蛹虫草无性型蛹草拟青霉的电泳核型分析

采用等高锁状均质电场(CHEF)凝胶电泳技术,对蛹虫草无性型-蛹草拟青霉(Paecilomyces militaris Liang)进行电泳并分析其核型.以温汉逊氏酵母(Hansenula wingei)及粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)菌株的染色体DNA大小作为分子量标记,3株蛹草拟青霉基因组中各包含7条染色体DNA,其大小都在2 Mb至5.7 Mb之间.实验结果表明各菌株间核型不完全相同,存在一定的差异,呈现多态性.     

蛹虫草中虫草素测定方法的比较

采用紫外分光光度法和高效液相色谱法测定蛹虫草子实体中虫草素的含量。结果表明:这两种方法在测定蛹虫草子实体中虫草素的平均回收率分别为100.1%和100.2%,RSD分别为2.3%和1.2%。这两种方法均可作为蛹虫草子实体中虫草素含量的测定方法,但高效液相色谱法专属性强,灵敏度高,测定结果更为准确。     

人工栽培蛹虫草虫草素含量HPLC检测方法研究

应用高效液相色谱法检测蛹虫草子实体及其固体培养基中的虫草素含量,优化了样品前处理条件,色谱柱为MP-C18 (4.6 mm ×150 mm,5 μm),流动相为V(甲醇):V(水)=15:85,流速1 ml/min,柱温25 ℃,样品回收率范围为95.1%～104.2%;同时对比使用3种不同的培养基(大米、小麦、蚕蛹粉)栽培的蛹虫草子实体中虫草素的含量,结果表明生长在大米培养基上的蛹虫草子实体中虫草素含量最高.     

固体培养条件对蛹虫草产子实体和虫草菌素的影响

研究了营养液不同pH值和米粒大小两个培养条件对蛹虫草固体发酵产子实体和虫草菌素的影响.当营养液pH值为5.5～6.0时子实体的产量最大,营养液pH值为6.5时,虫草菌素总的产量最大,达48.44 g/瓶.较大的米粒有利于蛹虫草子实体的生长,较小的米粒有利于蛹虫草虫草菌素的积累.子实体的产量随着米粒的变小而减少;子实体中虫草菌素的含量随着米粒的变小而增加.当采用整米作为培养基基质时,蛹虫草子实体产量最大,达1.67 g/瓶,当采用40目米 10目米(1∶1,M/M)作为培养基基质时,蛹虫草子实体中虫草菌素含量最大,达1.87%,虫草菌素总的产量也最大,达52.46 mg/瓶.     

蛹虫草中虫草素提取工艺的优化

该实验利用响应面方法优化蛹虫草中虫草素的提取工艺,选择料液比、功率和时间为自变量,虫草素的提取率为响应值,利用Box-Benhnken中心组合试验和响应面分析法,研究各自变量交互作用及其对虫草素提取率的影响,模拟得到二次多项式回归方程的预测模型,并确定虫草素最佳提取工艺∶料液比1.00∶26.84,功率329.57W,时间40.25min,在此条件下,虫草素的提取率可达4.58000%。     

高效液相色谱法检测蛹虫草胶囊中腺苷含量的方法研究

建立了蛹虫草胶囊中腺苷含量检测的色谱优化方法。在260 nm的检测波长下,采用外标法对腺苷含量进行定量分析,在0.4～60μg/mL线性范围内拟合线性回归方程:y=25.496 x+1.025,相关系数为0.999 7。方法的检测限为0.06μg/mL,定量限为0.14μg/mL。加标回收试验显示,回收率在96.9%～104.1%之间,RSD为3.43%。方法的精密度为1.02%。对试验结果进行统计分析,结果表明,260nm的检测波长能显著提高样品中腺苷含量测定值,结果更为准确、可靠。     

两相法提高轮枝拟青霉中虫草菌素含量的研究

以轮枝拟青霉(Paecilomyces verticillatus GZ)为材料,分别考察油酸和邻苯二甲酸二丁酯添加量以及添加时间对轮枝拟青霉产虫草菌素的影响。结果表明,接种GZ的同时添加6%(V/V)油酸,虫草菌素产量达到71.33(±2.61)mg/L,比对照组提高44%;接种GZ的同时添加6%(V/V)邻苯二甲酸二丁酯,虫草菌素产量达到59.21(±2.50)mg/L,比对照组提高20%。此法为简化虫草菌素的下游提取工艺提供了依据。     

真菌激发子诱导虫草菌素高产的条件

借鉴真菌激发子诱导植物细胞悬浮培养中次生代谢产物富积的理论,方法,筛选出对蛹虫草有拮抗或互生关系的真菌菌株并制备激发子粗提物。经平板纸片法和液体培养法测试表明,多数菌株对蛹虫草菌生长有较好的影响,建立和测定了蛹虫草生长曲线及真菌激发子处理的有效时间。     

发酵成分对虫草菌素含量的影响

Cordycepin has a variety of biological activity.It can inhibit synthesis of DNA and RNA in cancercells, can enhance cell differentiation, restructurecell cytoskeleton, inhibite protein kinase activityand so on. It even has antitumor activity on blad-der, kidney as well as lung, can inhibit infection     

蛹虫草小麦培养基中虫草素提取工艺研究

通过对比提取溶剂、料液比、温度、pH值及时间对提取蛹虫草小麦培养基中虫草素的影响,以确定虫草素提取最佳工艺参数.结果表明:最佳提取参数为水提取、pH值5,料液比1:50、温度70℃、时间3h.该方法从蛹虫草小麦培养基中提取虫草素,提取率可达94.87％.     

