某规模猪场猪圆环病毒2型感染抗体检测与防制

应用ELISA方法检测广西南宁某猪场在不同时段血清样品的猪圆环病毒2型抗体(PCV2),同时制定一系列详细、科学饲养管理制度、生物安全体系以及免疫防治的措施,经过一年半时间的净化,猪群中猪圆环病毒2型抗体阳性率由35％下降到7.5％.结果表明,该猪场制定的防制商品猪和种猪群PCV2的综合措施行之有效,值得规模化猪场借鉴.     

猪场圆环病毒-2型血清抗体的调查

[目的]监测聊城周边地区猪圆环病毒病的感染和流行情况。[方法]以山东省聊城周边地区的7个养猪场的222份血清为材料,应用ELISA方法配合流行病学调查,检测猪圆环病毒抗体水平。[结果]检测发现7个养猪场的猪群都感染过猪圆环病毒,抗体阳性率在33.3%~83.3%。发病猪群都为5~10周龄的保育仔猪。猪群在断奶后1周左右,出现进行性消瘦,生长迟缓,采食量下降,被毛粗乱,精神差。剖检病变主要表现为发病猪和死亡猪全身淋巴结水肿,发黄,肾脏水肿,肺脏肿大,质地变硬。该疾病初步定为由PCV-2感染所致的猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）。[结论]该研究为制定猪圆环病毒病的综合防制措施奠定了基础。     

猪圆环病毒2型组织培养特性研究

将经鉴定为PCV2阳性无菌处理的组织样品匀浆液接种到无PCV污染的PK15细胞中传代,PCV2病毒组织培养特性是添加D-氨基葡萄糖可有效地促进PCV2病毒的增殖复制,但病毒致细胞不产生病变,不能直接观察。应用PCR方法检测组织细胞培养物中的病毒增殖和增殖滴度,测定了PCV2病毒收获时间,试验表明PCV2病毒在PK15组织培养可连续传代,增殖病毒。     

猪圆环病毒2型的血清学检测

以大肠杆菌表达的猪圆环病毒2型(PCV2)重组衣壳蛋白(His-CAP2)为抗原,通过方阵ELISA滴定,确定了His-CAP2的最适包被浓度为6.4μg·mL-1,待检血清稀释度为1:40,建立PCV2的血清流行病学的间接ELISA监测方法.通过对已知PCV2血清及其他病毒血清的试验,表明该ELISA方法具有良好的特异性.利用该方法对来自苏中地区不同猪场的175份血清样本进行检测,PCV2抗体阳性检出率为70.29%,与临床上PCV2感染导致猪群发病的实际情况相符合,证实了此方法临床应用的可行性.     

猪圆环病毒2型分子生物学研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要病因。目前流行的PCV2被分为PCV2a和PCV2b两个亚群。北美和其他国家PCVAD的暴发通常与主要基因型从PCV2a转变为PCV2b有关。本文对圆环病毒2型的分子结构及其表达产物的生物学活性的研究进展进行了综述,最后对分子差异和致病性进行了讨论。     

猪圆环病毒Ⅱ型ORF2重组蛋白抗体诊断试剂IgG的研制

应用猪圆环病毒Ⅱ型(Porcine circovirus 2,PCV2)ORF2重组蛋白,研制诊断PCV2的抗体试剂.利用原核表达系统表达PCV2 ORF2蛋白,经12%浓度的SDS-PAGE凝胶电泳分析后免疫家兔制备抗PCV2 ORF2重组蛋白抗体,并用间接酶联免疫吸附试验(indirect-ELISA)确定其效价,然后以Western blotting法分析该抗体特异性.结果表明:PCV2 ORF2重组蛋白被表达,且在免疫家兔后获得效价高、特异性好的抗体.兔抗PCV2-ORF2重组蛋白抗体以其特异性好的特点可以作为免疫诊断试剂.     

豫北地区猪圆环病毒2型感染的血清学调查

[目的]明确河南省豫北地区PCV2感染的流行情况,以便控制PCV2感染的流行。[方法]从河南省豫北地区安阳、鹤壁、新乡、濮阳4市的猪场采集不同日龄猪群血清样品338份,用间接ELISA方法进行猪圆环病毒2型(PCV2)感染的血清抗体检测。[结果]结果表明:PCV2血清抗体阳性率:哺乳仔猪为16.0%(8/50);断奶仔猪为49.5%(53/117);生长肥育猪为51.4%(36/70);种公猪为18.1%(4/22);后备母猪为20.6%(7/34);经产母猪为54.5%(29/55);阳性率为70.4%(19/27),338份血清总阳性率为40.6%(137/338)。[结论]河南省豫北地区养猪业已受到猪圆环病毒2型的感染,应引起高度重视。     

阿克苏地区部分规模化猪场猪圆环病毒3型的感染情况调查

为了解阿克苏地区4个规模化养殖场感染猪圆环病毒3型（PCV3）的情况,在2020—2021年间,根据生产阶段采集了该猪场能繁母猪、仔猪和育肥猪共584份全血样本,利用PCR方法,检测猪圆环病毒3型。结果表明：PCV3平均阳性率为7.53%(44/584),其中繁育猪场平均阳性率14.07%(19/135),育肥猪场平均阳性率5.57%(25/449);能繁母猪、仔猪和育肥猪的阳性率分别为9.09%(5/55)、17.50%(14/80)和5.57%(25/449)。说明阿克苏地区部分规模化猪场存在PCV3感染,且繁育场猪比育肥场猪感染率更高。     

