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副结核分枝杆菌DNA探针的制备与应用 总被引:1,自引:0,他引:1
以溶菌酶、SDS、高氯酸钠等处理提取副结核分析杆菌C2株染色体DNA,经限制性内切酶Pst I消化后,以质粒pBluescript SK为载体,通过T4DNA连接酶连接,转入E。coli DH5a受体菌中,构建了副结核菌C2株的DNA基因文库。应用反向杂交试验,从基因文库中筛选出4个重组克隆:PTP12、PTP19、PTP38。对这4个重组克隆进行酶切、电泳分析,结果表明4个插入片段长度分别为:4 相似文献
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牛结核分枝杆菌特异性核酸探针的克隆与分析 总被引:7,自引:0,他引:7
牛结核分枝杆菌是引占结核病的致病源,其染色体DNA中含有插入序列IS1081,属于结核杆菌类特异性基因片段,在牛结核杆菌染色体中含有6个拷贝。目前国外普遍有杉该片段作为探针对牛结核病进行鉴定和诊断。本试验采用牛结核分枝杆菌染色体D避的特民插入片段即IS1081为模闰于IS1081中438-459和664-685碱基 的两个片段为引物。利用PCR技术扩增出一段248bp的特异性片段,将其克隆进pU 相似文献
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为探索MAP0862蛋白在分枝杆菌感染鉴别诊断中的作用,研究构建了MAP0862的原核表达map0862-pET32a(+)质粒,并对其进行了诱导表达。以副结核分枝杆菌P10基因组DNA为模板,经PCR方法扩增副结核分枝杆菌map0862基因片段,将其克隆到原核表达载体pET32a(+)中。将重组子转化到大肠杆菌BL21(DE3),在E.coli中诱导表达带组氨酸标签的map0862-pET32a(+)的融合蛋白。结果显示,经IPTG诱导表达出约55 kD的融合蛋白,用副结核阳性血清进行Western blot检测,证明MAP0862重组蛋白具有良好的免疫原性。 相似文献
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禽分枝杆菌副结核亚种基因分型研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis,MAP)是引起副结核病(Paratuberculosis,Johne’s disease,JD)的病原。该病早在1826年就有记载,1895年第一次被报道。目前仍广泛流行于世界各国,其中以奶牛业和肉牛业发达的国家和地区受害最重。仅在美国每年的损失就达2.0~2.5亿美元。最新研究表明,在原生动物、负鼠、野兔、野生猫、野猪、赤鹿、野牛等动物中也分离到该病原菌, 相似文献
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结核分枝杆菌复合群(MTBC)、包括结核分枝杆菌(MTB)、牛分枝杆菌(MB)、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌等;非结核分枝杆菌(NTM)中禽分枝杆菌(MA)是自然界常见的动物致病菌,包含4个亚种,分别为禽分枝杆菌禽亚种(MAA)、禽分枝杆菌人/猪亚种(MAH)、禽分枝杆菌副结核亚种/副结核分枝杆菌(MAP)和禽分枝杆菌森林土壤亚种(MAS)。为建立MTBC、MAP和MAA的多重荧光定量PCR检测方法,本研究基于MTBC、MAP和MAA的特异性基因devR、F57和IS901分别设计引物及探针,通过优化各反应条件,建立了一种可同时检测3种分枝杆菌的多重Taq Man荧光定量PCR方法。特异性试验结果显示,该方法对MTB、MB、MAP、MAA和MAS检测为阳性,对其他畜禽病原菌,包括MAH、13种NTM和7种非分枝杆菌检测结果均为阴性,特异性较强。敏感性试验结果显示,该方法对MB、MAP和MAA重组质粒标准品的检测限均为1.0拷贝/μL,敏感性较高;重复性试验结果显示,批内与批间重复性试验变异系数均小于2.5%,重复性较好。利用该方法检测体外模拟污染(MB、MAP和MAA菌液浓度分别为1.0... 相似文献
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<正>禽分枝杆菌副结核亚种(Mycobacterium avium subsp. Paratuberculosis,MAP)是副结核病(Paratuberculosis)的病原,该病是以慢性增生性、顽固性肠炎和进行性消瘦为特征的多种动物共患传染病,仅在美国该病每年给养牛 相似文献