来源于一种蛹拟青霉的抗肿瘤活性组分的分离纯化

在实验室大规模主要虫生真菌药物模型筛选的基础上,对安徽农业大学虫生真菌实验室保存的菌株蛹拟青霉[Paecilomyces militaris（Kob．）Brown ＆ Smith ex Liang]RCEF0718的抗肿瘤活性进行了进一步的研究。通过硅胶柱及凝胶柱的多步分离纯化,得到的化合物对多种肿瘤细胞具备良好的抑制活性。     

蛹拟青霉发酵液中黄酮类成分的提取分离及结构鉴定

[目的]提取分离蛹拟青霉发酵液中黄酮类成分并进行结构鉴定。[方法]对乙酸乙酯萃取后的酯相组分进行分离纯化,利用质谱（MS）核磁共振（NMR）技术进行结构鉴定。[结果]分离出了蛹拟青霉中的组分Z2-1、Z2-2,并鉴定两组分分别为4′-羟基异黄酮-7-O-β-4″甲氧基葡萄糖甙和5,4′-二羟基异黄酮-7-O-β-4″甲氧基葡萄糖甙。[结论]该研究可为蛹拟青霉中有效化学成分的利用提供依据。     

加速溶剂萃取法提取蛹虫草主要成分工艺优化分析

【目的】蛹虫草(Cordyceps militaris)成分内含有大量的核苷类、多糖、虫草酸、甾醇、糖醇、酶和色素等多种活性物质,其中对虫草素(cordycepin)、腺苷(adenosine)、多糖等研究广泛。【方法】目前提取虫草素、腺苷常用超声法、回流法、渗漉提取法等。采取加速溶剂萃取法,从蛹虫草子实体中获取虫草素、腺苷活性物质,并进行四因素(温度、静态萃取时间、乙醇浓度和循环次数)三水平正交试验设计,明确其最优组合条件。【结果】通过试验得到了加速萃取法提取虫草素、腺苷的最佳组合条件。【结论】加速萃取法提取虫草素的最适条件是:温度70℃,时间5 min,乙醇浓度20%,循环次数2次;提取腺苷的最适条件是:温度100℃,时间10 min,乙醇含量0,循环次数2次。     

以虫草素和腺苷含量为指标优化蛹虫草人工栽培

为提高人工栽培蛹虫草中主要活性成分的含量,以虫草素和腺苷含量为检测指标进行蛹虫草优化栽培研究,在采用Cm-1菌株、以20%豆粕为氮源、水料比为1.4的条件下,可获得子实体产量为每瓶42.2 g、子实体中虫草素含量为4.46 mg.g-1的栽培效果,虫草素含量超过了以蚕蛹为寄主的蛹虫草(2.83 mg.g-1),表明植物蛋白完全可以用作栽培蛹虫草的氮源,同时证实采收子实体后的培养基中仍含有大量虫草素,可作为提取虫草素的原料。     

基于反向分子对接的虫草素和三磷酸虫草素的生物活性

分别采用idTarget、Pharm Mapper在线反向分子对接软件预测虫草素和三磷酸虫草素的靶标蛋白(药效团匹配蛋白),用Ledock分子对接软件模拟虫草素、三磷酸虫草素与靶标蛋白的结合构象,用Lig Plus软件分析结合构象活性口袋内残基与配体的相互作用。反向分子对接结果表明:三磷酸虫草素与靶标蛋白的自由结合能比虫草素与靶标蛋白的自由结合能低。分子对接结果表明:与虫草素相比,三磷酸虫草素与靶标蛋白活性口袋内的氨基酸残基可形成更多的氢键,且三磷酸虫草素和靶标蛋白有较好的几何匹配,其自由结合能也较低,其结合构象更稳定。根据正向、反向分子对接结果,认为三磷酸虫草素是虫草素进入人体内发挥生物活性的主要物质。     

高效液相色谱法同时检测虫草制品中腺苷和虫草素含量的研究

对已有方法和规范中样品前处理方法和色谱条件进行了优化和对比研究,建立检测虫草制品中腺苷和虫草素含量的反相高效液相色谱方法。样品经水超声提取40 min,离心过滤后进行分析。采用C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以水-甲醇(85:15,V/V)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为260 nm。本方法检测限为0.2 μg/mL,定量限为1.0 μg/mL。以所建立的方法对虫草制品进行分析,样品加标回收率在94%~103%,相对标准偏差均小于3%。该检测方法简便、准确,并能同时测定腺苷和虫草素。     

淡紫拟青霉多糖提取工艺研究

[目的]研究淡紫拟青霉多糖的提取工艺,为进一步开发提供参考依据。[方法]首先通过液体发酵获得淡紫拟青霉菌丝,然后以水为提取剂,在不同的提取条件下提取多糖,并测定其含量。[结果]淡紫拟青霉多糖的最佳提取工艺为：浸提温度70℃、浸提料液比1：30、浸提3次,2h/次。[结论]该提取工艺操作简便、浸提时间短、提取效率高。