应用均匀设计法优化猪苓菌丝体漆酶和蛋白酶的最适产酶条件

以长白山区野生猪苓菌核经组织分离得到的猪苓纯培养菌种为试材,运用均匀设计法对猪苓菌丝体产漆酶和蛋白酶的培养条件进行了优化研究,试验结果表明,猪苓菌丝体最适产漆酶和蛋白酶培养条件为:培养液初始pH值为7、培养温度30℃、培养时间29d;在最适产酶条件下培养猪苓菌丝体,实测得胞外漆酶及蛋白酶的活性分别为0.25、6.13 U/mL.     

侧耳木霉产漆酶酶活力测定和脱色方法

为研究木霉粗酶液胞外分泌物的生物活性,从愈创木酚的用量、反应温度、缓冲液种类、缓冲液pH、缓冲液浓度5个因素,对木霉粗酶液胞外分泌物漆酶的酶活力进行研究;从反应时间、反应温度、缓冲液pH、染料浓度、缓冲液浓度、酶液稀释倍数6个因素对木霉粗酶液的胞外分泌物漆酶对染料的脱色作用进行研究.结果表明:木霉漆酶在反应温度为25℃,琥珀酸缓冲液的pH为4.0,琥珀酸缓冲液浓度为0.045 mol/L,愈创木酚用量为0.04 mol/L时,木霉粗酶液胞外分泌物漆酶酶活力最优;木霉粗酶液的胞外分泌物漆酶其脱色作用在反应温度为30℃,pH为3.5,染料浓度为0.01 g/L,醋酸缓冲液浓度为0.2 mol/L时,木霉粗酶液的胞外分泌物漆酶脱色作用最好.     

盾壳霉几丁质酶和葡聚糖酶酶动力学性质初步研究

盾壳霉几丁质酶和葡聚糖酶酶动力学性质研究表明:几丁质酶和葡聚糖酶的酶促反应,在本试验计量范围内,其反应速度与酶量和底物浓度均呈正相关,但两种酶促反应适宜的温度和pH值有较大差。几丁质酶降解几丁质的最适反应温度为50℃,最适pH值为8.0,葡聚糖酶降解葡聚糖的最适反应温度为60℃,最适pH值为3.0。     

枇杷果肉漆酶酶学特性研究

研究枇杷果肉漆酶（EC 1.10.3.2）的提取及其理化性质,为探讨漆酶在冷藏枇杷果实木质化败坏中的作用机理提供参考。以‘解放钟’枇杷（Eriobotrya japonica Lindl.‘Jiefangzhong’）果实为试材,采用硫酸铵盐析、透析和DEAE-纤维柱层析等提取漆酶（EC 1.10.3.2）研究其理化特性,包括温度、pH、抑制物、金属离子对漆酶活性的影响及其底物特性,测定果实贮藏期间pH变化。结果表明,漆酶的最适温度为45℃,最适pH为4.4,pH为3.2~4.4时酶的稳定性较好。金属离子Cu2+、K+对漆酶有激活作用,而Ag+、Fe2+、Fe3+起抑制作用。EDTA和L-半胱氨酸抑制物对漆酶均有抑制作用,以L-半胱氨酸抑制作用最强。枇杷果肉漆酶以2,2’-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)（简称ABTS）为底物的Km值为0.00512 mol/L。     

枇杷果肉漆酶酶学特性研究

研究枇杷果肉漆酶(EC1.10.3.2)的提取及其理化性质,为探讨漆酶在冷藏枇杷果实木质化败坏中的作用机理提供参考。以‘解放钟’枇杷(Eriobotrya japonica Lind‘l.Jiefangzhong’)果实为试材,采用硫酸铵盐析、透析和DEAE-纤维柱层析等提取漆酶(EC1.10.3.2)研究其理化特性,包括温度、pH、抑制物、金属离子对漆酶活性的影响及其底物特性,测定果实贮藏期间pH变化。结果表明,漆酶的最适温度为45℃,最适pH为4.4,pH为3.2～4.4时酶的稳定性较好。金属离子Cu2+、K+对漆酶有激活作用,而Ag+、Fe2+、Fe3+起抑制作用。EDTA和L-半胱氨酸抑制物对漆酶均有抑制作用,以L-半胱氨酸抑制作用最强。枇杷果肉漆酶以2,2’-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(简称ABTS)为底物的Km值为0.00512mol/L。     

