鸡蛋清溶菌酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达研究

研究从鸡输卵管组织提取细胞总RNA,根据Gene Bank中已发表的鸡溶菌酶基因序列,设计合成特异引物,合成cDNA序列,并以此为模版,PCR扩增鸡溶菌酶基因。用Xho I和Xba I对LYZ基因的PCR产物和真核表达载体pPIC6αA进行双酶切后转化到大肠杆菌(DH5α)中,构建成为真核重组表达载体pPIC6αA-LYZ。该载体经PstXI酶切线性化后,以电击转化方法导入到毕赤酵母宿主菌X-33中,经Blasticidin抗性筛选,得到鸡溶菌酶基因重组毕赤酵母菌株;甲醇96h(发酵罐诱导100h)诱导表达,经Wetern-blot检测分析,基因重组工程菌株摇瓶诱导表达溶菌酶的表达量约为4mg/l,发酵罐诱导表达的表达量约为10mg/l。     

重组人溶菌酶在毕赤酵母中的诱导表达及活性研究

为了构建一种胞内表达人溶菌酶(hLZ)的毕赤酵母工程菌,此研究以人工合成人溶菌酶基因序列,通过酶切位点插入毕赤酵母表达载体pPICZαA,获得pPICZαA-hLZ。线性化该表达载体,电转化并筛选阳性克隆,甲醇诱导重组蛋白表达后,进行纯化和活性分析。结果表明,通过亲和层析树脂(Ni-IDA)从培养液上清纯化目标蛋白,SDS-PAGE表明目标蛋白为14.7 kDa左右,Western-blot结果表明目标蛋白即为带有6个His标签的重组人溶菌酶,BCA法测定表明纯化后的蛋白浓度为0.121 mg/mL;溶壁微球菌抑菌试验表明该重组人溶菌酶具有部分生物活性。此研究成功地获得了胞内表达且具有部分生物活性的人溶菌酶毕赤酵母工程菌,为重组人溶菌酶作为饲料添加剂开发应用奠定了一定的基础。     

牦牛胃溶菌酶在解脂耶氏酵母中的重组表达及性质研究

研究牦牛胃溶菌酶基因(yak stomach lysozyme gene, ys LYZ)在解脂耶氏酵母中的异源表达、分离纯化及抗菌机制。通过人工合成构建p INA1297-ys LYZ,转化至宿主解脂耶氏酵母(Polh)菌株,分别培养24、48、72 h及96 h。发酵上清液经纯化后得到重组牦牛胃溶菌酶(recombinant yakstomach lysozyme, rys LYZ)。通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate poly-acrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)检测rys LYZ的分子量,用检测试剂盒测定其比活,通过电镜观测其对金黄色葡萄球菌的作用,并对rys LYZ在模拟猪胃液中的降解情况进行了观察。结果表明:rys LYZ的分子量为15 k Da,其表达量在培养72 h时最高,纯化后比活为1 855.42 U/mg。电镜下观察到rys LYZ作用金黄色葡萄球菌后,菌体出现孔洞,最终崩解。在模拟猪胃液中,rys LYZ可在胃蛋白酶作用4 h后仍保持部分完整,表明其具有优良的抗胃蛋白酶...     

牛乳溶菌酶在毕赤酵母中的分泌表达及活性分析

为真核表达牛乳溶菌酶,本研究在通过酵母偏爱密码子改造并人工合成LYZ1基因的基础上,将LYZ1基因经克隆构建了高效表达具有生物活性牛乳溶菌酶的分泌型表达载体pPICZα-A-LYZ1,将其经SacⅠ酶切线性化后电转化毕赤酵母菌株GS115中,通过Zeocin筛选和PCR鉴定后的阳性重组菌用甲醇诱导60h后,进行SDS-PAGE和western blot鉴定,用溶壁微球菌对其进行活性检测,并对其进行体外抑菌效果检测分析。结果表明:分泌表达的重组目的蛋白约16ku,而且抗血清具有良好的反应原性。活性检测表明,培养液中重组溶菌酶活性达到2842u/mL。体外抑菌试验结果表明,重组牛乳溶菌酶对标准葡萄球菌及大肠杆菌菌株具有较好的抗菌作用,而对无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌作用较弱。     

