酿酒葡萄原生质体再生植株

将酿酒葡萄品种诗南,梅郁的花丝接种在含６ＢＡ２．０ｍｇ．１＾－１,２,４－Ｄ０．５ｍｇ．１＾－１的Ｂ５诱导培养荐,诱导产生胚性愈伤组织。胚性愈伤组织经液体悬浮培养形含大量胚性细胞团的悬浮培养物。     

山杏原生质体培养再生植株

对影响山杏原生质体分离和培养的因素进行了系统研究。以悬浮培养物为分离材料,在ＣＰＷ＋１．５％ＣｅｌｕｌａｓｅＯｎｚｕｋａＲ－１０＋０．５％ＭａｃｅｒｏｚｙｍｅＲ－１０＋０．５％Ｈｅｍｉｃｅｌｕｌａｓｅ＋０．６ｍｏｌ／Ｌ甘露醇＋１％ＰＶＰ的酶解液中酶解１０ｈ,原生质体产量和活力分别达到８×１０６个／ｇＦＷ和９５％。以ＫＭ８Ｐ为基本培养基,在培养初期加２,４－Ｄ１．０、ＢＡ０．２５ｍｇ／Ｌ,培养１０ｄ和３０ｄ后分别将ＢＡ调至０．５和１．０ｍｇ／Ｌ,以０．５５ｍｏｌ／Ｌ山梨醇调节渗透压,培养过程中逐步降压,在０．５×１０５个／ｍＬ的植板密度下液体浅层培养６０ｄ后形成了微愈伤组织。将微愈伤组织转至固体培养基上继代培养,在分化培养基上分化出不定芽,在生根培养基上生根形成完整植株。     

酿酒葡萄原生质体再生植株

将酿酒葡萄品种白诗南、梅郁的花丝接种在含６ＢＡ２．０ｍｇ·１－１、２,４－Ｄ０．５ｍｇ·１－１的Ｂ５诱导培养基上,诱导产生胚性愈伤组织。胚性愈伤组织经液体悬浮培养形成含大量胚性细胞团的悬浮培养物。用Ｃｅｌｌｕｌａｓｅ　　Ｒｓ２％、Ｐｅｃｔｏｌｙａｓｅ　Ｙ２３０．３％,５ｍｍｏｌ·１－１ＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ、０．６ｍｏｌ·１－１甘露醇、０．３％葡聚糖硫酸钾、ｐＨ５．６～５．８的酶混合液从胚性细胞团分离得到原生质体。原生质体培养到第５天出现第一次分裂,４０ｄ形成上百个细胞的大细胞团,５０ｄ形成０．５～１．０ｍｍ大小的小愈伤组织。这些小愈伤组织在含６ＢＡ０．５ｍｇ·１－１的Ｂ５分化培养基上分化出胚状体进而形成幼苗,在生根培养基上生根形成再生植株。     

甜菜原生质体培养再生植株的研究

以栽培甜菜的未授精胚珠成胚为外植体，在ＭＳ附加ＮＡＡ和ＢＡ的培养基上诱导愈伤组织，选择胚性愈伤组织进行继代培养，从该愈伤组织分离原生质体并以液体浅层法或半固体琼脂糖法培养在一系列培养基上，植板率为０．０１％－１．２％。再生愈伤组织形成后，转入固体培养基（ＭＳＢ）上培养，再转入分化培养基上分化出苗，分化率可达２．５％，由愈伤组织上切下分化苗在生根培养基上很容易诱导生根。     

苹果原生质体分离培养及植株再生

以悬浮培养细胞及叶片作为分离原生质体的起始材料 ,对影响苹果原生质体分离和培养的因素进行了系统研究。优化的原生质体培养基为 :改良MT 维生素C 5mg/L BA0 .5～ 1mg/L 2 ,4 D 0 .2mg/L 蔗糖 0 .6 5mol/L 谷氨酰胺 50 0mg/L CH 10 0mg/L ME50 0mg/L ;以葡萄糖代替蔗糖作渗透压调节物质效果好 ,且在培养过程中不需降压 ;适宜的低密度培养 (0 .5× 10 5/mL)可减少褐变。悬浮系原生质体培养 5～ 6d出现第 1次细胞分裂 ,15～ 2 0d形成多细胞团 ,4 0～ 50d形成肉眼可见的小愈伤组织。经培养诱导出不定芽 ,并进一步诱导生根长成完整植株。获得了平邑甜茶、M2 6 、嘎啦 3种基因型的原生质体再生植株。     