一株深绿木霉产芥子酶酶学性质

从实验室筛选的绿色木霉(Trichederma atroviride)(菌藏号:5609)液体发酵菌丝体中提取芥子酶.探讨将绿色木霉芥子酶用于生物熏蒸的可能性,以提高生物熏蒸防治土壤连作障碍的效果,结果表明:芥子酶的最适反应温度为30℃,且在低温条件下酶的活性较易保持,最适反应pH值为6,最适底物浓度为3.7 mmol/L;低浓度的抗坏血酸对芥子酶有激活作用,高浓度的抗坏血酸反而会抑制酶的活性,添加4 mmol/L的抗坏血酸可使酶活性增加为原来的3.65倍,不同浓度的NaCl溶液对芥子酶活性没有明显的影响.深绿木霉的芥子酶可应用于pH值中性土壤与盐土环境,相对于植物源芥子酶具有更宽的适宜范围.     

蜜蜂球囊菌几种胞外蛋白酶的特性

 【目的】研究由蜜蜂球囊菌引起的真菌性疾病白垩病的侵染机制,以及蜜蜂球囊菌胞外蛋白酶的种类及其特性。【方法】利用人工合成的培养基,在体外诱导蜜蜂球囊菌分泌胞外蛋白酶,用硫酸铵沉淀和透析,获得初酶液,利用相应的底物对酪蛋白酶、偶氮酪蛋白酶、胶原蛋白酶、弹性蛋白酶和胰蛋白酶的活力进行测定。【结果】蜜蜂球囊菌分泌的胞外酶主要有酪蛋白酶、偶氮酪蛋白酶、胶原蛋白酶3种,无弹性蛋白酶和胰蛋白酶。对这3种酶的最适温度、pH值以及热稳定性和酸碱稳定性进行了测定。这3种胞外酶的最适反应温度都在40℃左右,最适pH为7左右,均不耐高温,热稳定性差,在中性的pH环境下比较稳定。【结论】蜜蜂球囊菌可以分泌多种胞外蛋白酶,它们的最适pH和温度与蜜蜂消化道内的环境一致。     

金针菇杂交菌株漆酶酶学性质的研究

为研究金针菇漆酶的酶学性质,试验选取金针菇杂交菌株L7号作为试验材料,对其进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE),发现其含有3种漆酶同工酶,同时采用分光光度法,以ABTS[(2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)]为底物测定金针菇杂交菌株漆酶活性的最佳反应条件。结果表明：适宜测定波长为410 nm、体系pH 4.5、反应温度45℃。     

菌株I13产碱性蛋白酶的酶学性质研究

[目的]研究菌株I13产碱性蛋白酶的酶学性质.[方法]从一株碱性蛋白酶生产菌株I13中得到了碱性蛋白酶粗酶液,并研究了温度和pH值对该酶液酶活力的影响.[结果]所产碱性蛋白酶的最适反应温度为40℃,但在30～60℃范围内活力水平均较高,且在20～30℃范围内也保持了最大活力的40%以上;最适反应pH值为10.5,在8.0～11.0 pH值范围内保持了最大活性的90%以上,有较宽的pH值谱.[结论]该碱性蛋白酶具有开发成为洗衣粉添加剂的巨大潜力.     

