转基因马铃薯植株的抗性筛选及其PCR鉴定

近年来,转基因技术研究发展很快,筛选、鉴定转基因植株是基因转移的必须环节。本实验利用农杆菌(含有pARTGF植物表达载体)介导法将外源基因转入马铃薯植株,经过含有卡那霉素培养基的抗性筛选,初步筛选出转基因马铃薯植株A、B、C分别为5株、7株、8株;将筛选的转基因马铃薯植株利用PCR进行检测,经分析,其结果初步表明,已成功将目的基因转入马铃薯基因组中,并获得阳性植株分别为2株、4株、5株。     

外源基因导入对马铃薯农艺性状的影响

为了探索外源基因导入对马铃薯生长发育的影响,以马铃薯品种布尔班克的转GO基因植株为材料,研究外源基因导入与马铃薯农艺性状的关系。结果表明:布尔班克的转GO基因马铃薯进行小薯盆栽有显著提早出苗的趋向,平均提早约4 d,且中、后期的植株生长发育(株高、叶片数)及平均单薯重显著优于对照,单株结薯数则显著低于对照。     

不同EBR处理对低氧胁迫下马铃薯植株生长和光合作用的影响

以马铃薯品种Favorita为试验材料,研究了外源喷施不同浓度EBR(2,4-表油菜素内酯)处理对低氧胁迫下马铃薯植株生长发育的影响.结果表明,不同浓度EBR处理对低氧胁迫下马铃薯植株生长均有不同程度的促进作用.在处理的初期,高浓度EBR处理对低氧胁迫下马铃薯植株的株高和叶面积促进作用明显,而在处理的后期,中低浓度EBR处理效果明显;0.050和0.100 mg/L EBR处理对低氧胁迫下马铃薯植株的茎粗和匍匐茎数量促进作用明显;对于低氧胁迫下马铃薯光合作用和根系长度促进作用最明显的处理为0.050 mg/L EBR;不同浓度EBR处理对低氧胁迫下马铃薯植株的分枝数作用不明显.因此,对于促进低氧胁迫下马铃薯植株生长发育的EBR最适浓度为0.050 mg/L.     

不同通气方式对马铃薯根际通气状况和生长的影响

采用槽栽方法,以根际全基质栽培为对照(CK),研究了根际自然扩散通气处理(T1)、根际管通气处理(T2)和根际两端通气处理(T3)对大田马铃薯植株生长的影响,并在全生育期测定了植株根际CO2与O2浓度变化。结果表明,在整个生育期,块茎膨大期马铃薯植株根际CO2浓度最高,变化幅度最大;在不同处理之间,根际CO2浓度CK>T1处理>T2处理>T3处理。同时,根际O2浓度与CO2浓度变化趋势相反,且变化幅度很小。T2处理和T3处理马铃薯植株各个生育指标比较接近,均大于对照和T1处理,其中T2处理马铃薯植株的株高、茎粗、生物量和块茎产量均与对照达到显著差异水平。说明根际CO2浓度过度富积可能是影响马铃薯生长的重要因素,增加根际通气性,降低根际CO2浓度,对大田马铃薯植株生长和产量提高有促进作用。     

不同种薯药剂处理对马铃薯晚疫病防治效果和产量的影响

研究不同药剂种类及浓度对马铃薯晚疫病的防治效果和产量的影响,为马铃薯晚疫病防治适宜药剂种类及浓度的选择与应用提供理论依据。本研究以克新1号品种为供试材料,分析了克露、安克以及甲霜灵锰锌3种杀菌剂在350倍和500倍2种浓度水平下马铃薯晚疫病的防治效果、植株发病率、病情指数、产量等指标,结果表明:50%安克可湿性粉剂的350倍液种薯处理的植株发病率、发病级数、病情指数、块茎发病率最低,其马铃薯产量最高,防治效果最好。其次为50%安克可湿性粉剂500倍液处理、72%克露可湿性粉剂350倍液处理和72%克露可湿性粉剂500倍液处理;而58%甲霜灵锰锌可湿性粉剂350倍液与500倍液的防治效果均较差。     

