利用辐射诱变及分子标记辅助筛选进行苦瓜种质创新

[目的]对苦瓜不同材料干种子进行辐射诱变,并利用分子标记对突变植株进行筛选,建立一套苦瓜种质创新和遗传改良的快速高效技术体系,为苦瓜遗传育种提供参考.[方法]以3个苦瓜资源MC1、MC42、MC52干种子为材料,利用60Co-γ射线进行不同辐射剂量(0、600、700、800、900、1200、1500 Gy)处理,调查其发芽率、出苗率、成苗率,以确定适宜辐射剂量;利用SRAP分子标记对诱变植株M2代突变单株进行筛选,并根据雌花率、农艺性状、抗病性等指标对雌性系连续多代进行田间定向选育,培育苦瓜雌性系.[结果]与对照(0 Gy)相比,经600～1500 Gy辐射处理后,不同苦瓜材料干种子的发芽率、出苗率及成苗率整体呈下降变化趋势;MC1、MC42和MC52干种子的半致死剂量分别为900、700和600 Gy,适宜苦瓜的辐射剂量为600～700 Gy,成苗率为确定辐照剂量的可靠敏感性测定指标.在M2代利用SRAP分子标记对18571个单株进行筛选,获得突变单株508株,其中纯雌单株116株,雌花率≥50％的强雌性单株162株;对获得的突变单株连续进行3代田间定向筛选,成功筛选获得8个综合性状优良的突变雌性系,其中MC1-M52株、MC42-M53株、MC52-M53株,均存在多个位点的DNA变异.[结论]选择适合剂量的60Co-γ射线进行辐射诱变,结合“直接PCR试剂盒+SRAP分子标记”对苦瓜M2代进行高通量突变单株筛选,并连续进行田间多代定向筛选,是创新苦瓜种质的高效便捷手段.     

砀山酥梨60Coγ射线辐射诱变效应及其RAPD标记检测

为探索辐射对砀山酥梨新梢生长和诱变效应的影响,探讨分子标记辅助辐射诱变育种新技术,利用砀山酥梨休眠枝条进行60Coγ射线辐照处理,枝条高接后分别对萌芽率、新梢生长量进行统计.提取不同处理叶片基因组DNA,利用RAPD分子标记分析处理剂量对基因组DNA变异的影响.结果表明,30 Gy、40 Gy和50 Gy处理的萌芽率分别为0.7257、0.5427和0.1940,新梢生长量分别为48.21、35.47和25.67 cm.从42个随机引物中筛选出10条适宜引物对材料变异进行分析,发现随辐射剂量的增加,萌芽率、新梢生长量随之降低,分子检测变异程度随之增大.     

甜菜离子注入诱变早熟突变体的RAPD分子标记筛选

以离子注入诱变技术获得的甜菜早熟突变体W11和未做诱变处理的7208为对照材料,提取DNA并进行RAPD分析,选取800条RAPD随机引物对W11和7208进行扩增,结果表明,W11?208之间在DNA水平上存在差异.从800条随机引物中筛选到45条在W11和7208中存在差异, 存在差异的引物占所用引物数的5.6;,表明W11和7208种的相似性很高.该研究利用W11和 7208做亲本构建分子标记作图群体,进而定位早熟性状基因或QTL奠定了基础.     

EMS诱变技术及其在小麦研究中的应用进展

甲基磺酸乙酯(EMS)是一种常用的化学诱变剂,能诱发产生高频率的基因和染色体突变。近年来,依托突变体的创建为基础的基因定位、克隆和功能基因研究得以迅速拓展。从小麦EMS诱变、最佳处理剂量与表型、生理生化、分子标记鉴定,产量、品质、抗逆、抗感病等关键性状突变体筛选以及小麦异源易位系创制与诱导小麦条锈菌毒性突变、突变库的利用等多方面对我国在EMS诱变及其在小麦研究中的应用进展进行了综述,并对EMS技术的发展前景及趋势进行了展望,以期为今后的诱变育种提供研究参考。     

甜菜离子注入诱变高糖突变体的RAPD分子标记筛选

以离子注入诱变技术获得的甜菜高糖突变体S10和未做诱变处理的F104及F2代85株单株为研究材料,提取DNA并进行RAPD分析,选取800条RAPD随机引物对S10和F104进行扩增,结果表明,S10和F104之间在DNA水平上存在差异.从800条随机引物中筛选到19条引物在S10和F104中存在较稳定差异,存在差异的引物占所用引物数的2.3;,该研究利用S10和F104做亲本构建分子标记作图群体,进而为定位高糖性状基因或QTL奠定了基础.     

石刁柏辐射诱变的遗传学分析与RAPD研究

以60Co-γ作为辐射源,对石刁柏愈伤组织进行5个不同剂量的辐射诱变,经细胞学鉴定和RAPD分析,不同辐射剂量的辐射诱变效果有明显差异.采用细胞学鉴定染色体结构变异,辐射剂量为1、5、10、20Gy的材料变异率分别为9.4%、36.5%、31.2%、48.2%,在石刁柏辐射品种的RAPD鉴定中,从100个随机引物中筛选...     

