茉莉花粗酶液酶解β-D-葡萄糖苷活性研究

以pNPG为底物,测定茉莉花中具有β-D-葡萄糖苷酶活性的粗酶液活性.最适反应条件为总反应体积1 mL,反应时间20 min,底物pNPG体积200 μL,浓度50 mmol·L-1,最适pH值6.0,最适反应温度50℃;并以此条件,研究茉莉花开放过程中粗酶液酶解β-D-葡葡糖苷的活性变化,结果表明该酶液随着茉莉花的开放,酶活性逐渐增高,直至萎蔫失水后,活性才降低.     

谷氨酰胺合成酶催化合成茶氨酸条件的优化

在不同诱导条件下,对谷氨酰胺合成酶催化合成茶氨酸体系进行优化,确定最适诱导表达条件,为微生物发酵合成茶氨酸提供技术依据.研究结果表明:基因工程菌最佳培养温度为30 ℃,最佳诱导剂异丙基硫代-β-D半乳糖苷浓度为0.1 mmol·L-1,最佳诱导温度为28 ℃.合成茶氨酸的最适pH值为9.5,适合的缓冲液为100 mmol·L-1咪唑;反应体系中咪唑缓冲液优于磷酸钾缓冲液;低浓度L-谷氨酸钠、高浓度盐酸乙胺和高浓度三磷酸腺苷对茶氨酸的合成均有一定的促进作用,可以提高茶氨酸的生成量.     

石榴果皮中多酚氧化酶测定最佳试验条件的确定

以陕西天红蛋石榴品种为试材,对石榴果皮中的多酚氧化酶(PPO)活性测定的最佳试验条件进行了初步研究,确定了其催化邻苯二酚氧化后产物的最高吸光度值,并分别研究了底物浓度、pH值、温度、反应后放置时间以及酶抑制剂浓度等条件对PPO活性的影响。结果表明:以邻苯二酚为底物时,底物浓度宜大于20mmol/L,其最适波长为420nm,最适pH值为6.8,最适温度为50℃,反应时间不宜超过20min,反应完成后在20min后测定PPO的活性最为稳定。抑制剂NaHSO4的有效抑制浓度为0.8mmol/L。     

星豹蛛乙酰胆碱酯酶活性测定条件的优化

为了进一步研究星豹蛛乙酰胆碱酯酶的生物活性,利用正交试验研究了反应体系的pH值、反应时间、酶浓度、反应温度和底物浓度5个因素对测定星豹蛛(Pardosa astrigera L.Koch)头胸部乙酰胆碱酯酶活性的影响,以优化酶活性测定的最适条件。对试验结果进行极差和方差分析,确定了星豹蛛头胸部乙酰胆碱酯酶的最适反应条件是:酶浓度为12 g.L-1;底物浓度为0.6 mmol.L-1;反应体系pH值为7.0;反应温度为30℃;反应时间为5 min。     

桃果实酰基辅酶A氧化酶活性检测方法的建立

采用可见分光光度法,以棕榈酰辅酶A为底物,研究了桃果实中酰基辅酶A氧化酶(ACOX)的活性检测方法。结果表明,桃果实中ACOX活性检测体系的参数为:150 mmol·L-1 Tris-HCl缓冲液,pH值7.5,温度30℃,吸收波长500 nm。     

黄皮多酚氧化酶活性的影响因素分析

研究了pH值、温度、底物浓度及抑制剂等因素时黄皮果实中多酚氧化酶(PPO)活性的影响.结果表明,黄皮PPO具有同工酶,PPO的最佳底物浓度为0.14mol·L-1,最适pH值为7.0,最适温度为40℃,当温度高于60℃时,PPO的活性明显降低,亚硫酸钠、抗坏血酸、柠檬酸、L-半胱氨酸等4种抑制剂对黄皮PPO的活性表现出不同的抑制作用,抑制效果为亚硫酸钠抗坏血酸柠檬酸L-半胱氨酸,其中,抗坏血酸随着浓度的增加抑制效果越好,抑制率不断升高.     

