油菜转基因研究进展

对转基因油菜受体的类型进行整理,发现油菜的下胚轴、叶柄、子叶等均是良好的转化外植体。油菜转化技术涉及到农杆菌介导法、基因枪轰击法、激光微束穿刺法、显微注射法等等,这些方法均应用于油菜遗传转化,各有其优缺点。油菜转基因的外源靶标基因包括抗除草剂、抗虫、抗病、品质改良和工程油的表达等等,这些转基因油菜正不断地进入商业化生产,给油菜育种和应用带来广阔的前景。     

动物转基因技术研究进展

文章对建立转基因动物的方法——显微注射法、逆转录病毒感染法、胚胎干细胞介导法、精子载体法和体细胞核移植法作了系统阐述，指出提高转基因效率的策略和转基因动物目前存在的问题，表达了基因各个构件和体内标志系统的设计应用对转基因整合与表达的影响。     

转基因猪研究的回顾及今后发展方略之我见

简要回顾了20多年来国内外转基因猪的研究,在对猪生产性能的遗传改良、用猪作为生物反应器生产医用蛋白以及用猪作为异种器官移植的供者等方面．取得的一些重要进展：概述了原核注射法、精子介导法、逆转录病毒感染法和体细胞核移植法转基因技术的建立和发展历程：对转基因猪的遗传稳定性进行了讨论。并根据国内外发展的态势和我国养猪业的现状．提出了转基因猪研究方向和技术路线的发展方略．     

动物转基因技术及其研究进展

本文简述了转基因动物技术的发展、现状和转基因动物的技术原理,介绍了显微注射法、反转录病毒法、精子载体法、胚胎干细胞法和体细胞核移植法制作转基因动物以及转基因动物的鉴定方法.     

动物转基因技术及其研究进展

本文简述了转基因动物技术的发展、现状和转基因动物的技术原理，介绍了显微注射法、反转录病毒法精子载体法、胚胎干细胞法和体细胞核移植法制作转基因动物以及转基因动物的鉴定方法。     

胞质内精子注射法介导外源DNA生产转基因动物

通过胞质内精子注射法介导转基因已经成为生产转基因动物的一种有效手段。然而传统的ICSI介导法用冻融精子或Triton X-100处理的精子作为携带外源DNA的载体,经胚胎移植后生产转基因后代的效率很低,主要原因为这些处理方式在提高转染效率的同时对精子染色体造成了较大程度的损伤。最近研究者们提出了一种使用高浓度碱液对精子进行简单的预处理,高效地生产转基因后代的方法。这些精子完全失去了质膜与顶体,但仍保留有核的完整性,并且可以高效的将外源基因插入宿主基因组,比传统的精子处理方法获得了更理想的转基因动物的生产效率。     

转人抑癌基因p53鸡的研究

【目的】探索MAR调控序列对外源人抑癌基因p53在转基因鸡体内整合稳定性的影响,为转基因禽类输卵管生物反应器的建立奠定基础。【方法】利用脂质体包埋法,将pEGFP-N1-p53/MAR重组真核表达载体转染人肝癌细胞(Hep3B),荧光显微镜和透射电镜检测转染含人野生型p53基因的Hep3B细胞形态及超微观结构的变化情况;显微注射法将脂质体介导的重组载体注入鸡X期胚盘的明区和暗区,制备G0代转基因鸡。以EGFP为报告基因,人工授精法制备G1代转基因鸡,对G0代和G1代鸡体外源基因p53进行PCR检测,并对G1代转基因鸡进行小动物活体成像检测。【结果】转染含人p53基因重组载体的Hep3B细胞明显皱缩变圆;微观结构层面,粗面内质网不明显,线粒体肿胀,细胞核中异染色质边集明显,并出现凋亡小体。G0代转基因鸡暗区组孵化率(45%)显著高于明区组孵化率(0)(P0.05),但均显著低于对照组孵化率(82.5%)(P0.05);获得4只基因组中含有外源p53基因的G0代转基因鸡,外源基因转染率为22.2%(4/18);获得2只G1代转基因鸡,转基因世代遗传率为3.08%(2/65)。【结论】重组真核表达载体pEGFP-N1-p53/MAR可以促进人肝癌细胞Hep3B的凋亡;脂质体介导的含MAR序列调控元件的pEGFP-N1-p53/MAR质粒,可以提高p53在转基因鸡基因组中的整合稳定性,并可遗传给后代。     