运用RAPD分析菊花辐射变异后代遗传差异

以不同辐射剂量的^60Co-γ射线处理菊花愈伤组织，获得变异后代，从分子水平上检测不同辐射剂量对植物遗传物质的影响，运用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对5种变异株和对照进行分子标记和遗传突变的研究，建立了适合RAPD的反应体系，优化其反应条件，从25种引物中筛选出的6种引物表现出明显的多态性差异，共扩增出72条带。结果表明，经过不同辐射剂量处理获得的变异菊花在DNA水平上存在多态性差异，分析了多态性产生的机理和变异株间遗传物质的差异，并讨论了RAPD的可靠性和辐射变异的机理。     

甜瓜RAPD反应体系的优化

以甜瓜单性花类型植株为材料,采用改良的CTAB法提取基因组,对影响RAPD反应的各种因子进行筛选。结果表明:在20μL反应体积中,RAPD优化反应体系为:模板DNA浓度2.5ng/μL,dNTP 0.25 mmol/L,随机引物0.8μmol/L,TaqDNA聚合酶1.0U。利用此优化的反应体系,采用BSA法筛选出一条长约550bp与甜瓜单性花相关基因连锁的分子标记。     

甘蓝型油菜细胞质雄性不育恢复基因的分子标记及定位

以甘蓝型油菜恢复系CP015和不育系77A构建的F2群体为供试材料,运用RAPD,SSR和AFLP 3种标记技术,对甘蓝型油菜恢复基因进行分子标记和图谱定位。在260条RAPD引物、185对SSR引物、58对AFLP引物中,在两亲本间筛选多态性高的RAPD引物121条,SSR引物128对,AFLP引物组合26对,进一步通过BSA法筛选,获得了与甘蓝型油菜恢复基因Rf连锁的1个RAPD标记S1009-750和1个AFLP标记E5M11-150,标记与基因Rf之间的遗传距离分别为4.9cM和8.6cM。     

空间诱变后的水稻SSR标记变异特征研究

对经过卫星搭栽的水稻品种抗倒丝苗种子及后代进行了微卫星标记分析和有关性状研究.随机选用151对分布于水稻12条染色体上的微卫星引物对抗倒丝苗及其21个突变株系进行分子标记检测.结果发现突变株系与原种相比都存在多个标记座位的突变.突变标记座位的多少随突变系与原种间差异大小而变化.试验结果表明,空间诱变可使水稻的DNA分子在多个区段发生重复或缺失等结构性变异,从而使水稻的表型及生理指标发生变异.     

不同类型分子标记在苜蓿基因组中的检测效率分析

为选择适合苜蓿基因组检测的分子标记,以19份国内外苜蓿种质为材料,比较分析了ISSR、SCo T、RAPD 3种标记在苜蓿基因组中的检测效率。结果表明,不同分子标记检测效率差异较大,引物筛选率以RAPD标记最高,达到41.18%;扩增总条带数和多态性条带数均以RAPD标记最多,多态性条带百分比以ISSR最高,为96.25%;SCo T标记的有效等位基因数、Nei’s基因多样性指数和Shannon’s信息指数值均高于ISSR、RAPD标记。可见,不同分子标记在不同检测指标方面各有优劣,应综合应用。     

油菜核不育两用系不育基因RAPD标记研究初报

为建立有效的不育基因分子标记辅助育种平台,以5个核不育两用系为研究材料,选用20条随机引物,利用RAPD混合集群分离分析法,对各两用系可育与不育基因池进行分子标记的初步分析.结果表明,在油研10号筛选到2个与不育基因相关的标记:BA2084-600和S1354-1300;在萝×诸中筛选到1个与不育基因相关的标记:LC02-500.在827AB、T18筛选到集团间有差异的引物,未筛选到通过集团单株检测的与其育性基因相关的标记.通过RAPD混合BSA法可以筛选到与不育基因相关的特异DNA标记.     

家蚕荧光茧色分子标记初探

为了获得家蚕荧光茧色基因的分子标记,以家蚕的荧光品种C408黄和C408紫为材料,采用400多个RAPD随机引物筛选分子标记,获得了与家蚕紫荧光茧色有关的1个分子标记CFP-01859.并通过设计特异引物转换成SCAR标记验证,证明获得的标记真实、可靠,并对该分子标记的片段进行了克隆和测序.     

