中国龙虾食物变态反应BALB_c鼠模型的建立

通过腹腔注射的致敏方式建立中国龙虾食物变态反应Balb/c小鼠模型,探讨中国龙虾食物变态反应体外鉴定与评价方法.将40只雄性Balb/c小鼠分为卵清蛋白(OVA)阳性对照组、Coca's液阴性对照组、空白对照组和模型组,以OVA、中国龙虾粗提蛋白,加氢氧化铝佐剂腹腔注射免疫Balb/c小鼠,建立食物变态反应小鼠模型.ELISA法测定第二次致敏激发后血清中IgE与组胺水平并进行被动皮肤过敏试验(PCA)确定特异性IgE抗体滴度,同时观察脾指数、小肠组织学变化及激发后的食物变态反应症状.末次激发后1h采血,中国龙虾粗提蛋白组血清IgE含量为236.75(±73.39) μg/L,与阳性对照OVA组无区别,与阴性对照Coca's液组和正常对照组相比显著升高(P＜0.01);中国龙虾粗提蛋白组的组胺含量406.55(±232.79) μg/L与正常对照组相比显著升高(P＜0.01); PCA反应中国龙虾粗提蛋白组血清特异性IgE抗体滴度达到1/16;中国龙虾粗提蛋白组和OVA致敏组小鼠脾指数明显大于Coca's液或正常对照组(P＜0.01)且前两组小肠粘膜固有层皆出现淋巴细胞、嗜酸性粒细胞等炎性细胞浸润.建立了一种中国龙虾食物变态反应小鼠模型,通过ELISA测定血清IgE和组胺以及PCA确定特异性IgE抗体滴度可作为一种鉴定与评价中国龙虾食物变态反应的方法.     

中国龙虾食物过敏反应中动物 肺组织的变化研究

将 40只雄性 Bal b/ c小鼠分为处理组也中国龙虾蛋白组、卵清蛋白（OVA）组页、阴性对照 Coca爷s液组和空 白对照组、 用中国龙虾蛋白或 OVA 混合氢氧化铝佐剂后进行腹腔注射致敏并通过灌胃激发建立食物过敏反应小 鼠。ELI SA 法测定致敏激发后的小鼠血清中 I gE 与组胺水平、收集支气管肺泡灌洗液并进行细胞计数、同时观察肺的 组织学改变。 灌胃激发后处理组小鼠出现身体抖动、呼吸急促等症状、处理组小鼠血清 I gE、组胺与 Coca爷s液组或正 常对照组相比显著升高;中国龙虾组和卵清蛋白组小鼠肺泡灌洗液中白细胞总数分别为 37. 5依3. 4 和 41. 2依4. 1、嗜酸 性粒细胞数分别为 18依6和 15依4、与正常对照组或 Coca爷s液组相比皆显著提高;处理组肺间质和肺泡内可见以淋巴 细胞、嗜酸性粒细胞和巨噬细胞为主炎细胞浸润、终末细支气管上皮细胞部分断裂及脱落、管壁增厚。 处理结果表 明院食物过敏反应中肺也是一个受损伤的器官、肺组织淋巴细胞、嗜酸性粒细胞等炎症细胞浸润增加可能是导致哮 喘发生的免疫学基础、提示食物过敏和哮喘发生之间具有一定的相关性。     

利用Balb/c 小鼠构建家蚕蛹食物过敏模型的研究

利用Balb/c小鼠构建家蚕蛹过敏模型并研究其致敏作用。48只雌性Balb/c小鼠分别用灌胃和皮下注射家蚕蛹蛋白的方法进行致敏。小鼠致敏后通过尾静脉注射伊文斯蓝考察其对血管通透性的影响;光镜和扫描电镜下观察致敏小鼠空肠组织的病理切片;测定血清中IgE、组胺、IFN-γ、IL-4和IL-6等的含量;免疫印记反应测定小鼠血清特异性抗体与家蚕蛹变应原的结合度。结果表明:小鼠发生过敏反应时,血清中产生与家蚕蛹蛋白特异性结合的IgE抗体,血清中组胺、IL-4和IL-6等的含量显著上升,而IFN-γ含量显著下降,同时各致敏试验组小鼠血管通透性增加,空肠组织出现糜烂和结构受损症状。该小鼠致敏模型的成功构建对于后续研究家蚕蛹变应原及其致敏的抗原表位等均具有重要基础作用。     