菜花多酚氧化酶的酶学特性研究

以菜花为原料制备粗酶液,以邻苯二酚为底物,采用分光光度法在420 nm波长下研究温度、pH值、底物浓度对菜花多酚氧化酶活性的影响,建立相应的酶促褐变反应动力学方程,并探讨了氯化镁、十二烷基硫酸钠、亚硫酸氢钠、L-半胱氨酸、抗坏血酸等对酶活性的影响.结果表明,菜花多酚氧化酶的最适pH值为7.0,最适温度为50℃,50℃加热10 min仍保留61％的活性.其米氏常数和最大反应速率分别是0.056 23 mol·L-1和8.650 5U·min-1.氯化镁、十二烷基硫酸钠可增强菜花PPO活性,亚硫酸氢钠、L-半胱氨酸、抗坏血酸可抑制其活性.     

滁菊多酚氧化酶的三相分离及其酶学特性分析

滁菊在采收后极易因酶促褐变导致其品质下降,故以滁菊鲜花为原材料,针对影响其品质劣变的多酚氧化酶展开研究,明确其三相分离纯化工艺以及酶学特性.考察了硫酸铵浓度、pH值、提取液与叔丁醇体积比、提取时间等工艺参数对滁菊多酚氧化酶纯化效果的影响,结果表明三相分离纯化滁菊多酚氧化酶的较佳工艺参数为:硫酸铵质量浓度0.4 g·mL-1,pH值6.0,粗提液与叔丁醇的体积比为1∶1.5;按照此工艺条件对纯化后滁菊中多酚氧化酶的酶学特性进行了分析,滁菊多酚氧化酶最适pH值为6.50,最适反应温度为30℃;以邻苯二酚为滁菊多酚氧化酶反应底物时,底物最适浓度为0.35 mol·L-1,酶促反应米氏常数为0.1749 mol·L-1.     

富士苹果多酚氧化酶的提取及特性的研究

以富士苹果为试验材料,邻苯二酚为底物,对多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）的提取条件及特性进行了研究。结果表明,富士苹果PPO的最佳提取条件为pH值5.4的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液（含20g·L^-1的PVPP和2.5 g·L^-1Triton X-100）、液料比1.5 mL.g-1;PPO的最适温度为30℃,最适pH值为4.0。单独使用对PPO活性抑制能力最强的是L-半胱氨酸,其次是抗坏血酸,草酸和柠檬酸抑制能力较弱。复合抑制剂的最优组合为0.900 g·L^-1抗坏血酸、5.000 g·L^-1柠檬酸、3.750 g·L^-1草酸、1.000 g·L^-1L-半胱氨酸,对PPO的抑制率达97.83%。     

舞毒蛾羧酸酯酶最佳反应体系的确立

为了确定舞毒蛾(Lymantria dispar)羧酸酯酶(Car E)活性的最佳反应体系,运用正交试验测定了反应体系中酶浓度、底物浓度、p H值、反应温度和反应时间5个因素对Car E活性的影响。极差分析和方差分析显示,舞毒蛾Car E的最优反应体系为酶浓度0.2头·m L-1,底物浓度0.2 mmol·L-1,p H=7.5,反应温度45℃,反应时间10 min。     

植物蔗糖合成酶的研究现状

蔗糖合成酶(SuSy)是植物蔗糖代谢的关键酶,在植物生长发育过程中起重要作用。本文综述了SuSy的生物学功能、家族基因的克隆和表达调控机理以及SuSy的转基因植株的表现,进一步对SuSy的研究做出设想。     

