Bcl-2/Bax比值均无显著差异(P>0.05);处理组肝脏Bcl-2和Bax表达量均显著上升(P<0.05),而Bcl-2/Bax的比值无显著差异(P>0.05)。说明运输应激会对小鼠心脏和肝脏造成一定程度的损伤,肝脏Bcl-2和Bax表达量在运输应激后增加。     

Bcl-2和Bax在不同发情时期小鼠子宫中的表达

利用免疫组织化学和RT-PCR等方法,分别检测了凋亡调节基因Bcl-2和Bax在不同发情时期及超排处理后的小鼠子宫中的表达情况,并进行了分析。1材料与方法1.1主要器材与试剂PCR仪(美国MJ公司),电泳仪(北京六一厂),紫外分光光度仪(美国pharmacia公司),免疫组织化学所有的一抗为兔抗小     

银杏叶提取物对急性肝衰竭大鼠肝脏Bcl-2及Bax表达的影响

为了观察银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,GBE)对由硫代乙酰胺(TAA)所致肝损伤大鼠肝脏的作用及其对Bcl-2、Bax的影响,并探讨其作用机制,试验将大鼠分5组,其中GBE低、中、高剂量组(50,100,200 mg/kg)连续灌服GBE 30 d,1次/d,正常对照组和模型组分别给予等体积的生理盐水;模型组和GBE低、中、高剂量组在第28天用300 mg/kg的TAA腹腔注射,正常对照组腹腔注射等体积的生理盐水,连续3 d,于末次注射后24,48,72小时采血,用试剂盒检测血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)的水平,并用RT-PCR和Western-blot方法检测各组肝脏Bcl-2、BaxmRNA和蛋白水平的表达情况。结果表明:与正常对照组相比,模型组血清中ALT、AST水平明显升高,在肝脏中Bcl-2 mRNA表达水平下调,Bcl-2蛋白水平在48小时时达到最低点,而Bax mRNA和蛋白水平均上调;与模型组相比,GBE组血清中ALT、AST水平明显降低,肝脏中Bcl-2 mRNA和蛋白水平均上调,Bax mRNA和蛋白水平均下调。     

脾虚模型小鼠肾脏中Bcl-2、Bax和Fas蛋白表达研究

目的:采用灌胃法诱导SD清洁级小鼠脾虚动物模型,造模完成后检测小鼠肾脏中Bcl-2、Fas和Bax蛋白表达的改变,并探讨其意义。方法:采用大承气汤诱导小鼠脾虚模型,H.E染色后光镜下观察肾脏局部形态,SP法检测Bcl-2、Fas和Bax蛋白在肾脏细胞中的表达。结果:脾虚组小鼠肾小球部位出现炎症,肾近曲小管和远曲小管部位出现凝固性坏死;肾脏细胞中Bax和Fas蛋白的表达率升高(P<0.05),Bcl-2表达降低(P<0.05)。结论:脾虚会引发肾脏发生病理变化,同时会使Bax和Fas蛋白的表达升高,Bcl-2蛋白的表达下降,增加了肾脏细胞发生凋亡的机率。     

雌激素对大鼠小脑中Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

采用免疫组织化学超敏SP法检测摘除卵巢及用外源性17β-雌二醇治疗后SD大鼠小脑中Bcl-2和Bax蛋白表达的变化.结果显示,摘除双侧卵巢后,SD大鼠小脑皮质及深层核团中Bcl-2的表达有不同程度的降低,而Bax的表达出现不同程度的上升;给予外源性17β-雌二醇治疗后,2种蛋白的比例基本恢复正常.表明,雌激素能够下调小脑皮层及小脑深层核团中Bax蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白的表达,对小脑神经元具有保护作用.     

