鸡蛋清中3种蛋白质的连续化提取工艺初步研究

研究鸡蛋清中溶菌酶、卵转铁蛋白和卵白蛋白的分离提取工艺.采用硫酸铵沉淀和离子交换层析分离3种蛋白质,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测其纯度.结果显示,层析纯化后SDS-PAGE检测其纯度达到电泳纯,溶菌酶的比活由144.13 U/mg提高到2 235 U/mg,纯化倍数达15倍,回收率为15.76％;卵转铁蛋白抑菌率为48.84％.该方法分离溶菌酶、卵转铁蛋白和卵白蛋白的工艺路线简单、快捷、成本低,适用于工业生产.     

鸡蛋清中卵转铁蛋白的分离提取研究

为了研究鸡蛋清中卵转铁蛋白的分离提取工艺,采用硫酸铵沉淀和离子交换层析分离卵转铁蛋白,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测其纯度。鸡蛋清原液用Tris-HCl缓冲液稀释5倍,4℃下静置6h以上,采用50%~80%硫酸铵分级沉淀和Q-Sepharose FF离子交换层析分离卵转铁蛋白。结果显示,分离提取的卵转铁蛋白纯度达到96%,回收率为88.63%,且其具有生物活性,对大肠杆菌的抑菌率为48.84%。表明采用硫酸铵分级沉淀和Q-Sepharose FF离子交换层析法分离鸡蛋清中卵转铁蛋白可行。     

皱皮木瓜超氧化物歧化酶分离纯化研究

[目的]探讨皱皮木瓜超氧化物歧化酶（SOD）分离纯化工艺。[方法]以重庆綦江皱皮木瓜为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀、Se-vage法除杂蛋白、丙酮再次沉淀脱色除杂和Sephadex G-100凝胶层析,分离纯化皱皮木瓜SOD。采用Folin-酚法测定蛋白质含量,用改良的邻苯三酚自氧化法测定酶活性。[结果]皱皮木瓜SOD在层析过程中得到较好的分离纯化。其纯化倍数是178.72倍,回收率是4.94%,比活力是303.82 U/mg蛋白。SDS-PAGE纯度鉴定结果表明,电泳图为一条谱带,表明分离纯化到达电泳纯的样品。[结论]采用该分离纯化工艺得到比活力较高,达到电泳纯的皱皮木瓜SOD样品。     

鸡蛋清中溶菌酶提取技术的研究

对鸡蛋清中溶菌酶的提取及纯化技术进行探究,从而获得纯度、活性、浓度均较高的溶菌酶。采用弱酸性阳离子交换树脂法提取,离心透析纯化,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。结果表明,用此方法提取的溶菌酶纯度较高,酶活力为7793U/mg。     

重组猪干扰素α的纯化工艺研究

[目的]研究重组猪干扰素α的纯化工艺,为进一步研究该蛋白的分子结构及rPoIFN-α标准品的制备奠定基础。[方法]将含重组菌E.coliBL21诱导表达后得到的粗制rPoIFN-α,分别用2种方案进行纯化。方案1,依次用GST亲和层析法、DEAE阴离子交换法及分子筛法层析三步法进行纯化;方案2,依次用GST亲和层析和分子筛法层析两步法进行纯化。纯化结果用SDS-PAGE及Western-blot进行纯度检测及鉴定。[结果]诱导表达后的表达产物经SDS-PAGE检测,发现在45Kd分子量处有目的条带,Western-blot检测有特异性条带。通过两步法纯化后的rPoIFN-α纯度达96%,蛋白得率为42.8%,三步纯化纯度为98.8%。[结论]两步法得到的蛋白纯度非常接近三步法,但与三步法相比工艺更为简单方便。     

Bacillus mycoides磷脂酶C纯化制备研究

通过离子交换吸附(pH7.2)、超滤、离子交换层析(pH8.5)、疏水层析及凝胶层析等多步纯化过程对Bacillus mycoides 970 发酵所产胞外磷脂酶C的分离纯化进行了研究.纯化倍率为40.8倍,纯化酶活收率为25%.纯化样品比活力达到15370 U/mg.样品纯度经过SDS-PAGE检测达到电泳纯.     

高速逆流色谱分离纯化雪白睡莲花中的酚类成分

[目的]采用高速逆流色谱法(HSCCC)分离纯化雪白睡莲花中的酚类成分。[方法]HSCCC分离过程分为两步,分别采用乙酸乙酯∶甲醇∶水(4∶1∶5)和乙酸乙酯∶正丁醇∶水(4∶1∶5)两个体系,固定相均采用上相,流动相均采用下相,流速为2.0 m L/min,主机转速设定为850 r/min,紫外检测波长为254 nm。高效液相色谱(HPLC)检测纯度。[结果]第一步从200 mg的睡莲花提取物中分离得到异槲皮苷(I,41.4 mg)、紫云英苷(II,40 mg)和一混合物85 mg;第二步从混合物中分离纯化得到isostrictiniin(III,50.1 mg)和烟花苷(IV,26.3 mg),上述4种物质的纯度分别为73.53%、92.42%、82.36%和85.65%。[结论]HSCCC可快速的分离纯化雪白睡莲花中的酚类成分。     