山药SuSy基因全长cDNA序列的结构、进化和表达

 【目的】阐明山药蔗糖合成酶（SuSy,EC 2.4.1.13）基因家族的成员及其功能。【方法】利用RT-PCR和RACE技术从大薯（Dioscorea alata ）地下块茎中分离到1个SuSy基因（DaSuSy1）全长cDNA序列,并用DANSTAR和Clastal W等软件分析该序列的结构特征和分子进化,采用RT-PCR和Northern杂交对该基因的时空表达进行分析。【结果】DaSuSy1全长cDNA序列大小为2 673 bp,其中最大开放阅读框（ORF）、5′端和3′端的非翻译区分别含有2 445 bp、7 bp和221 bp,而且3′端的非翻译区含1个24 nt的Poly（A+）尾;最大ORF可编码814个氨基酸,分子量为92.76 kD,等电点为6.42,含有蔗糖合成酶和葡糖基转移酶两个保守功能域及两个磷酸化位点,即N端的Ser10和C端的SNLDRRET781 RR(Ser774～Thr781)。该基因在全长cDNA序列、编码区cDNA序列及其编码氨基酸序列的水平上与GenBank中所选已知物种SuSy基因相应序列的同源性分别达45.3%～71.3%、45.8%～74.8%和50%～84.7%,与禾本科植物SuSy基因家族中一些成员亲缘关系最近。DaSuSy1在非光合器官中表达,其中地下块茎表达最为强烈,而且从块茎形成初前期开始表达一直增强至盛中期,此后逐渐减弱。【结论】DaSuSy1是山药SuSy基因家族成员,归为单子叶植物SuSy基因的组别,仅在非光合器官中表达编码负责蔗糖-淀粉转化功能的SuSy同工型。     

植物蔗糖合成酶功能与分子生物学研究进展

蔗糖合成酶在植物生长发育过程中有着举足轻重的作用。叶片光合产物向“库”器官运输的主要形态是蔗糖,而蔗糖合成酶是蔗糖进入各种代谢途径所必需的关键酶之一。在此,综述了蔗糖合成酶(SuSy)在高等植物蔗糖代谢中的作用,SuSy基因的克隆、表达调控机理以及SuSy转基因植株的表现;并进一步对蔗糖合成酶的研究作出设想。     

小牛肠碱性磷酸酶活性检测方法的建立

[目的]建立适用于科研用小牛肠碱性磷酸酶活性的检测方法。[方法]通过模拟科研中小牛肠碱性磷酸酶的使用条件及缓冲液,并研究不同底物浓度、反应时间、显色时间、缓冲液pH等对酶活性检测的影响。[结果]使用不同缓冲液对酶活性进行检测,其测量值差异较大。若使用添加硼酸的铁氰化钾溶液,则可以实现颜色的稳定显示。最佳水浴时间为10min,最佳底物浓度为0．04mol／L。随着温度的增加,对低浓度酶活性的影响不大,但对高浓度酶活性的影响逐渐增大。当缓冲液pH为7．O～8．0时,能够较好维持酶活性的稳定性。缓冲液粒子强度对酶活性的影响不大。[结论]成功建立了科研用小牛肠碱性磷酸酶的活性检测方法。     

不同pH磷酸缓冲液对冬小麦花后干旱胁迫的减缓效应研究

为进一步明确pH缓冲液对冬小麦抗逆性的影响效应与机制,在温室盆栽环境下,于花后设置正常水分和干旱胁迫两种条件,考察了pH 5.5和pH 7.5磷酸缓冲液处理对干旱胁迫下旗叶的相对电导率、光合性状、抗氧化酶活性等指标及产量的影响。结果表明:干旱胁迫显著增加了旗叶相对电导率,但pH 5.5和pH 7.5缓冲液处理下旗叶相对电导率增加幅度较小,其质膜相对较稳定;2种缓冲液处理均减轻了干旱对旗叶光合性能的影响,表现在处理后叶片光合速率、叶绿素荧光参数(Fv/Fm)、SPAD值均显著高于喷水对照,特别是pH 5.5缓冲液处理效应更为明显;干旱胁迫诱导增强了旗叶CAT、POD和SOD等抗氧化酶活性,两种缓冲液处理进一步提高了CAT和POD的活性,其中pH 5.5缓冲液处理对CAT、pH 7.5缓冲液处理对POD相对影响效应更明显;干旱胁迫显著降低了穗粒重,但两种缓冲液处理的穗粒重降低幅度较小,其产量均显著高于喷水对照。综合研究认为,pH缓冲液处理能稳定细胞膜,增强旗叶抗氧化能力,能在一定程度上维持干旱胁迫下叶片的光合能力,减轻干旱胁迫对产量的不利影响。     

Effects of Variation in Activities of Starch-Sugar Metabolic Enzymes on Reducing Sugar Accumulation and Processing Quality of Potato Tubers