运输应激对小鼠肠道的病理损伤及Bcl-2和Bax表达的影响

为了探究运输应激对小鼠小肠结构和Bcl-2和Bax表达的影响,本研究以16只ICR小鼠为试验对象,将其随机分为对照组(24℃环境下饲养,除了禁食禁水外不做任何处理)和处理组(人工模拟运输应激,处理条件为35℃、160 r/min摇床处理2h),采集十二指肠、空肠和回肠,HE染色观察小肠病理变化,同时采用免疫组织化学和Western Blot探讨运输应激对小鼠肠道Bcl-2和Bax表达的影响。结果表明:与对照组相比,处理组小鼠小肠组织形态结构损害明显,表现为小肠绒毛断裂、小肠黏膜细胞和隐窝细胞脱落以及淋巴细胞浸润;免疫组化定位发现,对照组Bcl-2和Bax表达强度不高,处理组Bcl-2在损伤的肠黏膜上皮细胞中高表达,Bax在肠腺细胞胞质中高表达;与对照组相比,处理组十二指肠和回肠Bcl-2和Bax的表达量增加(P0.05),十二指肠Bcl-2/Bax比值降低(P0.05),空肠和回肠Bcl-2/Bax比值升高(P0.05)。综上,运输应激会破坏肠道结构的完整性,运输后肠道Bcl-2和Bax蛋白的表达发生变化,表明运输应激对肠道的损伤作用与细胞凋亡途径有关,通过Bcl-2和Bax 2种蛋白进行调节。     

雌激素对去卵巢大鼠大脑皮质和海马中Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

利用免疫组织化学超敏SP法检测SD大鼠摘除卵巢及外源性17β-雌二醇治疗后大脑皮质和海马中Bcl-2和Bax蛋白表达的变化.结果显示,摘除双侧卵巢后,大鼠大脑皮质和海马中Bcl-2不同程度降低,而Bax的表达出现不同程度的上升,17β-雌二醇治疗后,2种蛋白的表达基本恢复正常.表明雌激素能够不同程度的上调大脑皮质和海马中Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达,从而对大脑皮质及海马神经元具有保护作用.     

银杏叶提取物对大鼠大脑皮质中凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达量的影响

为探讨银杏叶提取物（EGb）对去卵巢大鼠神经细胞的保护作用及其机制，采用免疫组织化学SP法检测了假手术大鼠、去卵巢大鼠和去卵巢后用EGb治疗大鼠的大脑皮质中凋亡相关蛋白Bcl～2和Bax的表达量。结果，与假手术大鼠相比，摘除双侧卵巢的大鼠大脑皮质中Bcl-2阳性细胞的数目和表达强度极显著下降（P〈0．01），Bax阳性细胞的数目和表达强度极显著增加（P〈0．01）；用EGb对摘除双侧卵巢的大鼠治疗后，其Bcl-2阳性细胞的表达强度极显著增加（P〈0．01），而Bax阳性细胞的数目极显著下降（P〈0．01），Bax阳性细胞的表达强度也显著下降（P〈0．05）。结果表明，摘除双侧卵巢后大鼠因缺乏内源性雌激素而导致大脑皮质中凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达量发生了改变，而EGb能通过上调Bcl-2和下调Bax蛋白的表达对神经细胞起保护作用。     

小花棘豆中毒对家兔睾丸细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

将24只家兔随机分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,试验组饲粮分别按照Ⅰ组15%(苦马豆素含量30mg/kg)、Ⅱ组30%(苦马豆素含量60mg/kg)、Ⅲ组45%(苦马豆素含量90mg/kg)的比例添加小花棘豆,对照组仅饲喂青干草,试验期70d;分别于攻毒后第14,35,70天每次每组随机采集2只家兔的睾丸,通过TUNEL法检测细胞凋亡,real-time PCR检测Bcl-2、Bax mRNA的表达,免疫组化检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果显示:从第35天开始,试验Ⅱ组和Ⅲ组家兔睾丸细胞凋亡指数、Bcl-2和Bax mRNA的表达均与对照差异极显著(P<0.01),试验Ⅰ组家兔睾丸细胞凋亡指数、Bcl-2和Bax mRNA的表达均与对照差异显著(P<0.05);试验组家兔睾丸组织Bcl-2蛋白表达均明显低于对照,Bax蛋白表达均明显高于对照,其差异性随中毒时间的延长而变化。结果表明:小花棘豆中毒可导致家兔睾丸组织生精细胞凋亡,且与小花棘豆中毒呈现一定的时间-剂量效应,这种作用可能与Bcl-2和Bax基因表达有关。     

