水貂附红细胞体的体外培养试验

在RPMI-1640、D-MEM、M-199、HL培养液中添加30%的新生牛血清或水貂血清,采用37℃、5%CO2条件下体外培养水貂附红细胞体,每12 h更换1次培养液,补充适量健康水貂红细胞,并作传代培养。试验结果表明,RPMI-1640和HL培养液附红细胞体的感染率和感染强度高于D-MEM和M-199培养液,在RPMI-1640和HL培养液中添加30%水貂血清的感染率和感染强度高于添加30%新生牛血清,且RPMI-1640略好于HL培养液,培养12 h后,获得了高达80%以上的感染率;体外传代连续培养23代。     

狐狸附红细胞体体外药物筛选试验

[目的]对狐狸附红细胞体进行体外药物筛选试验。[方法]以 RPMI-1640为基础培养液,加入30%犊牛血清,选用贝尼尔、土霉素、大蒜素、强力霉素、咪唑苯脲、氟苯尼考、附红绝杀、磷酸伯氨喹等药物原粉,在37.3℃、5% CO2条件下对狐狸附红细胞体进行体外药物筛选试验。[结果]附红绝杀效果最好;磷酸伯氨喹和贝尼尔药物次之;咪唑苯脲、大蒜素、氟苯尼考有效。[结论]该研究为附红细胞体病的临床治疗提供了科学的理论依据。     

不同药物对温氏附红细胞体体外杀灭效果研究

[目的]筛选对温氏附红细胞体体外杀灭具有最佳效果的药物。[方法]以RPMI-1640为基础培养液,加入30%犊牛血清,选用盐酸土霉素、恩诺沙星、磺胺对甲氧嘧啶、硫酸庆大霉素、磷酸伯氨喹啉、盐酸咪唑苯脲、贝尼尔7种药物,在37℃、5%CO2的环境下,进行温氏附红细胞体体外药物杀灭试验。[结果]磷酸伯氨喹、盐酸咪唑苯脲对牛附红细胞体的体外杀灭效果最佳,当培养液药物浓度为2 000μg/ml,药物与附红细胞体作用6 h时,红细胞染虫率显著下降到30%以下。盐酸土霉素、恩诺沙星、贝尼尔和磺胺对甲氧嘧啶对附红细胞体均有一定作用。硫酸庆大霉素具有较强抗菌作用,但对牛附红细胞体病无效。[结论]该研究为临床选择抗附红细胞体病的合适药物提供理论依据。     

山羊附红细胞体体外药物杀灭试验

以RPMI-1640为基础培养液,加入30%犊牛血清,选用四环素、盐酸吖啶黄、泰乐菌素、咪唑苯脲、依沙吖啶、磷酸伯氨喹等药物原粉,在37℃,5%CO2气体条件下,对山羊附红细胞体进行了体外药物杀灭试验。结果表明:依沙吖啶杀灭效果最好,盐酸吖啶黄和磷酸伯氨喹次之,咪唑苯脲、四环素有效。     

牛附红细胞体体外药物筛选试验

以RPMI-1640为基础培养液,加入30%犊牛血清,选用贝尼尔、四环素、敌百虫、泰妙菌素、咪唑苯脲、氟苯尼考、依沙吖啶、磷酸伯氨喹等药物原粉,在37℃,5%CO2气体条件下对牛附红细胞体进行了体外药物筛选试验。结果表明,依沙吖啶效果最好;敌百虫和磷酸伯氨喹次之,但敌百虫毒性较大;贝尼尔、咪唑苯脲、氟苯尼考有效。     

猪附红细胞体的体外培养研究

用RPMI—1640和胎牛血清按比例混合并添加肌苷作为体外培养猪附红细胞体（M．suis）的基础培养基,以无附红细胞体感染的兔红细胞泥作为培养寄生载体,置于体积分数为5％CO,的37℃生化恒温培养箱进行M．suis的体外培养研究．结果表明,培养时每24h换培养液1次,每36h传代1次,可连续传代40代次以上,并能保持最高感染率90％以上;感染M．suis的猪红细胞在4℃条件下可保持30d以上而不发生溶血;兔红细胞接种新鲜制备的自然感染M．suis的猪红细胞,36h后感染率可达91．6％,并一直维持到96h,96h后有少量细胞开始出现溶血;接种4℃条件下保存30d以内自然感染M．suis的猪红细胞与新鲜制备的自然感染M．suls诂的猪红细胞对兔红细胞的感染率影响差异不显著．     