转基因鸡及输卵管生物反应器

随着生物制药业的迅速发展,转基因鸡输卵管生物反应器正逐渐成为人们关注的焦点,转基因鸡以其卓越的优势必将成为科学研究的热点和生物制药领域的新兴产业之一。目前,转基因鸡最成功的制备方法即逆转录病毒介导法,并已成功制备出表达标记基因的转基因鸡。通过综述鸡作为生物反应器的优势、转基因鸡发展历程、逆转录病毒载体制备转基因鸡的方法过程和转基因鸡的研究进展,同时也讨论了转基因鸡的意义和可能存在问题。     

转基因技术在动物遗传改良上的应用进展

简要介绍了几种比较常用的转基因方法.包括显微注射法、脂质体介导法、电转染法、胚胎干细胞法、病毒载体法、精子载体法、卵巢直接注射法.传统的转基因方法与基因打靶、体细胞核移植、RNA干扰以及线粒体转移技术相结合,在基因功能研究和疾病治疗中发挥越来越重要的作用.特别是近年来在植物上出现的外源基因清除技术,为我们在动物上彻底去除外源基因的影响提供了新思路.     

农业转基因品种利用现状及展望

随着中国转基因核心技术取得突破,已初步建立起水稻、棉花、油菜、玉米、大豆、花生、杨树等主要农作物和林草、花卉、果树等高效、安全转基因技术体系。中国转基因品种得到大面积推广应用的作物首推棉花。目前转基因育种的主要手段有农杆菌介导转化法和外源基因直接导入法。外源基因直接导入法主要有电激法、PEG法和显微注射法。近年来发展起来的还有基因枪法、激光徽束穿刺法、真空渗入遗传转化法和花粉介导法等。随着转基因安全性评估的逐步完善,转基因育种将在农业生产中发挥越来越重要的作用。     

不同品系油菜花粉生活力测定方法比较

[目的]采用5种方法对不同品系的油菜花粉生活力进行测定,以找出油菜花粉生活力的最佳测定方法。[方法]5种花粉生活力测定方法分别为蔗糖萌发测定法、醋酸洋红染色法、氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法、碘—碘化钾染色法和红墨水染色法。[结果]TTC染色法和红墨水染色法测定值偏高,碘-碘化钾染色法测定结果偏低;蔗糖萌发测定法和醋酸洋红染色法测定结果比较接近,是测定油菜花粉生活力的最佳方法。[结论]可将蔗糖萌发测定法和醋酸洋红染色法结合起来,先通过醋酸洋红染色法掌握花粉的基本存活情况,之后进一步用蔗糖萌发测定法测定其花粉的萌发能力,这有利于正确地反映花粉生活力。     

作物蒸发蒸腾量计算方法研究与展望

详细介绍了作物蒸发蒸腾量计算的常规方法如水文学方法、微气象学法、植物生理学法和新兴方法如遥感法、BP神经网络法和小波变换分析方法。同时,介绍了各种方法的基本原理、计算方法和各自适用条件。最后,简要分析了传统方法存在的问题,并对一些新方法做出展望。     

不同方法提取吴茱萸叶片基因组DNA和RNA的比较

分别研究对比了3种不同方法提取吴茱萸叶片基因组DNA和RNA的质量,以确定适合吴茱萸叶片基因组DNA和RNA的提取方法。采用紫外分光光度法和普通电泳检测法比较了常规CTAB法、SDS法和改良CTAB法提取吴茱萸叶片基因组DNA的效果;采用紫外分光光度法和非变性电泳检测法比较了酚-SDS法、Trizol法和改良异硫氰酸胍法提取吴茱萸叶片RNA的效果。结果表明,分别采用不同方法提取的吴茱萸叶片基因组DNA和RNA的质量差异较大。常规CTAB法和SDS法无法提取出高质量的吴茱萸叶片基因组DNA,而改良CTAB法提取效果较好;酚-SDS法和Trizol法不适合高质量吴茱萸叶片RNA的提取,而改良异硫氰酸胍法的提取效果良好。     

团花树韧皮部总RNA提取方法的比较研究

[目的]为了从团花树韧皮部中获取高质量的总RNA。[方法]研究采用冷酚法、一步提取法、改进CTAB法、杨树提取法、RNAplant Reagent法5种方法从团花树韧皮部组织中提取总RNA,并利用电泳拍照、测OD值和RT-PCR 3种方法对提取的RNA的质量进行检测。[结果]由冷酚法、一步提取法、改进CTAB法3种方法提取的RNA纯度较低,存在降解和弥散现象,或有DNA和蛋白质的污染,得到的RNA的量较少;而用杨树提取法和RNAplant Reagent法提取的RNA很少有降解,28SrRNA和18SrRNA条带很清晰,得到的RNA虽然有DNA的污染,但是经过DNaseⅠ处理后,OD260/OD280的值在1.8～2.0。[结论]杨树提取法和RNAplant Reagent法得到的RNA可以满足RT-PCR反应和RACE试验的要求,为成功克隆团花树相关基因奠定了基础。     