运输应激对荣昌猪肝脏生化指标及腹泻的影响

为获得荣昌猪抵抗运输应激的能力及运输应激对荣昌猪影响的规律, 选择40日龄荣昌仔猪36头,分试验组及对照组,试验组仔猪在15℃室外温度、50 km/h的车速条件下运输2 h约100 km,分别监测运输前、运输后30 min、运输后第1天、运输后第3天、运输后第7天、运输后第15天试验组及对照组仔猪肝脏主要生化指标和腹泻发生率.结果表明,运输后30 min时肝脏主要生化指标谷丙转氨酶、谷草转氨酶、谷氨酰氨基转移酶的指标升高明显,均显著大于正常范围值,运输后第3天下降,运输后第15天时逐渐恢复接近正常值;经过2 h运输的试验仔猪比位于圈舍的对照组仔猪更易腹泻,腹泻率达33.3%.荣昌仔猪较易受运输应激的影响,运输应激后较易出现腹泻.     

枸杞多糖对双酚A暴露小鼠生精细胞Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

研究枸杞多糖(LBP)对双酚A(BPA)暴露小鼠睾丸生精细胞中Caspase-3、Bcl-2和Bax凋亡蛋白表达的影响.将50只成年雄性昆明小鼠随机分为A、B、C、D、E共5组,每组10只.除正常对照组(A组)注射等量橄榄油外,其余4组小鼠分别腹腔注射20 mg·kg 1的BPA,连续7d,建立生精损伤模型.同时C、D、E组小鼠分别灌服7d不同剂量的LBP(50、100、200 mg·kg-1),正常对照组(A组)和模型组(B组)小鼠灌服等量生理盐水.制备组织切片观察睾丸组织病理学变化,免疫组化法测定睾丸组织Caspase-3、Bax和Bcl-2凋亡蛋白的表达.结果显示,BPA可极显著增加睾丸生精细胞Caspase-3和Bax的阳性细胞数量(P＜0.01),降低Bcl-2的表达(P＜0.05).补充不同剂量LBP后,Caspase-3的阳性表达均极显著低于模型组(P＜0.01).200 mg·kg-1 LBP组生精细胞Bax的阳性细胞数量极显著低于模型组(P＜0.01);Bcl-2的表达随LBP剂量的增加而提高,其中200 mg·kg1LBP组阳性表达极显著高于模型组(P＜0.01),Bcl-2/Bax比值也随着LBP剂量的增加而上升.结果表明,枸杞多糖通过调节凋亡相关基因的表达,抑制生精细胞凋亡,从而缓解双酚A引起的雄性生殖损伤.     

游泳应激对小鼠血液和肝脏脂质过氧化水平的影响

为探讨游泳应激对小鼠血液和肝脏脂质过氧化水平的影响,试验选取50只昆明小鼠进行游泳试验,于游泳前和游泳10、20、30、50min后分别随机选取10只小鼠眼眶采血致死,采集血液和肝脏,测定样品中MDA含量、SOD和GSH-Px活性。结果表明,游泳应激使小鼠血清MDA含量持续升高并显著高于游泳前对照组(P<0.05);SOD活性先显著下降(P<0.05),之后缓慢升高,游泳50min后仍显著低于对照组(P<0.05);10min游泳应激使小鼠血清GSH-Px活性显著上升(P<0.05),之后缓慢下降,50min后与对照组无显著差异。游泳应激使小鼠肝脏MDA含量显著升高(P<0.05),游泳50min后肝脏SOD活性显著升高(P<0.05),GSH-Px活性在游泳20、30、50min后均显著下降(P<0.05)。结果提示游泳应激能显著影响小鼠血液和肝脏组织脂质过氧化水平。     

17-β雌二醇对去卵巢大鼠垂体中Bcl-2和Bax表达的影响

为了探讨雌激素对垂体细胞发育和凋亡的影响,利用免疫组化SP法检测摘除卵巢及补充外源性17-β雌二醇后的不同时间大鼠垂体中Bcl-2和Bax表达的变化。结果显示：假去卵巢组（SHAM）Bcl-2和Bax的表达在不同给药时间无显著变化（P〉0.05）;同时间去卵巢（OVX）组与SHAM、去卵巢并注射17-β雌二醇组（OVX＋E2）相比,差异均显著（P〈0.05）;去卵巢给药后6周,OVX组垂体内Bcl-2的表达与之前相比有所增加,而Bax则减少,给药后8周,各组与6周后相比无显著差异（P〉0.05）;同组Bcl-2的表达随时间逐渐减少,4周后最少,Bax的表达则逐渐增加,4周后达到该组的峰值。结果表明,雌激素在垂体的结构维持和功能发挥中起一定的调节作用。     