白果蛋白过敏动物模型的试验研究

【目的】对白果蛋白致敏的小鼠模型进行研究,以明确白果蛋白是否具有致敏性。【方法】以Tris-HCl缓冲液为阴性对照、卵白蛋白为阳性对照,设置白果蛋白低剂量组和高剂量组,每隔7d经口灌胃致敏1次共3次,末次致敏7d后腹腔注射激发,致使小鼠过敏。【结果】经白果蛋白及阳性对照激发后的小鼠血清产生高水平IgE及IgG抗体,体外激发小鼠致敏肥大细胞组胺释放率显著高于阴性对照,免疫期间血浆中组胺也显著升高,小鼠肠、肺、肝均见炎症病灶,高剂量处理及阳性对照的肾脏也呈炎症细胞浸润。【结论】该模型可用于研究白果蛋白致小鼠发生的IgE介导的Ⅰ型过敏反应。     

BCG-HPV16E7c疫苗对小鼠免疫效应的实验研究

目的研究卡介苗（BCG）-人乳头状瘤病毒16型（HPV16）E7c疫苗对小鼠的免疫效应和致病性。方法用本研究组制备的BCG-HPV 16E7c疫苗腹腔内接种清洁级BALB／c鼠,同时设磷酸盐缓冲液（PBS）对照组、BCG空白菌对照组及BCG-pBCG3000空白载体对照组,用酶联免疫法检测各组血清特异性抗体、流式细胞仪测定脾脏T淋巴细胞亚群及肝、肺组织病理学检查。结果免疫后第2周和第4周BCG-HPV16E7c组每只小鼠的血清中检测到抗HPV16E7c特异性抗体,在第4周诱导产生的特异性IgG抗体滴度明显高于第2周,平均滴度为1：200;免疫后第4周BCG-ETc组与各对照组比较,CD^8＋T细胞的百分率显著升高（P〈0．05）;免疫组小鼠肝、肺组织病理学检查和BCG对照组比较未观察到更为严重的病理学变化。结论本研究组构建的BCCM-IPV16E7c疫苗能诱导小鼠的体液免疫应答和细胞免疫应答,对小鼠无明显的毒性作用。     

重组热带螨Blo t 21变应原诱导小鼠变态反应气道炎症模型的建立

为了建立热带螨重组变应原Blo t 21(rBlo t 21)诱导小鼠变态反应气道炎症模型,笔者利用从NCBI Gen Bank库里获得的热带螨Blo t 21基因序列,进行了序列优化与全基因合成,构建了原核表达载体PQE80LrBlo t 21,在大肠杆菌内诱导表达rBlo t 21,利用镍柱亲和层析纯化rBlo t 21蛋白。12只BALB/c小鼠随机分为对照组(PBS组)与诱导组(rBlo t 21组),每组6只,通过腹腔注射致敏与气道诱导后,分别通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清总IgE水平;鼠尾静脉注射变应原诱发应激性过敏反应;HE染色观察小鼠肺部炎症严重程度。本试验成功表达与纯化了重组热带螨变应原Blo t 21。利用纯化的rBlo t 21诱导小鼠变态反应气道炎症模型,与PBS组相比,rBlo t 21组的小鼠血清总IgE水平显著升高,肺部组织细胞侵润明显增加(P0.05)。原核表达纯化的重组Blo t 21变应原能够诱导小鼠产生变态反应气道炎症。     

