副结核分枝杆菌DNA探针的制备与应用

以溶菌酶、ＳＤＳ、高氯酸钠等处理提取副结核分析杆菌Ｃ２株染色体ＤＮＡ，经限制性内切酶Ｐｓｔ Ｉ消化后，以质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ为载体，通过Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接，转入Ｅ。ｃｏｌｉ ＤＨ５ａ受体菌中，构建了副结核菌Ｃ２株的ＤＮＡ基因文库。应用反向杂交试验，从基因文库中筛选出４个重组克隆：ＰＴＰ１２、ＰＴＰ１９、ＰＴＰ３８。对这４个重组克隆进行酶切、电泳分析，结果表明４个插入片段长度分别为：４     

牛结核分枝杆菌特异性核酸探针的克隆与分析

牛结核分枝杆菌是引占结核病的致病源，其染色体ＤＮＡ中含有插入序列ＩＳ１０８１，属于结核杆菌类特异性基因片段，在牛结核杆菌染色体中含有６个拷贝。目前国外普遍有杉该片段作为探针对牛结核病进行鉴定和诊断。本试验采用牛结核分枝杆菌染色体Ｄ避的特民插入片段即ＩＳ１０８１为模闰于ＩＳ１０８１中４３８－４５９和６６４－６８５碱基 的两个片段为引物。利用ＰＣＲ技术扩增出一段２４８ｂｐ的特异性片段，将其克隆进ｐＵ     

副结核分枝杆菌map0862基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

为探索MAP0862蛋白在分枝杆菌感染鉴别诊断中的作用,研究构建了MAP0862的原核表达map0862-pET32a(+)质粒,并对其进行了诱导表达。以副结核分枝杆菌P10基因组DNA为模板,经PCR方法扩增副结核分枝杆菌map0862基因片段,将其克隆到原核表达载体pET32a(+)中。将重组子转化到大肠杆菌BL21(DE3),在E.coli中诱导表达带组氨酸标签的map0862-pET32a(+)的融合蛋白。结果显示,经IPTG诱导表达出约55 kD的融合蛋白,用副结核阳性血清进行Western blot检测,证明MAP0862重组蛋白具有良好的免疫原性。     

禽分枝杆菌副结核亚种基因分型研究进展

副结核分枝杆菌（Mycobacterium avium subsp．paratuberculosis，MAP）是引起副结核病（Paratuberculosis，Johne’s disease，JD）的病原。该病早在1826年就有记载，1895年第一次被报道。目前仍广泛流行于世界各国，其中以奶牛业和肉牛业发达的国家和地区受害最重。仅在美国每年的损失就达2．0～2．5亿美元。最新研究表明，在原生动物、负鼠、野兔、野生猫、野猪、赤鹿、野牛等动物中也分离到该病原菌，     

应用PCR-限制性内切酶技术快速检测副结核分枝杆菌

根据副结核分枝杆菌的IS900序列,设计相应的引物,建立检测副结核分枝杆菌的PCR技术。利用该方法,可从副结核分枝杆菌中扩增出PCR产物,扩增产物具有高度特异性,长度为388bp,经限制性内切酶Saμ3AI酶切,证实该扩增产物为副结核分枝杆菌的片段。表明此项技术具有快速、敏感和特异性强等特点,通过PCR扩增IS900基因(副结核分枝杆菌独有的基因),可快速的应用于诊断反刍动物的副结核病和乳及乳制品中副结核分枝杆菌的鉴定。     

结核分枝杆菌复合群、副结核分枝杆菌和禽分枝杆菌禽亚种多重TaqMan荧光定量PCR方法的建立及初步应用

结核分枝杆菌复合群(MTBC)、包括结核分枝杆菌(MTB)、牛分枝杆菌(MB)、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌等;非结核分枝杆菌(NTM)中禽分枝杆菌(MA)是自然界常见的动物致病菌,包含4个亚种,分别为禽分枝杆菌禽亚种(MAA)、禽分枝杆菌人/猪亚种(MAH)、禽分枝杆菌副结核亚种/副结核分枝杆菌(MAP)和禽分枝杆菌森林土壤亚种(MAS)。为建立MTBC、MAP和MAA的多重荧光定量PCR检测方法,本研究基于MTBC、MAP和MAA的特异性基因devR、F57和IS901分别设计引物及探针,通过优化各反应条件,建立了一种可同时检测3种分枝杆菌的多重Taq Man荧光定量PCR方法。特异性试验结果显示,该方法对MTB、MB、MAP、MAA和MAS检测为阳性,对其他畜禽病原菌,包括MAH、13种NTM和7种非分枝杆菌检测结果均为阴性,特异性较强。敏感性试验结果显示,该方法对MB、MAP和MAA重组质粒标准品的检测限均为1.0拷贝/μL,敏感性较高;重复性试验结果显示,批内与批间重复性试验变异系数均小于2.5%,重复性较好。利用该方法检测体外模拟污染(MB、MAP和MAA菌液浓度分别为1.0...     

禽分枝杆菌副结核亚种检测方法研究进展

<正>禽分枝杆菌副结核亚种(Mycobacterium avium subsp. Paratuberculosis,MAP)是副结核病(Paratuberculosis)的病原,该病是以慢性增生性、顽固性肠炎和进行性消瘦为特征的多种动物共患传染病,仅在美国该病每年给养牛