The experiment was designed,via storing potato tubers of cv.E-Potatol and E-Potato3 in different temperatures,to explore the variation patterns of reducing sugar(RS)and total sugar(TS)contents and enzyme activities that are involved in the pathway of starch-sugar metabolism aiming at identifying the main factors that influence the chip color.The results showed that low temperature in storage was a main factor that accelerated the accumulation of RS of the stored tubers and a very significant linear relationship existed between RS content and chip color index(CCI)of the tubers.Further analysis elucidated that when tubers stored at 4℃,the activities of ADP glucose pyrophosphorylase(AGPase),UDP glucose pyrophosphorylase(UGPase)and sucrose synthase(SuSy)were negatively exponential to the RS content significantly while that of acid invertase and alkaline invertase was significantly linear to RS content.It suggested that these enzymes could play main roles in the cold sweetening of potato tubers through regulating starch-sugar metabolism.     

用茚三酮显色反应测定烟草中氨基酸含量

应用茚三酮与氨基酸的显色反应,采用分光光度法测定烟草中氨基酸的含量。分析并确定了试验条件：磷酸盐缓冲溶液的pH值6．70。用量为1．0ml;最大吸收波长为570nm;2％茚三酮溶液的用量为1．5m1。试验考察了显色反应时间及稳定性。用未显色的样液作参比,消除了样液基体中的色素和杂质对检测结果的影响,提高了测定结果的准确度。此方法操作简便、快捷,灵敏度高,检测成本低,特别适用于烟草研究申数量少、批次多的检测。     

响应面法优化番茄早疫病拮抗菌WL07发酵条件

应用响应面法对番茄早疫病拮抗菌WL07的培养基组成及培养条件进行优化。通过Plackett-Burman设计试验,从蔗糖、碳酸钙、硫酸铵、硫酸亚铁、酵母膏、装液量、初始pH等影响因素中筛选影响拮抗菌WL07发酵的显著因素。Plackett-Bur-man设计试验结果表明影响拮抗菌WL07发酵的显著因素分别为初始pH和蔗...     

A Novel and Reliable Spectrophotometric Method for Determination of Lactoperoxidase Activity in Raw Milk

With 3, 3'5, 5'-tetramethylbenzidine(TMB) as the detection substrate, a reliable and highly selective method was established and optimized for the determination of Lactoperoxidase(LP) activity in raw milk. The method was based on the enzymatic reaction principle, where hydrogen peroxide oxidated TMB in the presence of LP. The optimized conditions of this assay system were obtained, consisting of 20 mmol · L~(-1) TMB solution, 0.6 mmol · L~(-1) hydrogen peroxide and 0.1 mol · L~(-1) Citric Acid(CA)/0.2 mol · L~(-1) disodium hydrogen phosphate(Na P) buffer(pH 4.8). TMB detection method was applied to the analysis of LP in milk samples with a practical working concentration range from 2 to 14 mg · L~(-1). The intra-and inter-batch variation coefficients were all below 5%, indicating a good repeatability. Confirmation test between TMB method and 2, 2-azinobi(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonate) diammonium salt(ABTS) method was carried out, and the results of TMB assay were in accordance with that of ABTS method.     

柱前衍生HPLC法检测罗非鱼肌肉中的硫酸新霉素

硫酸新霉素本身没有紫外吸收,必须通过柱前衍生来进行荧光榆测.建立合适的衍生方法是提高检测灵敏度的关键,通过对硫酸新霉素衍生方法的优化,确定衍生化学试剂氯甲酸戊甲酯乙腈溶液的浓度为8 mmol/L,存pH值为7.8的硼酸缓冲液中衍生反应15 min,10 h内检测可得到理想的结果.对硫酸新霉素检测方法优化后,该药物在罗非鱼肌肉中检测限可达到0.02mg/kg.定量限为0.05 mg/kg,在0.05～5 mg/kg浓度范围内有良好的线性关系(r2=0.9956),在肌肉中分别按照0.10、0.50、1.00 mg/kg的标准添加硫酸新霉素,回收率分别为76.43±1.46%、79.47±1.71%、86.82±1.13%.