兔成纤维细胞的分离与体外培养

用Ⅰ型,Ⅳ型胶原酶消化分离兔皮肤细胞,Ⅰ型胶原酶消化皮肤块获得的细胞数显著高于Ⅳ型胶原酶。用组织块直接培养法,也可以得到皮肤的原代培养细胞,２．５ｇ／Ｌ胰酶消化胎儿组织,可获得足够原代增减２的细胞量。结合使用酶消化法和反复贴壁法,经２－３代后,可获得纯化的成纤维细胞。     

山羊成纤维细胞体外培养研究

分别采用组织块法与消化法对山羊耳成纤维细胞进行原代培养,比较两种方法的培养效果.结果表明,组织块法培养的细胞生长稳定,5～7d有细胞生长,15～18d长满单层;消化法培养的细胞,通过简化酶作用时间及用量的调控,可得到较为单一的成纤维细胞,且经过4～7d生长后能形成单层.同时对细胞培养过程中常遇到的污染问题及解决方法进行了探讨,为动物组织培养研究提供了实验依据.     

兔成纤维细胞的分离与体外培养

用Ⅰ型、Ⅳ型胶原酶消化分离兔皮肤细胞,Ⅰ型胶原酶消化皮肤块获得的细胞数显著高于Ⅳ型胶原酶。用组织块直接培养法,也可以得到皮肤的原代培养细胞。２．５ｇ／Ｌ胰酶消化胎儿组织,可获得足够原代培养的细胞量。结合使用酶消化法和反复贴壁法,经２～３代后,可获得纯化的成纤维细胞。分离纯化的胎儿和皮肤成纤维细胞的生长曲线都正常且相似。胎儿和皮肤成纤维细胞可分别传至第１３代与第１１代,传代后染色体数目不变。     

血清饥饿对兔成纤维细胞生长的影响

用含体积分数０．５％血清的ＤＭＥＭ直接饥饿胎儿及皮肤成纤维细胞，细胞数先是略有增长，然后逐渐下降。胎儿和皮肤成纤维细胞在血清梯度饥饿期间，更换含体积分数为４％，２％和１％血清的ＤＭＥＭ，细胞仍缓慢增长；更换含体积分数为０．５％血清的培养液后，细胞数逐渐降低。血清饥饿成纤维细胞后，细胞直径明显小于对数生长期的细胞（２０，１９ＶＳ３６μｍ，Ｐ〈０．０１）。血清饥饿的成纤维细胞，ＰＣＮＡ单抗染色阴性，证     

血清饥饿对兔成纤维细胞生长的影响

用含体积分数０．５％ 血清的ＤＭ ＥＭ 直接饥饿胎儿及皮肤成纤维细胞,细胞数先是略有增长,然后逐渐下降。胎儿和皮肤成纤维细胞在血清梯度饥饿期间,更换含体积分数为４％ ,２％ 和１％ 血清的ＤＭＥＭ,细胞仍缓慢增长;更换含体积分数为０．５％ 血清的培养液后,细胞数逐渐降低。血清饥饿成纤维细胞后,细胞直径明显小于对数生长期的细胞（２０,１９ＶＳ３６ μｍ ,Ｐ＜ ０．０１）。血清饥饿的成纤维细胞,ＰＣＮＡ 单抗染色阴性,证明离开了细胞周期,进入Ｇ０ 期,该期的细胞仍保持着活力     

梅花鹿耳成纤维细胞体外培养及转染条件优化

为开展目标蛋白质在梅花鹿耳成纤维细胞的功能研究提供理论和技术依据,培养梅花鹿耳成纤维细胞,优化脂质体转染梅花鹿耳成纤维细胞的条件,以获得最优质粒转染参数。采用组织块贴壁法和差速贴壁法分离梅花鹿耳成纤维细胞,观察细胞基本形态特征变化,免疫荧光法鉴定波形蛋白（Vimentin）的表达;以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因为标记基因,利用LipofectamineTM 3000介导外源DNA转染梅花鹿耳成纤维细胞,探讨质粒DNA与脂质体比例（1.0∶1.0,1.0∶1.5,1.0∶2.0,1.0∶2.5,1.0∶3.0）、质粒用量（0.5,1.0,1.5,2.0,2.5μg）、细胞传代次数（第2～6代）、细胞初始接种密度（50%,60%,70%,80%,90%）、转染效果观测时间（12,24,36,48,60 h）对转染效率的影响。结果表明：组织块贴壁法培养的梅花鹿耳成纤维细胞在倒置荧光显微镜下可见长梭形细胞生长,细胞免疫荧光检测波形蛋白（Vimentin）的表达结果为阳性;筛选的最佳转染条件：当质粒DNA与脂质体比例为1.0∶2.0,质粒DNA用量为1.5μg,细胞传代次数为第3代,细胞初...     