滑菇PholiotanamekoSW-01菌株产漆酶营养条件及部分酶学性质研究

[目的]探索滑菇PholiotarmmekoSW-01菌株产漆酶的最佳营养条件及其酶学性质。[方法]首先选取不同的碳源、氮源、pH、金属离子进行单因素试验,得到最佳培养基成分,进行四因素三水平的响应面分析。在酶学性质试验中,设置不同温度及pH,测定漆酶的最适反应温度、pH及热稳定性、pH稳定性。[结果]最适的碳源和氮源分别为葡萄糖和蛋白胨,最适pH为5,Cu2＋能显著提高漆酶的产量。响应面分析结果表明,最佳的产漆酶条件为葡萄糖42．50g／L,蛋白胨2．10g／L,pH5．47,cu2＋浓度1．67mmol／L,在此条件下漆酶活性为943．27U。在酶学性质试验中,漆酶的最适反应温度为30℃,最适反应pH为4．8。[结论]条件优化能显著提高滑菇漆酶产量。稳定性试验表明,漆酶对温度较敏感,对pH反应不敏感,在弱酸环境中能发挥较高的活性。     

菌株Ⅰ13产碱性蛋白酶的酶学性质研究（摘要）

[目的]研究菌株I13产碱性蛋白酶的酶学性质。[方法]从一株碱性蛋白酶生产菌株I13中得到了碱性蛋白酶粗酶液,并研究了温度和pH值对该酶液酶活力的影响。[结果]所产碱性蛋白酶的最适反应温度为40℃,但在30～60℃范围内活力水平均较高,且在20～30℃范围内也保持了最大活力的40%以上;最适反应pH值为10.5,在8.0～11.0pH值范围内保持了最大活性的90%以上,有较宽的pH值谱。[结论]该碱性蛋白酶具有开发成为洗衣粉添加剂的巨大潜力。     

来源于铜绿假单胞菌GF31的氯氰菊酯降解酶的提取及其降解动力学研究

从实验室自行筛选并保藏的氯氰菊酯高效降解菌——铜绿假单胞菌GF31中提取胞外粗酶液,研究其降解氯氰菊酯的动力学特性.结果表明,在温度20～60℃,pH值5.0 ～9.0范围内,胞外粗酶液都能保持较好的降解活力,最适温度为60℃左右,最适pH为7.0左右.不同pH值和不同温度条件下,氯氰菊酯的酶促降解进程模拟都符合一级动力学模型,相关系数大于0.9.     

白腐真菌产木质素降解酶的条件及酶学性质的研究

本研究以酶活力为评价指标,通过产酶条件的优化,选择出白腐真菌的最适培养条件,并对其部分酶作用特性进行了研究。试验结果表明:白腐真菌产锰过氧化物酶的最适培养条件是:最佳碳源是麸皮,葡萄糖(碳源)对酶活力影响不大;最佳氮源是牛肉膏;最佳培养时间是96 h。该菌产漆酶的最适培养条件是:最佳碳源是麸皮;最佳氮源是牛肉膏;最佳培养时间是96 h。锰过氧化物酶的最适pH范围是4.4～4.8,最适底物浓度是1.2 mmol/L,最适反应温度是35～40℃;漆酶的最适pH为4.8,最适底物浓度是1.2 mmol/L,最适反应温度是40℃。金属离子Cu2+,Co2+对锰过氧化物酶和漆酶有激活作用,Fe2+对两种酶活力有一定的抑制作用,而Ag+则完全抑制漆酶的活性,Mg2+对两种酶活力影响不大。     

蛋白酶产生菌的化学诱变及酶学性质

对1株产蛋白酶的枯草芽胞杆菌(Z5)进行化学诱变,筛选得到1株产较高酶活性、大分子质量蛋白酶的菌株。检测该蛋白酶对底物明胶的分解能力,发现该蛋白酶的分子质量约为100 ku,还原剂巯基乙醇对其活性的影响较大。在不同温度、不同pH值处理该蛋白酶后,用茚三酮法测定酶活性,发现该蛋白酶催化反应的最适pH为6,最适温度为50℃,并且该蛋白酶有较好的热稳定性,70℃处理10 min仍能保留50%左右的酶活性。由于此蛋白酶在分子质量及最适pH方面均不同于已报道过的枯草芽胞杆菌蛋白酶,推测其为一种新型的蛋白酶。     