马铃薯卷叶病毒外壳蛋白基因克隆转化及其转基因后代的表达

根据GenBank中的马铃薯卷叶病外壳蛋白基因(PLRV-CP)全序列,设计一对特异性引物,以马铃薯卷叶病毒RNA为模板,克隆了马铃薯卷叶病外壳蛋白基因,在pBI121的基础上构建了植物表达载体。利用PLO(Poly-L-Ornithine)将PLRV-CP基因导入到马铃薯加工型品种大西洋的原生质体中,获得了转基因后代。在5株转化后代中扩增出长度为610bp的目标DNA片断,说明导入的外源PLRV-CP基因已经整合到马铃薯基因组中。Southern blot分析结果进一步证明了PCR结果的正确性。RT-PCR结果表明,在3株转化后代叶片中具有阳性表达。马铃薯卷叶病毒接种实验结果表明,转基因植株比对照有明显的马铃薯卷叶病抗性。     

不同肥料对晚熟马铃薯光合特性及产量形成的影响

以晚熟马铃薯品种青薯9号为试材,采用有机与无机相结合的田间培肥方式,研究不同施肥处理对马铃薯生长、光合特性及产量的影响.结果表明,不同培肥方式对植株的株高、叶面积指数、净光合速率、总生物质量、产量等影响较为显著,而对茎粗和叶绿素含量的影响相对较小;青薯9号的产量与植株的株高、净光合速率、气孔导度、胞间CO2浓度、蒸腾速...     

表达 HarpinEa基因的转基因马铃薯的晚疫病抗性分析

 通过根癌农杆菌介导,用Harpin_Ea基因转化马铃薯四倍体栽培种大西洋（Atlantic）,获得107个马铃薯转化株系。经过卡那霉素的抗性鉴定和PCR分子检测,有59株PCR检测成阳性,占所有转化植株的55.14%.实验对部分转基因植株进行室内抗病性评价,从24个PCR阳性株系中筛选到9个株系的抗病性与对照相比有显著差异(P<0.05),其中7株的抗病性与对照相比差异极显著(P<0.001)。结果初步表明Harpin_Ea基因已整合到马铃薯的基因组中并得到表达,提高了植株的晚疫病抗性。     

1株马铃薯内生Bt菌株的鉴定及其对干旱胁迫的缓解作用

【目的】探究马铃薯内生细菌Bt缓解宿主干旱胁迫的生理响应,为内生细菌缓解马铃薯干旱胁迫的机理及抗旱管理提供理论依据。【方法】对1株分离培养自马铃薯叶片的内生细菌Bt,利用形态学和分子测序方法进行种类鉴定,并测定该菌株在低水势下的生存能力及代谢产物活性;采用盆栽试验,利用PEG-6000进行模拟干旱胁迫处理,干旱处理分为正常浇水（CK:PEG-6000浓度为0）、中度干旱胁迫（D1:PEG-6000浓度为20%）和重度干旱胁迫（D2:PEG-6000浓度为25%）,研究接种Bt内生菌株在干旱胁迫下对马铃薯的促生作用和生理响应,并对其进行抗旱性评价。【结果】分子鉴定结果表明,Bt为芽孢杆菌属（Bacillus）苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis）,该菌株具在低水势下生存的能力、产IAA活性和ACC脱氨酶活性,干旱胁迫下接种Bt对马铃薯促生效果明显。与CK相比,马铃薯植株的根长有所增加但不显著（P>0.05,下同）,株高和茎粗在D2处理下较CK分别增加16.7%和16.0%;在D1、D2处理下接种Bt后,植株叶片相对叶绿素含量（SPAD值）、气孔导度较CK分别提高...     