安庆六白猪和梅山猪成纤维细胞体外培养与生物学特性

为探索借助细胞培养技术开展地方良种猪遗传资源保护,以30日龄安庆六白猪耳缘皮肤组织和妊娠40 d左右梅山猪胎儿皮肤组织为材料,采取组织块接种培养法及胰蛋白酶消化法分离培养成纤维细胞,并对所获得的细胞系的体外培养生物学特性进行检测,包括细胞形态学观察和生长曲线绘制.结果表明:获得的安庆六白猪和梅山猪细胞系符合成纤维细胞的...     

鸭胚成纤维细胞培养方法的初步建立

在鸭胚成纤维细胞（DEF）的制备及单层维持过程中，通过对不同消化方式，营养液的不同PH值，不同血清浓度对细胞生长及维持的影响，摸索出一种比较经济实用的培养方法：细胞增殖时，最低血清浓度在5％左右，PH6．8－7．2时，生长状态较佳；维持细胞时，血清浓度在1－2％，PH值在7．4－7．6时较好，添加L－谷氨酰胺后，细胞的贴壁性增强。     

牦牛成纤维细胞的体外培养研究

采用组织块培养法,分别以DMEM(高糖)和DMEM/F12两种合成培养基为基础液,添加15mL·L-1胎牛血清(FBS)为细胞生长液对牦牛耳组织进行原代培养.同时,比较不同冷冻程序对细胞冷冻的影响,探讨牦牛体细胞在体外环境下的生长参数及染色体变化.结果表明,组织块在第6天开始有细胞游离,14天长至单层,两种基础培养基对细胞生长的影响差异不显著(P＞0.05).细胞在-20℃短时间(不超过1h)冷冻效果较好,但平衡时间过长对细胞解冻后生长影响差异极显著(P＜0.01).染色体分析显示,牦牛成纤维细胞在体外条件下生长,不同传代次数(3代和12代)细胞染色体核型稳定,在所得的中期分裂相细胞中,二倍体细胞都在96%以上.可用于体细胞核移植操作和其他研究.     

猪皮肤成纤维细胞 PERV 体外和体内感染性分析

目的研究分析猪皮肤成纤维细胞猪内源性反转录病毒(PERV)的体外和体内感性.方法运用组织块培养法建立猪皮肤成纤维细胞系,使得该细胞系与人胚胎肝细胞混合共同体外培养,一段时间后将猪皮肤成纤维细胞系移植到具有免疫缺陷疾病的小鼠体内,观察 PERV 对人胚胎肝细胞和对小鼠的感染情况.结果猪皮肤成纤维细胞系在与人胚胎肝细胞共同培养的过程中使其感染 PERV;具有免疫缺陷的小鼠体内的猪皮肤成纤维细胞与小鼠体内的正常细胞发生了微嵌合,并且 PERV 也感染了移植小鼠的多种脏器和组织.结论猪皮肤成纤维细胞中的 PERV 具有体外和体内感染性,但能否继续在体内复制、转录等过程仍尚待进一步研究.该结果预示在猪异种器官移植过程中需要注意 PERV,以免发生感染     

猪肺炎支原体套式PCR检测方法的建立及应用

根据GenBank中登录的猪肺炎支原体P36(L-乳酸脱氢酶)全基因序列,设计合成了2对引物,建立套式PCR方法。运用该方法对猪肺炎支原体不同菌株培养物进行了扩增,并对经肺内免疫猪支原体肺炎活疫苗后支气管肺泡灌洗液进行了检测。结果表明,不同菌种均能扩增出427 bp的目的条带,而其他病原菌未出现特异性扩增条带。建立的套式PCR方法检测猪肺炎支原体的最低检测限度为10个CCU(颜色变化单位)。支气管肺泡灌洗液检测结果表明,经肺内免疫的猪支气管肺泡灌洗液扩增结果均为阳性。     

广西巴马香猪耳皮成纤维细胞的分离与培养

试验主要对广西巴马香猪耳皮成纤维细胞的分离和培养进行了研究.利用组织块法能够成功分离培养广西巴马香猪耳皮成纤维细胞,其大小范围在1～3 mm3,去除表皮有利于组织块贴壁和细胞的游出;而采用0.25%胰蛋白酶消化液4℃冷处理过夜,不仅有利于去表皮操作,减少取材处理时间,而且操作时间自由度大.在酶消化法中采用胰蛋白酶消化30 min,胶原酶继续消化30～40 min,能够成功分离培养广西巴马香猪耳皮成纤维细胞.广西巴马香猪皮肤成纤维细胞要经历滞留期、对数期、平台期,分别为0～2 d、2～8 d、8～12 d.     