家兔原始卵泡卵母细胞体外发育的培养体系研究

本研究根据家兔卵巢的发育特征初步探讨了家兔卵巢卵母细胞体外发育的培养体系。采集新生或30日龄家兔卵巢在不同培养液中培养,并分析家兔卵母细胞的体外发生与成熟情况与体内正常发育的兔卵巢卵母细胞之间的差异,来筛选和优化家兔卵巢卵母细胞的体外培养体系。本试验从高糖DMEM、FSH浓度、BSA/血清等3个方面来筛选较好的培养条件,结果表明:①不添加高糖DMEM的M199培养液与添加的相比,卵巢上卵母细胞数量要多,但随着培养时间的延长,组织块上卵母细胞的形态会变得不清楚;②家兔卵巢组织在FSH浓度为50和100m IU/m l、添加血清的DMEM/F12培养液中生长较好,体外培养24d后,卵母细胞数量多,直径增加到65μm;③与添加BSA的培养液相比,添加血清的培养液中的卵巢卵母细胞生长状态较好,体外培养28d后,卵母细胞数量多,并且直径可达65μm。     

狐狸附红细胞体体外药物杀灭试验

以RPMI-1640为基础培养液，加入30％犊牛血清，选用贝尼尔、土霉素、大蒜素、强力霉素、咪唑苯脲、氟苯尼考、附红绝杀、磷酸伯氨喹等药物原粉，在37．3℃、5％CO2气体条件下对狐狸附红细胞体进行了体外药物筛选试验。结果表明，附红绝杀效果最好；磷酸伯氨喹和贝尼尔药物次之；咪唑苯脲、大蒜索、氟苯尼考有效。     

猪肺泡巨噬细胞的分离、纯化和冷冻保存研究

通过冷PBS气管灌洗法分离猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM),优化了PAM的纯化和冷冻保存方法,并进行了PAM纯度鉴定、细胞吞噬功能和存活率检测.结果表明:RPMI-1640培养液比DMEM培养液更适于PAM的培养和冷冻保存;巨噬细胞抗体MAC387免疫荧光检测表明,贴壁2h后更换培养液获得的PAM纯度最高(P＜0.05);用70％ RPMI-1640+20％新生牛血清+10％ DMSO的体系冷冻保存细胞密度为1×107个/mL的PAM可获得高达98.09％的存活率,冻存前后PAM的墨汁吞噬率无显著差异(P＞0.05).     

奶牛腹腔巨噬细胞的分离与鉴定

以无血清的RPMI-1640培养液灌洗奶牛腹腔,分离获取奶牛腹腔巨噬细胞,在含10%小牛血清的RPMI-1640培养液中培养。采用倒置显微镜观察细胞形态,并通过瑞氏染色计算其纯度。结果表明,采用无血清的RPMI-1640培养液灌洗奶牛腹腔,能够获得较高纯度的巨噬细胞,能为奶牛胞内寄生菌存活机制的研究提供很好的试验材料。     

Hepa1-6细胞的最佳培养条件研究

[目的]探索Hepa1-6细胞的最佳培养条件。[方法]以小鼠Hepa1-6肝癌细胞为材料,采用正交试验设计研究RPMI1640和DMEM2种不同培养基及细胞接种密度、血清浓度、双抗浓度、D-Hanks漂洗次数、胰蛋白酶浓度和消化时间6个不同因素对Hepa1-6传代培养的影响;根据细胞在6个时间点的生长状况评分,筛选出Hepa1-6细胞的最佳培养条件。[结果]Hepa1-6细胞在含有20%血清的RPMI-1640培养基,接种密度为4×104个/cm2,100U/ml的双抗浓度,贴壁率在90%以上时,D-Hanks漂洗1次,0.5%胰蛋白酶消化2min,传代效果最好。[结论]通过正交设计筛选,为Hepa1-6细胞体外培养探索出最佳培养条件。     