一株蛋白酶产生菌的筛选及酶学性质研究

从牛奶场采集的土壤样品中筛选得到1株蛋白酶的高产菌株,经鉴定为枯草芽孢杆菌,其蛋白酶活力可达682.5U/ml。研究表明:酶反应最适温度为55℃,最适pH值为8.5。     

温度及pH对胞外乳糖酶酶学性质的影响

试验分析了温度、pH对亮色毛霉产胞外乳糖酶酶学性质的影响。结果表明,亮色毛霉所产乳糖酶的最适温度为60℃,属于高温乳糖酶;4℃保存可以提高酶的稳定性,纯酶液的相对酶活性在30d后稍有变化;酶活力最适pH为4.5,pH稳定性试验表明,该酶pH稳定范围在4.0～5.5。     

恭城月柿果胶粗酶的酶学特性初探

对恭城月柿中的果胶酶进行了提取和初步分离纯化,并对其酶学性质进行了初步的探讨.结果表明:月柿果胶酶在高酸、中性和碱性条件下不稳定,在pH值为4.0～5.0时较稳定,酶反应的最适pH值为4.5;在低于温度40℃时酶较稳定,温度70℃酶活性基本全部丧失,酶反应的最适温度为45℃;Mg2 、Al3 和Cu2 对酶有激活作用,但Ca2 、Fe3 有明显抑制作用.     

黑木耳漆酶酶学性质分析

从12个黑木耳菌株中筛选出一株黑木耳漆酶高产菌株——地茂1号,对其进行Native—PAGE,发现其含有3种漆酶同工酶。对其发酵液进行酶学性质分析,发现地茂1号在液体培养基中第11天酶活达到最大,为382．6U／L,最适温度为50℃,最适pH值为3．2,温度及pH稳定性较好。     

芽孢杆菌L4菌株角蛋白酶的酶学性质研究

采用室内实验方法,对芽胞杆菌L_4菌株产生的角蛋白酶进行了系列的酶学性质研究.结果表明,以角蛋白溶液为底物时该酶的最适酶促反应温度为40℃,最适酶促反应pH为7.0,其Km值为1.88 mmol·L~(-1),Vmax为2.72×10~(-2)mmol·L~(-1)·s~(-1).利用不同的蛋白酶抑制剂进行酶活性抑制实验,发现该酶受邻啡罗啉和EDTA的抑制,推测该酶可能是一种含Zn~(2+)的金属蛋白酶.微量元素对该酶活力的影响显著,Ca~(2+)和Mg~(2+)对酶活力有促进作用,高浓度的Fe~(2+)和Cu~(2+)明显抑制角蛋白活力.     

猪苓发酵菌丝胞内多糖提取工艺研究

【目的】优化猪苓发酵菌丝胞内多糖的提取工艺,以提高猪苓胞内多糖浸提的得率。【方法】通过单因素试验、正交试验和对比试验确定猪苓发酵菌丝胞内多糖的浸提方法、辅助浸提方法和除蛋白方法。【结果】与水浸提相比,弱碱性溶剂浸提猪苓菌丝胞内多糖的效果更好,具体工艺参数为:按料液比1∶40添加40倍体积pH=11的NaOH,90℃浸提4次,每次60 min;酶解辅助法和超声波辅助法可有效提高猪苓发酵菌丝胞内多糖的浸提得率,其中酶解辅助浸提的效果更好,其最佳工艺参数为:复合酶配比为m(纤维素酶)∶m(果胶酶)=1∶1,复合酶用量为10 mg/g,酶解80 min;蛋白酶和Sevag配合的除蛋白方法,是去除猪苓胞内蛋白的最佳方法。【结论】猪苓发酵菌丝胞内多糖的最适提取工艺流程为:猪苓菌丝干粉-添加10 mg/g复合酶〔m(纤维素酶)∶m(果胶酶)=1∶1〕和40倍体积蒸馏水?50℃酶解80 min-NaOH溶液调pH=11,90℃浸提4次,每次60 min-浸提液合并、浓缩-HCl溶液调pH=6.5-蛋白酶酶解1 h-85℃酶灭活-Sevag除蛋白至无蛋白检出-浓缩-醇沉-干燥。