生物炭与干旱对马铃薯初花期生长特性的影响

为生物炭在马铃薯高产栽培中的应用提供理论依据,以鲜食马铃薯品种东农311为材料,采用盆栽法,研究生物炭的施用对初花期马铃薯生长及抗旱性的影响。结果表明:干旱胁迫显著降低植株光合系统相关指标(胞间CO_2浓度除外),降低叶片叶绿素含量和各器官干物质积累量,同时影响植株农艺性状。施用生物炭能提高马铃薯叶片的净光合速率16.81%~28.98%、蒸腾速率9.5%~21.95%和气孔导度28.33%~40.48%,降低胞间CO_2浓度2.28%~4.57%,增强马铃薯初花期叶片的光合积累能力;同时提高马铃薯初花期的叶绿素含量8.57%~37.6%,以及植株的株高、主茎数、茎粗,增大各器官的干物质积累量。     

马铃薯含糖量测定方法比较研究

[目的]探求间接、准确测定马铃薯含糖量的方法、途径和路线,以最大限度的利用马铃薯资源。[方法]采用3条途径、2种水解处理方法测定马铃薯样品中的含糖量,分析比较马铃薯渣酸水解、马铃薯淀粉酸水解、马铃薯淀粉酶解、煮熟的马铃薯酶解和马铃薯直接酸水解5组方案所测定的含糖量,确定最佳测定方案。[结果]经途径Ⅰ测得的含糖量最高,远高于途径Ⅱ和途径Ⅲ的测定值,其中以马铃薯淀粉经酸水解路线测定含糖量最高,达89.70%;最佳处理方案为马铃薯渣和马铃薯淀粉分别经酸水解后,采用DNS试剂法测定含糖量。[结论]通过对马铃薯含糖量的测定,确定途径Ⅰ为最佳方案,此方案具有相当可观的工农业利用价值。     

适宜甘薯花粉生活力检测方法的筛选

不同植物花粉的自身特性不同,导致不同的染色方法只适合某些植物花粉生活力的测定。以能够在河北省石家庄地区自然开花结实的甘薯品种河北351及其不同的自交后代材料为试材,利用目前常用的4种花粉染色法（I-KI染色法、TTC染色法、过氧化物酶染色法和蓝墨水染色法）分别测定甘薯花粉的生活力,以筛选出适宜的甘薯花粉生活力测定方法;并利用该方法,对河北351自交各世代群体中自然开花株系的花粉生活力进行检测,以验证方法的可行性以及检测结果的可靠性。结果表明：适宜甘薯花粉生活力检测方法为TTC染色法,且方法可行、结果可靠。该方法测定甘薯花粉生活力具有操作简便快捷、成本低、适合大批量检测等优点,可为开展甘薯亲和性相关研究奠定基础。     

农杆菌介导的马铃薯块茎 GUS 基因瞬时表达研简

采用根癌农杆菌介导的瞬时表达方法,以马铃薯块茎为主要的研究材料,分别采用浸染法和注射法将外源基因导入马铃薯块茎细胞中,然后进行GUS组织化学染色.试验结果表明,导入马铃薯块茎细胞里的外源基因获得了表达;浸染法的表达区域更加均匀,优于注射法.     

马铃薯主要农艺性状与单株产量的遗传相关及通径系数分析

本试验采用随机区组设计对春薯1号、春薯5号、早大白、尤金等16个主要栽培品种的株高、主茎数、单株结薯数、平均薯块重和单株产量进行了相关与通径分析。结果表明:株高、单株结薯数与单株产量呈极显著正相关,相关系数分别为0.485 1和0.459 4;平均薯块重与单株产量呈显著正相关,相关系数为0.318 0;平均薯块重与单株结薯数呈极显著负相关,相关系数为-0.675 1。     

冲击法检测马铃薯坚实度的试验研究

应用自制的冲击摆对马铃薯的坚实度进行了检测研究.利用3种不同形状的冲击针头(圆柱型、圆锥型和三棱锥型)作为工作部件,采用电测方法对摆锤摆动角度进行检测,并以此来衡量马铃薯的坚实度.试验所得数据经过spss软件分析,分别得出不同针型的描述性统计分析结果,经过柯尔莫哥洛夫检验,方差榆验及利用Scheffe方法进行多重比较.结果表明:利用冲击的试验方法来检测马铃薯的坚实度原理可行,三棱锥型的针头更能真实地反映马铃薯的坚实度,可为其他果蔬产品的坚实度检测提供参考.     