S-8大孔吸附树脂分离纯化洒金桃叶珊瑚中桃叶珊瑚苷的工艺研究

[目的]研究大孔吸附树脂分离纯化桃叶珊瑚苷的工艺,为进一步精制洒金桃叶珊瑚中桃叶珊瑚苷奠定基础。[方法]以桃叶珊瑚苷为指标成分,用HPLC法测定桃叶珊瑚苷的含量,并优选大孔吸附树脂分离纯化桃叶珊瑚苷的最优工艺。[结果]S-8大孔吸附树脂分离纯化桃叶珊瑚苷的最优条件为:上样液浓度2.76 mg/ml,上样液流速2 BV/h,上样量9.20 mg/g,洗脱溶媒为浓度15%乙醇,洗脱流速2 BV/h,洗脱剂用量3 BV。[结论]S-8大孔吸附树脂对桃叶珊瑚苷分离纯化效果良好,产品纯度为48.04%,回收率为82.30%。     

正交试验优化新型大孔吸附树脂分离葛根素的的工艺研究

[目的]优化大孔吸附树脂分离纯化葛根素的最佳工艺。[方法]用静态与动态吸附-解吸方法分离葛根素,用高效液相色谱测定葛根素的量。[结果]HPD-800树脂对葛根素分离效果最佳,分离纯化葛根素的最优工艺条件为：在吸附过程中,上样液浓度为0.2mg/ml,上样原液pH值为1.0,过柱流速为2.0ml/min;在洗脱过程中,乙醇洗脱剂的体积分数为70%,体积为5BV,过柱流速为1.5ml/min。该最优工艺条件下,葛根素收率最高达91.02%,产品仅经1次结晶纯度达96.13%。[结论]HPD-800大孔吸附树脂对葛根素的分离纯化效果良好,操作简单,生产周期短,有较高的工业生产应用价值。     

溶菌酶提取工艺及其在山核桃乳中的应用研究

[目的]研究制备溶菌酶的最佳工艺条件及其在山核桃乳中的应用。[方法]以鸡蛋清为原料,通过阳离子交换树脂法提取溶菌酶,采用正交试验确定制备溶菌酶的最适工艺条件,并将溶菌酶与甘氨酸和NaCl复配后作为防腐剂应用于脱脂山核桃乳饮料中。[结果]通过正交试验确定的最佳工艺条件为:蛋清树脂比5:1、pH值7.0、搅拌吸附4h,用1.0mol/LNaCl洗脱,洗脱液经超滤、浓缩后冷冻干燥得到溶菌酶成品。该试验最终酶收率为89.78%,酶活力为14817U/mg。将0.05%溶菌酶与0.30%甘氨酸和0.40%NaCl进行复配用于生产脱脂山核桃乳,其抑菌效果较显著,降低了山核桃乳的杀菌强度,延长了产品货架期。[结论]该工艺操作方便,适合溶菌酶的工业化生产;溶菌酶用于生产脱脂山核桃乳效果好。     

液态调味蛋清超高压杀菌增活工艺研究

[目的]建立液态调味蛋清超高压杀菌、提高蛋清溶菌酶活性的新工艺。[方法]正交试验优化超高压处理工艺参数,以降低液态调味蛋清的菌落总数并增加溶菌酶活性。[结果]优化的液态调味蛋清超高压杀菌增活的工艺条件为压力300 MPa,温度30℃,保压时间15 min。在此最佳工艺条件下,液态调味蛋清的菌落总数<100 cfu/ml,溶菌酶活性比未处理的蛋清液增高约50%。[结论]液态调味蛋清经超高压处理,既可确保有效杀菌,又能大幅提高蛋清中溶菌酶活性。     

鸡蛋蛋白过敏综述

鸡蛋过敏是一种复杂的无序状态,许多鸡蛋蛋白均可引起过敏。鸡蛋蛋白过敏受多种免疫机制驱动,过敏发生率和占主导地位的过敏机制随年龄改变而改变。鸡蛋过敏一般为免疫球蛋白E(IgE)介导型过敏反应,鸡蛋蛋白中主要的过敏原为卵白蛋白、卵类黏蛋白、卵转铁蛋白、溶菌酶。鸡蛋过敏真实患者或疑似患者及早避食蛋制品和及时给予喂养指导十分重要。通过对过敏的诱发和免疫机理的了解探讨了导致鸡蛋过敏反应的过敏原特征和检测手段,并对过敏反应的预防策略进行分析。     

双抗夹心酶联免疫分析法检测食品中鸡蛋过敏原

[目的]建立食品中鸡蛋过敏原的酶联免疫检测方法。[方法]以卵白蛋白为检测对象,分别制备抗卵白蛋白的多克隆和单克隆抗体。将单克隆抗体作为包被抗体,辣根过氧化物酶标记多克隆抗体为二抗构建卵白蛋白的双抗夹心ELISA方法。[结果]该方法的IC50为260 ng/ml,检出限为10 ng/ml,样品的添加回收率为84.2%～89.8%,相对标准偏差小于10%。[结论]该试验建立的分析方法稳定可靠,能满足食品中鸡蛋过敏原准确、快速的检测需要。     