溶菌酶对仔猪腹泻的预防作用

本文通过用溶菌酶饲喂猪来研究其应用价值。试验1通过用溶菌酶饲喂怀孕母猪来研究预防仔猪腹泻及对仔猪增重的影响;试验2通过用溶菌酶饲喂仔猪来研究预防仔猪腹泻的效果,同时对饲喂溶菌酶怀孕母猪所产的仔猪和产后才开始饲喂溶菌酶的仔猪进行了效果对比。试验结果表明:饲喂溶菌酶可以降低仔猪的腹泻率,同时对仔猪的生长也有积极的意义。     

反刍动物胃溶菌酶的研究进展

反刍动物胃溶菌酶与其他溶菌酶相比,能在其他溶菌酶无活性或活性较低的胃中(含有胃蛋白酶和胃酸)保持较高的溶菌能力。作者从反刍动物胃溶菌酶的理化性质、酶活性影响因素、进化等方面综合介绍了反刍动物胃溶菌酶的部分特性,并对其应用前景作出展望。     

预防牦牛腹泻疾病的措施

养殖业已经成为农户走向小康道路的一种手段,在众多的养殖业中,牦牛的养殖可以说是最为有效的一种。然而,在养殖的过程中经常会出现一些问题,会造成很大的经济损失,其中以牦牛的腹泻最为常见。笔者介绍防治牦牛腹泻的一些方法,希望给广大的养殖户带来一定的启发。     

溶菌酶对仔猪腹泻预防作用的研究进展

溶菌酶具有类似抗生素药物的抗菌、消炎、抗病毒等作用。本文综述了溶菌酶在预防仔猪腹泻方面的应用进展,针对其作为饲料添加剂对仔猪腹泻的预防进行探索研究,为生产中认识和使用溶菌酶提供参考。     

毕赤酵母工程菌株表达人溶菌酶-鲎素融合蛋白发酵条件的优化

能分泌表达重组人溶茵酶-鲎素融合蛋白的巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)工程菌(X33/pPICZαA-human lysozyme-Tachyplesin Ⅰ构建的).除了基因本身内在特性外,表达条件对外源基因的表达量也有着极显著的影响.本文在摇瓶水平上通过发酵液起始pH、甲醇诱导浓度、诱导时间这3个因...     

牦牛腹泻的病因及综合防控措施

牦牛腹泻是牦牛养殖过程中的一种常见的疾病,其发生后导致牦牛不断腹泻、脱水和消瘦,直至死亡,给牦牛养殖场带来较为严重的经济损失。本文通过对牦牛腹泻的综合分析和归纳总结,旨在为牦牛养殖提供一些防控参考。1牦牛腹泻的病因1.1饲料质量不好牧草的质量是引起牦牛腹泻的一个因素,如果牦牛采食发霉和变质的牧草或被各种污染物污染的不良牧草时,就会引起消化不良性腹泻。在给牦牛进行补饲时,如果饲养方法不当、饲喂器具污染等因素也会引发牦牛腹泻。     

预防牦牛腹泻疾病的措施

牦牛通常生活在高寒地区,牦牛养殖具有良好的经济收益。但是需要注意的是,在养殖过程中,牦牛很容易出现一些腹泻疾病,对牦牛的身体健康产生着重要的影响,严重的还会直接导致牦牛出现死亡。因此,养殖户需要对这些常见疾病展开深入的研究,了解腹泻疾病的成因以及预防措施,这样才能避免出现不必要的经济损失。基于此,本文阐述了预防牦牛腹泻疾病的有效措施,以供参考。     

牦牛腹泻的病因及综合防控

随着经济等方面的不断发展,我国各个地区养殖行业得以快速进步,而在牦牛日常养殖过程中,因为经常出现的腹泻问题,一方面威胁牦牛身体健康的基础上,另一方面自然也极大构成地区养殖户的经济损失.鉴于该种现状下,做好牦牛腹泻综合防控工作极为关键.     

牦牛病毒性腹泻/粘膜病的防制研究

20世纪80年代以来，我国牦牛群中陆续发现牛病毒性腹泻／粘膜病(BVD／MD)，血清阳性率在30％～42．4％之间，病死率在30％左右，本研究先后从四川、西藏等地牦牛中分离出病毒，并对其进行各种生物学特征鉴定后，表明该病毒与标准毒属同一种，所不同的是四川牦牛病毒株属非致细胞病变型，即属NCP型。但回归本动物能复制出典型病例。目前尚无国产牛粘膜病疫苗用于生产。本研究依据猪瘟病毒与牛病毒性腹泻／粘膜病病毒具有交叉免疫性的原理，用猪瘟弱毒苗对牦牛病毒性腹泻／粘膜病进行预防，试验证明用猪瘟弱毒苗可以预防牛病毒性腹泻／粘膜病，且安全可靠，具有实用价值。     