卵清蛋白特异性免疫耐受的诱导及鉴定

【目的】建立对卵清蛋白(OVA)免疫耐受的Babl/c小鼠模型。【方法】分别设立A、B、C、D、E、F试验组及相应对照组。A、B组小鼠口服OVA,隔天1次,共服5次,口服剂量分别为50或100μg/只;C、D、E、F组小鼠经尾静脉注射OVA 1次,剂量分别为5,10,50和100μg/只;分别于口服完成7 d后或尾静脉注射5 d后免疫小鼠,免疫后15 d,MTT法测定小鼠OVA特异性淋巴细胞增殖情况,间接ELISA测定小鼠血清抗OVA的IgG水平。C、D组小鼠分别进行二、三次免疫并检测抗体。【结果】A、B组小鼠淋巴细胞增殖的刺激指数(Simulate index,SI)分别为0.603±0.03和0.715±0.08,增殖效果不佳;C、D组小鼠SI值分别为0.096±0.01和0.083±0.01,淋巴细胞不增殖;E、F组小鼠淋巴细胞增殖效果与正常小鼠无差异。第一次免疫后,各组小鼠OVA抗体效价与相应对照组小鼠的OVA抗体无显著差异;C、D组在二免、三免后抗体水平持续下降,不呈现再次应答规律。【结论】小鼠口服小剂量OVA可以建立不完全细胞免疫耐受,经尾静脉注射小剂量OVA可以建立完全免疫耐受。     

甘露寡糖对免疫低下小鼠免疫功能的影响

[目的]探讨甘露寡糖对免疫低下小鼠免疫功能的影响,为甘露寡糖相关产品的开发应用提供实验依据。[方法]通过环磷酰胺制造免疫功能低下小鼠模型,给予甘露寡糖11 d后观察小鼠体重、脾脏指数、胸腺指数、巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素滴度和迟发型变态反应强度变化。[结果]甘露寡糖组体重、脾脏指数、胸腺指数、巨噬细胞吞噬率、吞噬指数、抗体积数和左右后足重量差均较模型组提高（P〈0.01）。[结论]适当剂量甘露寡糖可提高免疫低下小鼠免疫功能。     

苦马豆素-HSA对小鼠免疫原性研究

【目的】研究苦马豆素-HSA(SW-HSA)对小鼠的免疫原性,为构建SW噬菌体单链抗体库奠定基础。【方法】将12只健康Balb/c小鼠随机分为小剂量免疫组(A组)、大剂量免疫组(B组)和对照组(C组)3组,每组4只。免疫组用SW-HSA加入佐剂后进行了4次免疫,首免和第2次免疫间隔30 d,抗原剂量相同,分别为A组0.05mg/只,B组0.10 mg/只;第3,4次免疫分别在第50,70天进行,第3次免疫各组抗原量分别是首免的1.5倍,第4次免疫抗原量分别是首免的2.5倍。第3,4次免疫后第10天采血,用间接血凝试验与间接酶联免疫吸附试验检测血清中的SW抗体效价。【结果】第4次免疫后,间接血凝试验检测显示,A、B两组小鼠血清中的抗体效价分别达26和25;间接酶联免疫吸附试验检测显示,A、B两组小鼠血清中的抗体效价分别达29和28。【结论】用SW-HSA免疫Balb/c小鼠,可获得高抗体效价的免疫小鼠。     

牛源犬新孢子虫NcSAG1基因重组腺病毒株的构建及动物免疫试验

【目的】构建表达牛源犬新孢子虫NcSAG1基因的重组腺病毒株,并接种Balb/c小鼠,评价重组腺病毒株对Balb/c小鼠的体液免疫和细胞免疫应答水平。【方法】PCR扩增牛源犬新孢子虫NcSAG1基因,构建pMD18-T-NcSAG1克隆质粒和pCR259-NcSAG1重组腺病毒穿梭质粒;将鉴定正确的pCR259-NcSAG1重组腺病毒穿梭质粒依次转化HighQ-1 Transpose-Ad 294和HighQ-1™感受态细胞,构建Transpose-Ad-NcSAG1重组腺病毒表达质粒;PacI酶切线性化后,脂质体介导转染QBI-HEK 293细胞包装重组腺病毒Ad5-NcSAG1,应用PCR和Western blotting技术检测Ad5-NcSAG1及其表达蛋白产物。测定Ad5-NcSAG1重组腺病毒滴度后,接种Balb/c小鼠,测定小鼠血清中IgG特异性抗体和细胞因子IFN-γ、IL-4水平,以此评价重组腺病毒株的免疫应答效果。【结果】扩增的牛源犬新孢子虫NcSAG1基因大小为982bp,与GenBank中发表的NcSAG1（AF132217）核苷酸序列的同源性为99.2%;经PCR和Western blotting检测,重组腺病毒Ad5-NcSAG1在QBI-HEK 293细胞中包装成功,表达蛋白的分子量为33kD,具有较好的反应原性;测得重组腺病毒Ad5-NcSAG1滴度为1010TCID50/mL,Ad5-NcSAG1接种Balb/c小鼠后,能够诱导产生高水平的IgG特异性抗体和IFN-γ、IL-4细胞因子。说明Ad5-NcSAG1重组腺病毒对Balb/c小鼠产生了较强的体液免疫和细胞免疫应答。【结论】成功构建了牛源犬新孢子虫NcSAG1基因的重组腺病毒株,该毒株能够诱导Balb/c小鼠产生高水平的体液免疫和细胞免疫应答,为犬新孢子虫新型疫苗的临床试验奠定了基础。     