肉牛肝脏miR-31对运输应激的响应及生物学功能预测

旨在探究运输应激肉牛肝脏中miR-31的表达变化,并对其进行生物学功能预测,从多个方面探讨运输应激与miR-31间的关系。试验将10头体况相似的健康肉牛分为运输0 h组和运输6 h组,以速度为80 km/h进行公路运输应激。运用qRT-PCR方法检测肉牛肝脏组织中miR-31的表达,采用生物信息学分析方法对miR-31进行生物学功能预测。结果表明,与运输0 h组相比,运输6 h组肝脏中miR-31表达量极显著升高(P<0.01)。应用Targetscan、miRWalk、miRDB和miRTarBase 4款软件对miR-31靶基因进行预测,分别预测到427,1 261,122,307个靶基因。通过GO富集分析发现miR-31主要参与细胞过程,生物调节,代谢过程,多细胞生物过程,对刺激的反应等生物过程。其中,RAB27A,PPP2R2A,ARID1A可能是与应激联系密切的靶基因。结果提示,运输应激肉牛肝脏miR-31的上调能够对细胞生长发育、增殖和凋亡等方面产生重要影响。     

圆弧青霉菌毒素—青霉酸对小鼠脾脏组织细胞凋亡和Bcl-2、Bax及Fas/FasL基因mRNA表达的影响

为探讨圆弧青霉菌毒素—青霉酸对小鼠脾脏组织的毒性作用,采用TUNEL法和RT-PCR对染毒后脾脏细胞凋亡和Bcl-2、Bax及Fas/FasL等凋亡相关基因mRNA表达的影响进行研究。结果表明,随着青霉酸染毒剂量的增加,脾脏组织中细胞凋亡数量逐渐增多。染青霉酸低剂量组脾脏组织中Bcl-2、Fas和FasL的表达增加,Bax表达下降,高剂量组和中剂量组中Bax、Fas和FasL表达增加,Bcl-2表达下降,说明青霉酸可能通过促使Bax、Fas/FasL表达增加和Bcl-2表达降低来诱导小鼠脾脏细胞的凋亡。     

多胎和单胎山羊品种Bcl-2和Bax基因的克隆及组织表达研究

以低繁藏山羊和高繁金堂黑山羊卵巢等组织为试验材料,通过RT-PCR,对Bcl-2和Bax基因c DNA进行克隆、序列分析,并采用Real-time PCR对其在发情前期母羊垂体、卵巢、子宫和输卵管等组织的表达进行检测。结果:山羊Bcl-2基因编码区全长为690 bp,共编码229个氨基酸,2个品种间有3处碱基差异,但未导致氨基酸的差异;Bax基因编码区全长为579 bp,共编码192个氨基酸,2个品种的同源性为100%。Bcl-2和Bax mRNA在2个品种山羊的卵巢、子宫、输卵管、垂体中均有表达,但品种间差异不显著(P0.05)。说明Bcl-2和Bax基因在动物进化中比较保守,与山羊多羔性状的相关性有待进一步研究。     

冷应激对猪脂肪、肝脏、心脏与肾脏组织中PPARγ2 mRNA及蛋白表达的影响

为了研究冷应激对机体的影响及过氧化物酶体增殖物激活受体γ2（PPARγ2）在冷应激中的作用,本试验选用30头军牧一号猪,并随机分成5组,包括常温对照组和4个冷应激组。常温组在（21±2）℃饲养,冷应激组的温度设置分别为：（-10±2）、（-5±2）、（0±2）、（5±2）℃。冷应激2h屠宰后分别采集猪腹腔脂肪、颈部皮下脂肪、胸部皮下脂肪、肝脏、心脏与肾脏组织样品提取总RNA与总蛋白。通过荧光定量PCR技术检测了PPARγ2mR-NA的表达量;通过Western blot检测PPARγ2蛋白表达量。结果显示,各温度组猪腹腔脂肪、颈部皮下脂肪、胸部皮下脂肪、肝脏、心脏PPARγ2mRNA及蛋白表达量总体上差异显著（P〈0.01）,肾脏PPARγ2mRNA表达量总体显著升高,但其蛋白表达量总体呈下降趋势。结果表明,PPARγ2对冷刺激非常敏感,它除了可以调节冷应激时的脂肪代谢平衡,还对心脏有较好的保护作用,但是对肾脏的作用有限。本试验显示了冷应激中PPARγ2在脂肪代谢与能量代谢中作用,为研究冷应激对机体的影响及畜禽品质的提高奠定了基础。     