柑桔原生质体融合再生出叶肉亲本类型植株

粗柠檬(Citrus jambhiri Lush)叶肉原生质体与哈姆林甜橙(C.sinensis Osbeck)悬浮细胞系原生质经聚乙二醇(PEG)诱导融合、再生的植株中,除体细胞杂种外,发现两棵为二倍体,与其亲本一样,2n=2x=18。这两棵植株叶片形态似粗柠檬。GOT、SOD及POX 3种同工酶分析结果显示,其酶带与粗柠檬基本相同,但个别带纹有差异。本文就这类植株的来源问题作了讨论。     

辣椒子叶原生质体培养和植株再生

辣椒子叶原生质体培养和植株再生何晓明１王鸣１王之２（１西北农业大学园艺系，陕西杨陵７１２１００；２陕西师范大学生物系，西安７１００６２）关键词辣椒；子叶；原生质体培养；植株再生ＰｒｏｔｏｐｌａｓｔＣｕｌｔｕｒｅａｎｄＰｌａｎｔＲｅｇｅｎｅｒａ...     

‘过山香’香蕉原生质体培养及植株再生

 以'过山香'香蕉的胚性悬浮细胞（Embryogenic cell suspensions,ECS）为起始材料分离原生质体,酶解液的组成为：3.5%纤维素酶R-10、1%离析酶R-10、0.15%果胶酶Y-23、204 mmol/L KCl、67 mmol/L CaCl2和0.41 mol/L甘露醇,原生质体产量为3.1×107个/mL PCV ECS （PCV：packed cell volume,细胞密实体积）。分别以培养基‘A’和‘B’为培养成分在液体浅层培养和看护培养两种培养系统中进行原生质体培养。结果表明：在液体浅层培养系统中,采用培养基‘B’比采用培养基‘A’效果好,原生质体的细胞分裂频率和细胞团形成频率分别约是采用培养基‘A'的3倍和10倍;所获得的培养物为只能增殖而不能进一步分化的非胚性细胞团。在看护培养系统中,采用培养基‘A’与采用培养基‘B’时,细胞分裂频率和细胞团形成频率没有显著地差异;所获得的细胞团具有典型的胚性细胞特征。将从看护培养中获得的细胞团转移到体胚诱导培养基上,培养45 d后,从105个原生质体获得1550个体胚。继续在体胚诱导培养基上培养30 d,7.8%的体胚能萌发。萌发的体胚在MS+0.1%活性炭的培养基中发育成健壮植株,移栽后成活良好。     

多花蔷薇胚性细胞悬浮系原生质体分离及再生植株

利用多花蔷薇‘无刺3号’假珠芽诱导的胚性愈伤细胞悬浮系分离得到原生质体,并培养获得再生植株。酶种类和浓度, 酶解时间及悬浮细胞继代时间对原生质体分离有重要影响,最佳酶液组成是2.0%纤维素酶,0.5%离析酶,5.0 mmol·L^-1 MES, 0.5 mol·L^-1甘露醇,0.5% CaCl₂·2H₂O。采用继代3 d的悬浮细胞系,酶解10 h,原生质体产量达到26.67×10⁶g^-1,原生质体活力为92.21%。采用液体浅层培养,肌醇比蔗糖更有利于纯化后的原生质体分裂和生长。愈伤组织形成增殖培养基为1/2MS + 2,4-D 1.0 mg·L^-1+ EBR 0.2 mg·L^-1 + 10 g·L^-1 Ficoll + 500 mg·L^-1谷氨酰胺 + 20 mg·L^-1甘氨酸 + 20 mg·L^-1天冬氨酸,分化培养基为1/2MS + 10 mg·L^-1 TDZ + 500 mg·L^-1谷氨酰胺+ 20 mg·L^-1甘氨酸+ 20 mg·L^-1天冬氨酸,后转入1/2MS培养基上获得完整植株。     

鸡鮙菌和粗柄鸡菌的原生质体制备与再生研究

在适宜培养条件下,振荡培养4～5d的鸡纵菌(Termitomyces albuminosus)和粗柄鸡■菌(T.robustus)幼嫩菌丝,经过滤洗涤收集,以0.6mol/L KCl为渗透压稳定剂,用1％纤维素酶加0.5％蜗牛酶的混合酶液处理,于28℃酶解3～4h,可获大量原生质体,产量达2.82×10~6～3.24×10~6/mL。但所形成的原生质体再生能力较差,再生率仅0.6％～1.2％。本文还详细研究了菌龄、酶系统、酶解温度和时间等多种因素对这两种鸡纵菌原生质体形成和再生的影响。     