牦牛犊牛大肠杆菌性腹泻的诊治

经济的快速发展给人们的生活带来了极大的变化,人们更加喜欢餐食牛肉,社会对于牛肉的需求也越来越大。而作为牦牛主要生产区的青海地区,也日益受到人们的关注,能否提供健康达标的牦牛,直接决定了青海地区的经济效益。在牦牛的养殖过程中,比较常见的一种疾病是大肠杆菌性腹泻,这种病对于牦牛的生长期十分不利,严重的会导致大规模死亡。而本文将对牦牛患有大肠杆菌性腹泻的发病原因以及主要症状进行详细的分析和研究,并提出相关的预防和解决措施。     

牦牛病毒性腹泻临床表现及防控措施研究

牦牛病毒性腹泻为一种常见的牛类疾病,对牦牛的健康与生长发育构成严重威胁。鉴于此,详细阐述牦牛病毒性腹泻的流行特点、临床表现、病理学变化及诊断方法,具体分析牦牛病毒性腹泻的成因,提出科学治疗和有效预防相结合的防控措施,为广大养殖场（户）提供参考,降低牦牛病毒性腹泻的发病率,促进牦牛健康成长,从而满足当前市场对高品质肉类的需求。     

抗腹泻酵母在单胃动物肠道残留分析

在单胃动物中,抗腹泻酵母的主要作用在于调节胃肠道内微生物生长,吸附病原菌,预防和治疗仔猪腹泻,缓解动物胀气,解决便秘的功能.但其在动物体内是否长期定植影响动物机体自身的菌落平衡,是否残留在体内,还无确切报告.试验旨在探讨添加抗腹泻酵母对胃肠道微生态环境和断奶仔猪腹泻影响.试验选用遗传背景相同且体质量相近的健康仔猪,在饲料中添加抗腹泻酵母饲喂1周后取仔猪胃肠样品,检测抗腹泻酵母微生物菌落总数.停喂抗腹泻酵母2和4周后检测抗腹泻酵母活菌数.结果表明:抗腹泻酵母在饲喂1周后质量浓度达到峰值,其中空肠达到6 950万CFU/g,且随着时间的延长而逐步减少,在停喂2和4周后分别下降为0.85万和3 150 CFU/g.试验结果表明抗腹泻酵母,停喂后会在一段时间内从峰值逐渐减少,不会改变体内微生态环境,对仔猪胃肠道菌落有保护作用.     

牦牛犊牛腹泻的原因及防治

养牛业作为畜牧业中发展较好的产业之一。与此同时,国家也将发展的重点偏向养牛业,不断加大对其关注力度,为牛提供较好的生长环境,在养殖过程中加强对疾病的预防。就目前发展情况而言,养牛业虽已步入正轨,但其在疾病预防工作处理方面做的不够细致,在一定程度上,对经济效益造成不良影响。因此本文以牦牛犊牛腹泻为例,对腹泻原因进行简要分析,并提出有效的预防以及解决措施,以此推动养牛业的更好发展。     

初生青海环湖型牦牛胃的形态学观测

对初生环湖型牦牛犊胃进行了观测。结果 ,胃总重 1 4 8 4 1 g± 2 7 96g ,占体重的 1 2 7%。胃总容积 1 1 4 1 8mL± 2 0 0 88mL ;皱胃特别发达 ,重量和体积在四个胃中属最大 ,其次为瘤胃 ;网胃的重量小于瓣胃 ,而容积略大于瓣胃 ;前胃黏膜呈白色 ,乳头细小不甚明显 ;网胃沟发达 ,瓣胃瓣叶分五级 ,1 0 0余片 ;皱胃黏膜呈淡黄色或淡红色 ,分区不明显 ,有 1 3～ 1 8片黏膜褶     

牦牛犊牛大肠杆菌性腹泻的诊治探讨

新生牦牛犊牛容易产生大肠杆菌性腹泻疾病,其会影响牦牛犊牛的食欲,促使其精神不振.在比较严重的情况下会导致牦牛犊牛死亡.所以,提出有效的牦牛犊牛大肠杆菌性腹泻诊治方式具有重要的意义.因此,本文将主要从牦牛犊牛大肠杆菌性腹泻基本概念、牦牛犊牛大肠杆菌性腹泻诊治的方式这两个方面进行阐述,为减少牦牛犊牛受到大肠杆菌性腹泻疾病的影响而提供合理的参考意见.