鸡蛋清中溶菌酶的分离提取

采用二次硫酸铵沉淀和离子交换层析透过法分离溶菌酶,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS\|PAGE）检测其纯度,研究鸡蛋清中溶菌酶的分离提取工艺。鸡蛋清原液用Tris\|HCl缓冲液稀释5倍,4℃下静置6 h,经50%硫酸铵沉淀后收集上清,再经80%硫酸铵收集沉淀后溶于pH 90的Tris\|HCl后经Q\|Sepharose FF阴离子交换层析直接在透过液中一步就可分离得到SDS\|PAGE电泳纯的溶菌酶,酶比活由14413 U·mg-1提高到2 235 U·mg-1,酶活提高超过15倍,回收率为1576%。通过硫酸铵两级沉淀后只需收集Q\|Sepharose FF阴离子交换层析的透过液即可分离得到溶菌酶,同时还可一次性制备其他中性和酸性蛋白,简化了工艺,降低了生产成本。     

不同涂膜剂处理对蓝孔雀蛋的保鲜效果

【目的】延长蓝孔雀蛋的保鲜时间,增加其货架期.【方法】选用山梨酸、羧甲基壳聚糖、蔗糖酯、溶菌酶、Nisin、茶多酚、蜂胶、魔芋葡苷聚糖为涂膜基质,对蓝孔雀蛋进行单因素涂膜试验,相对湿度为35%的室温下测定哈夫单位、失重率、蛋黄系数、蛋白pH值的变化情况;在单因素试验的基础上,采用L9(34)正交试验设计对复合保鲜剂进行优选和复合保鲜应用试验.【结果】采用蜂胶(3.0%)、茶多酚(0.7%)、山梨酸(1.1%)和溶菌酶(0.04%)分别涂膜处理的蓝孔雀蛋,保鲜效果最佳;采用3.0%蜂胶+0.6%茶多酚+1.0%山梨酸+0.05%溶菌酶复合保鲜剂涂膜处理较对照组对蓝孔雀蛋的品质影响显著(P0.01),失质量率为6.47%,蛋黄系数为0.31,蛋白pH值为8.28,哈夫单位为34.9.【结论】常温下贮存90d后,蓝孔雀蛋出现散黄现象.而复合保鲜处理的蓝孔雀蛋贮存120 d时,仍未出现散黄现象.     

蜡状芽孢杆菌发酵鸡蛋清条件优化及产物分析

[目的]研究接种量、温度、初始pH值和培养时间对蜡状芽孢杆菌发酵鸡蛋清工艺条件的影响,并研究产物的相关性质.[方法]采用单因素试验和正交试验对发酵条件进行优化,并测定产物的自由基清除能力和抗菌活性。[结果]在蜡状芽孢杆菌接种量5．0％、温度30℃、pH值6．5、培养时间48h的条件下,鸡蛋清水解率最高,达到23．1％。该条件下水解产物的自由基清除力最高,达50.7％,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有抑菌效果,抑菌圈直径大小分别为1．8和1．6cm。[结论]蜡状芽孢杆菌对鸡蛋清的水解能力、较强,产物的抑菌能力和自由基清除能力也较强。     

思州鸡蛋品质及营养成分分析

【目的】分析评定思州鸡蛋品质及营养价值,为开展思州鸡选育及其种质资源的开发利用提供参考依据。【方法】随机选取相同条件下放牧饲养的思州鸡蛋30枚,进行鸡蛋品质及营养成分分析。【结果】思州鸡蛋的平均重、蛋形指数、蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋比重及哈氏单位分别为50．49g、1．35、0．38mm、3．75kg／cm^2、1．08g／cm,和72．75,蛋黄、蛋清和蛋壳比例适中,粗蛋白、粗脂肪和水分含量分别为14．10％、14．16％和72．85％,钙、铁、锌和硒含量分别为66．68、2．85、2．26和0．008mg／100g,不饱和脂肪酸含量为63．21％,氨基酸、必需氨基酸和鲜味氨基酸总量分别为14．26、6．02和4．53g／100g。【结论】思州鸡蛋品质优良,营养物质含量丰富,具有广阔的开发利用前景。     

臭椿叶提取物抗炎作用研究

[目的]探究臭椿叶提取物的抗炎作用。[方法]建立二甲苯致小鼠耳肿胀模型和10%蛋清生理盐水致小鼠足肿胀模型,观察臭椿叶提取物的抗炎效果。[结果]与模型组相比,臭椿叶提取物高剂量组能够明显对抗10%蛋清生理盐水导致的小鼠足肿胀,对二甲苯致小鼠耳肿胀也有一定的抗炎效果,但效果不十分明显。[结论]臭椿叶提取物具有一定的抗炎作用。