猪成纤维细胞的简易分离培养

比较了不同来源、不同状态组织和不同分离方法对猪成纤维细胞的影响,结果表明,离体组织长时间乙醇预处理和长时间储运会降低细胞活力,使生长速度减慢;初始原代细胞种类比较多,生长不均匀,只有传代培养3代以上,才能得到比较纯的成纤维细胞。     

细胞和病毒活疫苗中支原体污染的PCR检测方法建立与应用

[目的]在生物学研究及生物制品生产中易发生支原体污染,针对我国当前支原体检验方法在时效性和敏感性上的不足,建立一种简便快速、特异敏感的支原体检验PCR方法.[方法]从SILVA数据库下载包含全部细菌、古菌和真菌的核糖体rRNA小亚基(16S/18S,SSU)参考序列的库文件SILVA_123-SSURef,从中提取全部...     

家兔原始卵泡卵母细胞体外发育的培养体系研究

本研究根据家兔卵巢的发育特征初步探讨了家兔卵巢卵母细胞体外发育的培养体系。采集新生或30日龄家兔卵巢在不同培养液中培养,并分析家兔卵母细胞的体外发生与成熟情况与体内正常发育的兔卵巢卵母细胞之间的差异,来筛选和优化家兔卵巢卵母细胞的体外培养体系。本试验从高糖DMEM、FSH浓度、BSA/血清等3个方面来筛选较好的培养条件,结果表明:①不添加高糖DMEM的M199培养液与添加的相比,卵巢上卵母细胞数量要多,但随着培养时间的延长,组织块上卵母细胞的形态会变得不清楚;②家兔卵巢组织在FSH浓度为50和100m IU/m l、添加血清的DMEM/F12培养液中生长较好,体外培养24d后,卵母细胞数量多,直径增加到65μm;③与添加BSA的培养液相比,添加血清的培养液中的卵巢卵母细胞生长状态较好,体外培养28d后,卵母细胞数量多,并且直径可达65μm。     

制苗用鸡蛋中支原体污染的检测

本研究应用KM_2液体培养基培养法和姬姆萨氏染色法对来源于山西生物制品厂的两批可疑感染支原体的制苗用鸡蛋进行了检测。结果表明:第一批样品阳性检出率为71.4％;第二批样品阳性检出率为85.7％。由此说明,该试验方法作为支原体污染检测的常规方法使用于生产中具有重要的实践意义。     

兔出血症病毒套式PCR检测方法的建立

根据GenBank登录的兔出血症病毒的VP60基因序列，设计了2对引物，建立了检测兔出血症病毒的套式PCR检测方法．先用外引物扩增一段389bp的DNA片断，继而用内引物以扩增产物为模板进行第2次扩增（即套式PCR），以提高结果的准确性，避免一次性PCR的假阳性结果．用该方法对12份RHD样本进行检测，检出率为100％．     

家兔皮肤真菌通用引物PCR检测和培养鉴定的比较研究

本研究比较了家兔皮肤真菌通用引物PCR检测方法与培养鉴定方法的敏感性,探讨了通用引物PCR检测方法的特异性及其在皮肤真菌诊断中的意义.根据皮肤真菌特异性rDNA序列设计通用引物,对已知分离株及不同微生物进行特异性检测,应用该引物对40份兔患部病料进行PCR检测并克隆测序;同时,采用培养鉴定对40份病料进行表型分析.PCR检测结果显示,家兔四种常见病原性皮肤真菌可扩增出400 ～500 bp之间的条带,其它微生物和兔体细胞均为阴性,说明该方法具有特异性;33份临床病料检测为阳性,扩增条带均为460bp,经测序为须癣毛癣菌.培养法的阳性为26份,检测结果与前者一致.与传统的培养鉴定方法相比,本研究建立的通用引物PCR检测方法,操作简便、特异性高,可用于大规模的家兔皮肤真菌病检测和流行病学调查,并具有重要的公共卫生意义.