RAPD和SSR标记在玉米遗传多样性分析中的应用

利用RAPD和SSR两种标记方法研究了16个玉米自交系的遗传多样性,并对这两种分子标记系统进行了比较。结果表明,利用15条RAPD引物,检测到了126条有多态性的带。用筛选出的20对SSR引物,检测到69个等位基因。RAPD和SSR分子标记均有很高的多态性,RAPD多态性带比例数86％,SSR位点检测出的平均等位基因数3．4个。RAPD分子标记结果将16个玉米自交系划分为4组,SSR分子标记将其划分为5组。与系谱分析基本一致,两种分子标记划分的结果也相似。研究认为,RAPD、SSR两种分子标记系统均适合于玉米种质的遗传多样性研究。     

碳离子束辐照水稻诱变效应及突变体的筛选

【目的】丰富水稻Oryza sativa L.突变体库,快速创造稳定遗传的新种质,为重离子辐照诱变机理研究和水稻遗传育种提供丰富的基础材料。【方法】利用碳离子束辐照水稻品种‘IR-55’、‘IR-60’、‘三粒寸’和‘云南陆稻’原种进行诱变,并对诱变后代的多个农艺性状进行多代跟踪调查。【结果】4个水稻品种突变株系株高、剑叶长、穗长和粒长宽比等性状呈现出较大变异幅度,且具有明显的正向或负向性,结实率表现出明显的下降趋势,最低为2%。利用随机选取的SSR分子标记引物对突变体进行遗传多样性检测发现,突变株系与原种的遗传多样性表现出明显的差异,表明重离子辐照诱变引起DNA序列较大片段的改变,而不是微小的点突变。【结论】碳离子束辐照对水稻株高、剑叶长和粒型等多个农艺性状产生正向或负向的诱变效应,在诱变后代中可以筛选出一批农艺性状变异的水稻新种质。     

甘蓝型油菜胞质雄性不育育性恢复基因的分子标记

以甘蓝型油菜不育系212A和恢复系1521C组配的含144个单株的F2群体为试验材料,用RAPD和SRAP两种分子标记,结合BSA法,对可育DNA池与不育DNA池筛选,存在差异的引物再用分离群体进行检测。在690条RAPD引物、270对SRAP引物中,获得了与甘蓝型油菜恢复基因Rf连锁的1个RAPD标记OPS11-850和1个SRAP标记M17E13-150,标记与基因Rf之间的遗传距离分别为6.8 c M和10.8 c M。     

小麦矮秆新基因的RAPD标记

以矮秆易位系山农31504-1和高秆种质系山农298为材料,利用BSA法对矮秆基因进行了RAPD标记。从300个十碱基随机引物中筛选出引物S152可在矮秆DNA池中扩增出特征带。利用100株F_2单株进行连锁分析表明,引物S152扩增的RAPD标记与矮秆基因连锁,遗传距离为10．73±3．31cM。该标记可用于分子标记辅助选择,并为矮秆基因的深入研究奠定基础。     

与茄子果皮颜色相关联的AFLP及SCAR标记

 【目的】寻找与茄子皮色或果皮花青素合成相关基因连锁的分子标记,检验混合品系法（bulked lines analysis）在筛选分子标记中的应用。【方法】采用AFLP技术,以具有不同果皮颜色的茄子及近缘种为材料,采用单株检测和混合品系法分别筛选与茄子果皮颜色相关基因连锁的分子标记。【结果】对58份高代自交系材料进行单株检测（亲缘关系分析）,筛选到了1个与茄子紫红、紫黑果色相关的共显性标记。测序结果表明,片段长度分别为107和108 bp,为发生插入/缺失突变的同源序列;将其转化为SCAR标记,对136份茄子材料进行验证,在其中111份紫红、紫黑皮色材料中,相关符合率为90%,在白色及绿色材料中表现为不规律分布。最后以混合品系法,在两池内进一步筛选到了6个多态性标记,对6个标记进行单株验证,确定了它们与紫红、紫黑果色相关。【结论】本试验所获得的SCAR标记、AFLP标记可以用于茄子果色分子标记辅助育种。     

利用RAPD分子标记技术分析玉米种质遗传多样性

通过RAPD分子标记方法对13份玉米材料进行遗传多样性研究,将其划分到相应的杂种优势类群中,通过与材料的系谱和数量遗传学划分结果比较,有一定亲缘成分的自交系多归于一类,说明利用RAPD分子标记方法可以对玉米自交系亲缘关系进行划分.     

空间诱变处理后菜心变异株系的RAPD分析

为了从分子水平上研究空间诱变处理后菜心变异株系的遗传变异,对太空诱变处理后的2个菜心品种的种子返回地面进行种植,并对定向选育5～6代后的6个变异株系及原种进行RAPD检测分析。结果表明:从100条随机引物中筛选出16条能扩增出特异性条带的引物。油绿50天的3个变异株系与原种相比均有一定的遗传变异,其中以株系50-2的变异最大,3个变异株系之间有一定差异;油绿80天的3个变异株系与原种相比也有一定的遗传变异,其中以株系80-2的变异最大,3个变异株系之间也有一定差异。此外,航天诱变处理后的油绿80天菜心品种内在分子水平上的变异大于油绿50天。突变后代在DNA水平上与对照存在差异,说明突变体基因发生了点突变或染色体互换、缺失,空间诱变为菜心优良品种的选育提供了新的途径。