原核表达c-myc蛋白的多克隆抗体制备

探讨利用小鼠制备抗人c—myc蛋白多克隆抗体的方法。利用含PET28a／c—myc质粒的EcoliBL21,对c—myc蛋白进行原核表达,并进行纯化。WesternBlot结果只出现一条62KDa大小的特异性目的蛋白条带。用原核表达的c—myc蛋白抗原免疫5只Balb／c小鼠,最终免疫后的第7d采血,并对其血清效价进行ELISA（Enzyme—linked immunosorbnent assay）测定,抗血清达1：640000。本实验结果为c—myc单克隆抗体制备和肿瘤诊断试剂盒的研发提供基础实验数据。     

锯缘青蟹原肌球蛋白过敏者血清的筛选

为了解集美大学学生的饮食及食物过敏情况,对在校学生进行了问卷调查.调查共分发了4000份,主要涉及水产品食物过敏的种类、过敏症状等.调查收到有效问卷3890份,应答率为97.3%.自诉过敏的学生为1149人,约占29.5%.对水产品食物过敏的有545人（占自诉过敏的47.4%）,其中31例经ELISA检测,IgE为对蟹的原肌球蛋白呈阳性反应（占水产品食物过敏的5.7%,占蟹过敏的11.3%）.男女之间无统计学差异.自诉对蟹、虾、贝、鱼等水产品的过敏症状相似,多为皮疹和皮肤瘙痒.调查结果表明,蟹、虾、贝类和鱼是主要的水产品过敏食物.食物过敏症患者血清食物过敏原特异性IgE升高明显,采用ELISA检测法,方便,安全,准确,对临床确诊与防治食物过敏症有重要意义.     

呋喃它酮代谢物AMOZ单克隆抗体的制备与免疫学特性鉴定

用碳二亚胺(DCC)一步法将对醛基苯甲酸衍生物CPAMOZ偶联于牛血清白蛋白、卵清蛋白上,合成免疫原CNPAMOZ-BSA、包被原CNPAMOZ-OVA。用紫外线扫描、SDS-PAGE进行人工抗原合成的鉴定;免疫Balb/c小鼠,用杂交瘤技术建立分泌NPAMOZ mAb的细胞株;对NPAMOZ mAb的效价、敏感性和特异性进行鉴定。结果表明,CPAMOZ-BSA人工抗原分子结合比为15∶1;筛选出分泌NPAMOZ mAb的敏感特异的杂交瘤细胞1株2D11-B4,间接ELISA测定细胞培养上清,效价达到1∶(6.4×102),腹水效价为1∶(1.2×106),对NPAMOZ IC50为7.58μg/L,与其他抗生素交叉反应率低。本试验获得了抗NPAMOZ高价、敏感、特异的mAb,可用于呋喃它酮代谢物AMOZ的残留检测。     

虫草素对OVA免疫小鼠的体内免疫抑制活性研究

探讨虫草素体内对OVA小鼠免疫功能的抑制作用。通过建立OVA小鼠模型,发现虫草素(10、20、40 mg·kg-1)能够显著地抑制ConA,LPS和OVA诱导的小鼠脾细胞增殖。同时,虫草素还能够显著抑制OVA免疫小鼠的OVA特异性IgG、IgG1和IgG2a的抗体效价水平。表明虫草素能够抑制机体的细胞免疫和体液免疫反应,其机制可能是直接抑制T、B淋巴细胞的增殖。     