马铃薯亲本的花粉活力研究初报

为了选择马铃薯合适亲本,提高其杂交效率,对14份马铃薯亲本的花粉活力用1%的醋酸洋红染色法进行了检测,结果显示:14份亲本材料中,有8份亲本的花粉活力高于50%,适合做父本;有6份亲本花粉活力低于50%,不宜作父本.     

马铃薯Y病毒衣壳蛋白抗原表位分析及其快速ELISA检测方法的建立

【目的】马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)是影响马铃薯产量和品质的主要病毒之一,目前尚未发现有效的防治药剂,脱毒种薯的应用是预防PVY危害的主要防治措施。建立灵敏度高、特异性强的PVY快速检测方法,为脱毒种薯质量控制提供技术支撑。【方法】将PVY衣壳蛋白(coat protein,CP)分段表达为有重叠部分的小段多肽,以其为抗原通过Western blot分析PVY-CP的抗原表位。以P/N值最大为标准,通过常规双抗夹心ELISA(DAS-ELISA)对识别不同抗原表位的单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)进行配对试验,筛选一组检测效果最优的配对单克隆抗体,并确认捕获抗体和检测抗体。通过方阵滴定法确定捕获抗体及检测抗体的最佳工作浓度,通过控制变量法确定检测抗体与抗原的最佳共同孵育时间。以不同浓度的PVY-CP蛋白为抗原,检验快速DAS-ELISA的灵敏度。以感染不同病毒的马铃薯样品为抗原,检测快速DAS-ELISA的特异性。同时通过快速DAS-ELISA与RT-PCR检测50份田间采集的疑似感染PVY的马铃薯样品,将二者结果相比较检验检测方法的...     

两种快速提取甘薯块根总RNA的方法

甘薯块根富含的次生物质严重干扰了总RNA的提取。本试验采用异硫氰酸胍"一步法"和CTAB法提取甘薯块根总RNA,并对改进前后两种方法提取的总RNA产量和纯度进行了比较。结果表明,提取RNA过程中用氯仿代替液氮研磨样品同样可获得完整性和纯度较好的总RNA;CTAB法提取RNA质量较好,纯度较高,排除了甘薯块根中多糖、多酚以及纤维等次生物质的干扰,提取出高质量的甘薯总RNA。     

马铃薯及土壤中霜脲氰残留量的高效液相色谱快速分析方法

[目的]建立高效液相色谱方法快速测定马铃薯茎叶、块茎及其土壤中霜脲氰残留量的方法。[方法]样品经乙腈提取,NH2固相萃取小柱净化后,以乙腈-水为流动相,使用C18色谱柱,通过Waters 2695高效液相色谱-紫外检测器,在254 nm检测波长下对霜脲氰进行分析检测,面积外标法定量。[结果]在0.1、0.5、2.0 mg/kg 3个不同添加浓度水平下,马铃薯茎叶中平均回收率为78.0%~104.4%,相对标准偏差为2.7%~3.4%;马铃薯块茎中平均回收率为82.9%~94.7%,相对标准偏差为1.1%~2.3%;土壤中平均回收率为81.6%~91.8%,相对标准偏差为3.3%~5.4%。霜脲氰在浓度为0.05~2.00 mg/L时线性关系良好(r=0.999 8),最小检出量为0.06 ng,在马铃薯茎叶、块茎和土壤中的最低检测浓度均为10μg/kg。[结论]该方法简便、快捷、成本低、精密度好、准确率高,适用于马铃薯及其土壤中霜脲氰的大批量分析检测,是一种较为实用的检测方法。     

贵州甘薯地方品种的生长分析

以甘薯品种徐薯18为对照(CK),采用生长分析法,通过田间试验,对贵州6个甘薯地方品种的生长性能进行了分析。结果表明:品种"道真白皮苕"的块根和茎叶鲜重明显高于CK的;品种"道真白皮苕"、"紫云红心薯"的干物质积累量、LAI、RGR及NAR均明显高于CK的。因此在供试的6个甘薯地方品种中,道真白皮苕和紫云红心薯的物质生产性能较优。