蒙古绵羊在不同季节的生长过程中Bcl-2与Bax基因在皮肤中的表达

笔者应用免疫组化s-p法,检测个不同月份石蜡包埋组织切块Bcl-2和Bax基因的表达情痀。试验结果：Bcl-2在皮肤细胞内表达情痀各个月份不同,4月和10月之间无显著差异（P＞0.05）,而分别与5,6,8,12月4个月份之间差异显著（P＜0.05）;5,6月和8月之间无显著差异（P＞0.05）,而分别与4,10,12月3个月份之间差异显著（P＜0.05）。皮肤的厚度与Bcl的表达呈正比关系。4月份起开始变薄,5-6月份为最薄。Bax在皮肤细胞内表达4,5;6,8;10,12三组组内不同月份Bax表达差异不显著（P＞0.05）,而组间表达差异均显著（P＜0.05）Bax在5-6月份Bax表达水平急剧上升（7.313%-42.813%）;在8-10月份Bax蛋白的表达水平急剧下降（32.263%-23.00%）。结论：细胞凋亡引起的蒙古锦羊毛的生长和脱落可能与Bcl-2和Bax的表达有关,并且发重要的调控作用。Bax基因表达促进细胞凋亡。     

复方参芩对犬细小病毒致心肌组织Bcl-2和Bax mRNA的影响

为了探讨复方参芩对犬细小病毒致犬心肌组织Bcl-2和Bax基因表达的影响,将丹参、黄芩、甘草等中药配伍并制备成为复方参芩针剂,人工感染犬细小病毒建立模型;将犬分为空白对照组、模型组、黄芪多糖组、复方参芩组;给药7d后,接种病毒,观察各组犬临床症状,取心肌组织,电镜观察心脏组织超微结构变化,采用荧光实时定量PCR法检测Bcl-2和Bax mRNA表达.结果表明,模型组犬死亡率高,心肌组织结构损伤严重,与空白对照组比较,心肌组织细胞Bcl-2 mRNA表达下调(P＜0.05),Bax mRNA表达增加(P＜0.01).复方参芩组犬存活率较高,心肌组织损伤轻,与模型组相比,心肌组织细胞Bax mRNA表达下调(P＜0.01),Bcl-2 mRNA表达上调(P＜0.01).通过本试验证明复方参芩可通过上调犬心肌组织细胞Bcl-2 mRNA表达,下调Bax mRNA的表达,抑制细小病毒引起的心肌细胞凋亡,保护犬心肌组织免受细小病毒损害.     

玉米赤霉烯酮中毒大鼠卵巢组织Bax和Bcl-2的表达

10周龄SD大鼠单剂量腹腔注射5mg／kg玉米赤霉烯酮玉米油溶液,分别于3、6、12、24、48h时剖杀取卵巢组织,检测不同时间卵巢组织Bax和Bcl-2的表达。结果显示,病理组织学观察发现卵巢组织出现不同程度损伤,卵泡颗粒细胞发生凋亡。免疫组化SP法试验组与对照组卵巢组织中均有Bax和Bcl-2的表达,并且随着时间的推进呈现动态变化。Bax在3、6、12h时表达量上调,表达量与对照组比较差异显著（P〈0．05）,24、48h时表达量下降,与对照组比较差异不显著（P〉O．05）。3～48h卵巢组织中Bcl-2表达量与对照组比较差异不显著（P〉0．05）。结果表明,大鼠玉米赤霉烯酮中毒可引起卵巢组织的病变及颗粒细胞凋亡,且Bax在玉米赤霉烯酮中毒大鼠卵巢颗粒细胞凋亡中起着重要作用,Bcl-2的作用不明显。