青阳参花粉活力测定方法比较

[目的]提高青阳参的坐果率。[方法]用解剖针小心将花粉块取下,并在解剖镜下将花粉块的膜剥开使其花粉粒散开置于载玻片上,用碘-碘化钾染色法(I2-KI)、氯化三苯四氮唑(TTC)染色法、醋酸洋红染色法和荧光素二醋酸酯(FDA)法对花粉生活力进行测定;花粉离体萌发法以整个花粉块为单位进行离体培养。[结果]:碘-碘化钾染色法(I2-KI)、氯化三苯四氮唑(TTC)染色法、醋酸洋红染色法、荧光素二醋酸酯(FDA)法的染色率均低于30.0%,而花粉离体萌发法测定的萌发率高达97.6%。[结论]花粉离体萌发法能对青阳参的花粉生活力进行有效的测定。     

连接方法对重组效率影响的比较研究

[目的]为探索一种适于连接PCR产物和不同粘端的新方法。[方法]分别采用冻融法、割胶法、试剂盒法和牙签法连接PCR产物与质粒DNA以及酶切产物与质粒DNA,比较不同连接方法对重组效率的影响。[结果]采用冻融法和割胶法连接PCR产物与pMD18-T,其连接效率分别为94.00%和93.00%,略高于试剂盒法和牙签法。采用冻融法和割胶法连接酶切产物的重组效率分别为86.67%和88.00%,略高于试剂盒法和牙签法。牙签法简化了连接前DNA相关操作,具有较高的连接效率,完全能够满足普通连接反应,特别是粘端连接反应要求。[结论]割胶法具有很高的重组效率和转化效率,可以满足普通连接反应、文库构建对连接效率和转化效率的要求,具有一定的应用前景。     

4种抗稻瘟病抗生素筛选方法的比较

[目的]确定一种快速、准确、高效的抗稻瘟病抗生素筛选方法。[方法]采用平板拮抗法、离体叶段法、试管育苗法和盆栽法4种筛选方法,对205株放线菌次级代谢产物抗稻瘟病菌活性进行筛选并比较四者的相关性。[结果]利用平板拮抗法筛选出32株放线菌发酵粗提物具有较好的抑菌效果,抑菌圈直径在2 cm以上;利用离体叶段法、试管育苗法和盆栽法分别筛选出262、2、24株放线菌粗提物,抗病指数均在0.9以上。试管育苗法、离体叶段法与盆栽法的相关性都极显著。[结论]先用试管育苗法进行初筛,再用盆栽法进行复筛,是抗稻瘟病抗生素较为合理的筛选方案。     

不同预处理方法测定花生粕及其蛋白中铁、钙、钾元素的比较研究

试验采用常规灰化法、非完全消化法分别对花生粕及其蛋白进行预处理,用火焰原子吸收法测定其中的铁、钙、钾元素的含量。结果表明,两种方法测得的铁、钙含量接近,而非完全消化法测得的钾含量稍高;非完全消化法的精密度和回收率都略高于传统灰化法。由此可知,不同预处理方法虽对结果无明显的影响,但从耗时、精密度、回收率等综合考虑,非完全消化法更具优势,可用于测定多种元素的含量。     

木香基因组DNA的提取方法

以木香作为实验材料,利用简单提取法、改良CTAB法、改良SDS法、改良CTAB-SDS法和高盐低pH值法对木香基因组DNA进行提取,并对其基因组DNA的纯度和含量进行测定。结果表明:利用以上5种方法提取的木香基因组DNA,在纯度和含量上以改良CTAB法效果最好,其它依次是改良SDS法、简单法、高盐低pH法和改良CTAB-SDS法。     

生豆浆基因组DNA不同提取方法的比较研究

[目的]探讨适宜生豆浆的基因组DNA提取方法。[方法]以市售豆浆为材料,分别采用热解法、异丙醇沉淀法、CTAB法、SDS法、高盐低pH和异硫氰酸胍法以及它们的改良方法提取基因组DNA,并比较了以上方法的提取效果。[结果]除异丙醇沉淀法外,其他方法提取的基因组DNA均可满足PCR检测要求。同时,综合考虑基因组DNA的纯度和浓度,生豆浆基因组DNA提取方法的优劣依次为：改进高盐低pH法、高盐低pH法、改进CTAB法、改进异丙醇沉淀法、异硫氰酸胍法和改进热解法。[结论]这几种生豆粉基因组DNA提取方法均具有操作简单、耗时短、利于快速检测的优点。