Hepa1-6细胞的最佳培养条件研究

[目的]探索Hepa1-6细胞的最佳培养条件。[方法]以小鼠Hepa1-6肝癌细胞为材料,采用正交试验设计研究RPMI1640和DMEM2种不同培养基及细胞接种密度、血清浓度、双抗浓度、D-Hanks漂洗次数、胰蛋白酶浓度和消化时间6个不同因素对Hepa1-6传代培养的影响;根据细胞在6个时间点的生长状况评分,筛选出Hepa1-6细胞的最佳培养条件。[结果]Hepa1-6细胞在含有20%血清的RPMI-1640培养基,接种密度为4×104个/cm2,100U/ml的双抗浓度,贴壁率在90%以上时,D-Hanks漂洗1次,0.5%胰蛋白酶消化2min,传代效果最好。[结论]通过正交设计筛选,为Hepa1-6细胞体外培养探索出最佳培养条件。     

新疆绵羊附红细胞体四季感染调查

[目的]系统了解新疆绵羊群体中绵羊附红细胞体的感染、流行情况.[方法]实验采用鲜血压片、血涂片染色镜检和PCR方法,检测新疆7个绵羊主要养殖区绵羊血样850份.[结果]新疆绵羊群体中附红细胞体感染率很高,采用鲜血压片、血涂片染色镜检感染率达到97;,PCR检测感染率为75;;一年四季均有感染,季节性流行不明显;区域之间感染率无明显差异;感染强度多为中、轻度感染,而重度感染有两个小高峰,分别在5月到6月和11月到12月.[结论]新疆绵羊群体中绵羊附红细胞体存在严重感染;季节转换和饲草料结构的变化是本病发生的主要诱因.     

兔皮肤成纤维细胞的体外培养和NESTED-PCR支原体污染检测

[目的]为动物细胞核移植、转基因操作等提供充足的供体材料。[方法]通过对兔皮肤成纤维细胞的体外原代、传代培养和冷冻复苏,检测支原体污染状况。[结果]结果表明:在含有15%FCS(Fetal Calf Serum)的DMEM中培养的细胞初期生长状态较10%FCS中的细胞长势好,后期则相反。用PCR法对培养至25代的兔皮肤成纤维细胞进行支原体检测,均没有发现支原体污染现象。[结论]PCR法检测细胞培养支原体污染具有灵敏、准确、简便、快速、特异性好的优点。     

不同培养条件下欧洲鳗鲡胸鳍传代细胞的生长优势

为建立欧洲鳗鲡病毒性疾病分离、鉴定的细胞模型,以欧洲鳗鲡胸鳍细胞人工培养适应株(第21代)为试验材料,采用人工培养基体外传代培养的方法,探讨欧洲鳗鲡胸鳍传代细胞体外培养的最适条件。观察比较不同培养基(L-15、RPMI-1640、高糖型DMEM)、血清成分(BS和FBS)及其浓度(5%、10%、15%、20%)对欧洲鳗鲡胸鳍细胞生长状态的影响。结果表明:含有10%胎牛血清(FBS)的L-15培养基最适合欧洲鳗鲡胸鳍细胞的生长。     

不同培养体系对牛卵母细胞体外受精的影响

[目的]探讨适合于牛卵母细胞体外受精以及受精卵体外培养的最佳培养体系。[方法]通过对成熟的牛卵母细胞分别采用传统培养体系（对照组）和过渡培养体系（试验组）进行体外受精和受精卵体外培养,研究了不同组合的培养体系对受精率和卵裂率的影响。[结果]以受精液为TALP液,受精卵培养液为60%TALP液＋40%M-199液＋5%FCS的过渡培养体系能够提高牛体外成熟卵母细胞的受精率和卵裂率,分别为77.8%和55.6%。[结论]受精液为TALP液,受精卵培养液为60%TALP液＋40%M-199液＋5%FCS的过渡培养体系为牛卵母细胞体外受精以及受精卵体外培养的最佳培养体系。     

不同培养基对H9亚型禽流感病毒在MDCK细胞上的增殖效果研究

[目的]比较3种培养基对H9亚型禽流感病毒在MDCK细胞上的增殖效果。[方法]采用DMEM+10%血清、低血清培养基(MEM-MD-611)、无血清培养基(SFE4Mega)3种培养基制备MDCK细胞单层,分别接种不同稀释度的H9亚型禽流感病毒。然后,分别加入含10μg/ml胰蛋白酶的3种培养基作为维持液,培养病毒,每隔24 h观察其细胞病变,并测定上清HA滴度。[结果]在培养72～96 h时,无血清培养基病毒液的HA滴度高于低血清培养基,而低血清培养基则高于含血清培养基。[结论]3种培养基均可用于制备禽流感病毒抗原,其中无血清培养基、低血清培养基更适用于流感病毒抗原的制备。