复合螺旋藻多糖对小鼠抗辐射损伤的作用机制研究

[目的]研究复合螺旋藻多糖对X射线辐射损伤小鼠的保护作用.[方法]将螺旋藻多糖（PSP）与银杏叶提取物（GBE）按1∶1比例配制不同浓度的复合螺旋藻多糖.昆明种小白鼠随机分为5组（空白对照组、对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组）,空白对照组不做处理,对照组灌服生理盐水,高、中、低剂量组灌服相应药物,连续14 d,对小鼠进行X射线全身照射,照射后继续灌服药物7d.[结果]高、中、低剂量组外周血白细胞数与对照组差异性均显著（P＜0.01）,并可显著提高小鼠脾脏和胸腺指数（P＜0.01）,CD4 ＋/CD8＋比例上升（P＜0.01）,细胞恢复明显加快,高剂量组CD4＋/CD8＋比例更接近空白对照组.[结论]复合螺旋藻多糖对X射线辐射损伤小鼠的免疫功能有一定的保护作用.     

不同饵料对波纹龙虾生长影响的研究

运用比较饲养法研究不同饵料对波纹龙虾（Panulirus homarus）生长的影响,试验设投喂杂鱼、杂虾、杂蟹、杂贝四个单一饵料组和混合投喂杂鱼＋杂虾、杂鱼＋杂蟹、杂鱼＋杂贝、杂虾＋杂蟹、杂虾＋杂贝、杂蟹＋杂贝6个混合饵料组。结果表明,混合投喂的效果好于单一投喂效果。单一投喂的饵料中杂贝、杂蟹的效果较好,其次是杂虾,...     

中药犊泻康对家兔离体肠管及小鼠肠推进率的影响

研究中药犊泻康对家兔离体肠管及小鼠肠推进率的影响。采用生物信号采集处理系统分析描记法进行研究。中药犊泻康对推进试验和离体肠管试验的结果表明:中药犊泻康对家兔离体肠管的运动有明显的抑制作用,使其收缩幅度降低,舒张时间延长差异显著(P0.05);并且对硝酸毛果芸香碱引起的小肠蠕动加快起到拮抗作用,对于活体小鼠能减缓其小肠蠕动推进速度,与正常对照组比较差异显著(P0.05)。中药犊泻康能抑制小鼠肠推进率和家兔离体肠管蠕动。     

分泌抗春雷霉素单克隆杂交瘤细胞株的建立 及免疫学特性鉴定

【目的】制备高灵敏、高特异性的抗春雷霉素单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。【方法】采用EDC法将KSM分别偶联于载体蛋白BSA和OVA上,分别合成免疫原KSM-BSA和包被原KSM-OVA,经SDS-PAGE鉴定后,免疫Balb/c小鼠,免疫间隔4周,4次免疫后,利用间接ELISA和间接竞争ELISA测定其多抗血清效价和敏感性,选出效价高、敏感性好的小鼠进行细胞融合,经过多次亚克隆筛选出分泌高敏感的特异性抗KSM单克隆抗体的杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备抗KSM的单克隆抗体并对其免疫学特性进行鉴定。【结果】SDS-PAGE鉴定结果显示KSM-BSA成功偶联,间接ELISA检测显示免疫的6只小鼠血清效价均达1:104以上,其中3号小鼠多抗血清敏感性最好,半数抑制浓度IC50为73.9ng•mL-1,融合后筛选出两株杂交瘤细胞株1G7和2C8,亚型均为IgG1型,其细胞上清效价分别为1:5.12×103 和1:1.28×103,腹水效价分别为1:5.12×105和1:2.56×105,抗KSM的单克隆抗体对春雷霉素的IC50为8.902ng•mL-1,与其它竞争物的交叉率均小于0.03%。【结论】本试验成功合成了春雷霉素人工抗原,并制备了敏感性高、特异性好的单克隆抗体,为春雷霉素免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。