‘翠秀’黄瓜子叶原生质体的高效培养及植株再生

 分离纯化的黄瓜子叶原生质体，以5.5×10～5.5×10⁵个/mL的不同密度培养于mKMSp液体培养基中，均获得不同程度的细胞分裂。当培养密度超过1.0×10³个/mL时，原生质体可持续分裂至愈伤组织形成，最高植板率为54%。原生质体来源的愈伤组织经诱导培养产生大量体胚并再生成植株。Ca²⁺ 浓度对黄瓜原生质体的稳定和细胞分裂有重要影响。     

利用枣离体叶片直接再生完整植株

以冬枣组培苗叶片为材料进行离体再生培养, 通过对再生条件的系统研究, 实现了离体叶片直接再生不定芽并获得完整植株。试验结果表明: 麦芽糖为离体叶片直接再生的适宜碳源; AgNO3可显著提高叶片不定芽再生率和出芽数, 在TDZ 1.0 mg·L - 1 +AgNO3 1.0 mg·L - 1的条件下, 不定芽直接再生率高达97.3% , 出芽数达14.4个。但麦芽糖不适宜继续作为不定芽伸长培养的碳源, 再生的不定芽需在MS+ 蔗糖40 g·L - 1 + 琼脂4 g·L - 1 +BA 1.0 mg·L - 1 + IBA 0.5 mg·L - 1的培养基上进行增殖, 增殖系数为3.2。在IBA1.0 mg·L - 1条件下, 生根率达87.3%。     

现代月季(Rosa hybrida)叶片植株再生体系的建立

 本试验对冰山、金秀娃、火球等24个现代月季(Rosa hybrida)品种再生体系进行了研究，结果表明：部分品种可从叶柄砧处直接再生出小苗；基因型、植物生长调节剂组合、暗培养时间及叶片的幼嫩程度对现代月季叶片的再生影响很大，暗培养和幼叶均有利于再生。24个现代月季品种中l2个品种再生出了不定芽；现代月季品种冰山幼叶暗培养30 d后的再生率可从无暗培养的15．6％提高到45．6％ ；冰山顶生3片叶、中部叶片及基部叶片的再生率分别为46．5％ 、12．9％ 和0。适宜现代月季叶片不定芽再生的培养基为Ms+6一BA 6．0 mg·L +ZT 6．0 mg·L +IBA 0．4 mg·L～；芽伸长培养基为MS+6一BA 2．0mg·L +IBA 0．1 mg·L～；生根培养基为l／2 MS+NAA 0．2 mg·L +0．1％活性炭。     

苹果组织培养再生技术研究进展

苹果组织培养再生技术已取得了较大的进展。从器官、组织、原生质体及遗传转化植株的获得等方面综述了有关方面的研究进展,其中着重介绍了不同水平上植株再生研究的技术方法。     

白姜花胚性愈伤组织的诱导与植株再生体系的建立

将白姜花（Hedychium coronarium）未成熟花丝接种在MS + 4 mg ? L^-1 2,4-D + 4 mg ? L^-1 NAA + 1 mg ? L^-1 6-BA的培养基上,经过180 d的培养,诱导出3种愈伤组织：Ⅰ,浅黄色松散易碎;Ⅱ,白色疏松半透明水渍状;Ⅲ,黄色致密颗粒状。对愈伤组织继代培养基中的2,4-D、NAA和6-BA浓度进行优化,结果表明培养基中含有1 mg ? L^-1 2,4-D、0.25 mg ? L^-1 NAA、0.25 mg ? L^-1 6-BA时可获得胚性状态良好的愈伤组织。胚性愈伤组织在MS无机盐 + 0.25 mg ? L^-1 NAA + 0.5 mg ? L^-1 TDZ + 维生素B₅ + 100 mg ? L^-1谷氨酰胺 + 230 mg ? L^-1脯氨酸 + 100 mg ? L^-1麦芽提取物 + 45 g ? L^-1蔗糖的体胚诱导培养基中培养20 d后,转移到MS基本培养基上培养30 d,1 g胚性愈伤组织可获得50 ~ 60个体胚。成熟体胚在MS + 0.2 mg ? L^-1 IAA + 0. 5 mg ? L^-1 6-BA的萌发培养基上培养20 d时,体胚萌发率为85%。萌发的体胚转移到1/2 MS + 1 g ? L^-1活性炭的成苗培养基中可发育成正常植株,植株室外栽培成活率达90%。对100株再生植株的染色体数进行分析,发现3株三倍体（2n = 3x = 51）、6株四倍体（2n = 4x = 68）和2株六倍体（2n = 6x = 102）。