猪圆环病毒2型的分离与鉴定

以PCR方法,从疑似断奶猪多系统衰竭综合征(PMWS)自然病例的淋巴结和脾脏中扩增出预期长度的猪圆环病毒2型(PCV 2)的DNA片段,测序PCR产物,并对部分序列进行了同源性分析。结果显示,扩增产物与标准毒株的序列同源性均在98%左右,说明扩增产物具有良好的特异性,由此表明分离出的病毒为猪圆环病毒2型。对沪、苏、鲁、浙等地5个猪场进行检测,证实了猪圆环病毒2型的存在。     

猪圆环病毒Ⅱ型血清抗体ELISA检测方法的建立

为了检测猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)抗体,本试验建立了快速、敏感的ELISA诊断方法.通过比较差速离心、蔗糖不连续梯度离心、氯化铯等密度梯度离心和氯仿抽提结合超速离心等4种方法纯化PCV2抗原的包被效果,来确定最佳的PCV2包被抗原纯化方法,在此基础上,通过全病毒抗原最适包被浓度和二抗HRP-SPA稀释倍数的确定、待测血清稀释倍数的确定、封闭液浓度的确定、封闭时间的确定、HRP-SPA反应时间的确定、临界值的确定、特异性测定、重复性测定、符合率比较等,进一步优化检测PCV2抗体的间接ELISA方法.结果表明:对猪的多种病毒阳性血清进行ELISA检测,只有PCV2阳性血清呈阳性;对6份血清进行4次重复试验,方差分析显示P0.05,差异不显著;与PCV2-ELISA试剂盒(INGEZIM公司生产)的符合率比较,其总符合率达88.89%.可见,优化建立的检测PCV2抗体的间接ELISA方法特异性强、重复性高、稳定性好,可用于PCV2血清学诊断和血清学普查.     

猪圆环病毒复合PCR检测方法的建立及应用

根据GenBank中PCV2和PCV1的基因组序列设计3条引物,并建立了检测PCV2的复合PCR方法。用该方法对河南省7个地市45个猪场的156份样品进行了检测,检出阳性病料98份,阳性率63%;阳性猪场38个,阳性率84%,表明该方法特异性及敏感性高,可用于临床诊断。     

猪圆环病毒2型衣壳蛋白的表达

[目的]检测猪圆环病毒2型（PCV2）核衣壳蛋白（Cap）的表达,为进一步研制PCV2单克隆抗体检测抗原提供参考依据。[方法]根据已经发表的PCV2的衣壳蛋白基因（Cap）设计1对引物,利用PCR方法从已知PCV2病毒中扩增到1条DNA片段。将PCR产物按预定的阅读框架插入表达载体质粒pET28a（＋）中,获得重组质粒pCAP-PCV2,并转化到大肠杆菌BL21（DE3）中。[结果]序列测定表明,所克隆的序列大小为579 bp,与DQ104422的Cap基因序列一致;通过对菌体裂解物的SDS-PAGE分析证明,携带重组质粒pET-PCV2-Cap的大肠杆菌可以表达可溶性的衣壳蛋白。[结论]PCV2衣壳蛋白能通过表达载体质粒pET28a（＋）进行可溶性表达。     

河南省猪圆环病毒2型感染的病原流行病学研究

采用PCR方法,从来自河南省不同地区的822份猪肺脏等病料组织中共检出514份猪圆环病毒2型(PCV2)阳性样品,总检出率为62.6%。2011年3-12月,PCV2在河南省的检出率介于41.6%～85.3%。其中,9-12月的检出率显著高于3-8月(P<0.05)。在河南省不同地区的猪群中,PCV2的检出率介于44.6%～87.9%;其中,驻马店市、漯河市、信阳市3个地区PCV2的检出率显著高于全省其他地区(P<0.05)。PCR检测过程中还发现,PCV2的检出率与猪群类别(日龄)有一定关系,其检出率随猪年龄的增长而升高(P<0.05)。在211份PCV2阳性样品中,有144份(占69.2%)能分离出不同的共感染菌。最常见的共感染菌是链球菌(52.1%,75/144)、副猪嗜血杆菌(42.4%,61/144)、大肠杆菌(39.6%,57/144)和多杀性巴氏杆菌(20.1%,29/144)。研究表明,PCV2在河南省10多个地区的猪群中广泛存在,且与病原菌的共感染情况非常严重。     

南疆地区某猪场猪圆环病毒Ⅱ型的PCR检测

应用PCR技术对来自南疆某猪场的24例疑似病例进行猪圆环病毒Ⅱ检测,共检出PCV2阳性10份,阳性率为41.6%（10/24）。结果表明,该猪场存在PCV2的感染,且感染较为严重。     

基于Web的猪繁殖与呼吸综合征风险评估系统设计与实现

为建立规模猪场猪繁与呼吸综合征(PRRS)风险数据采集与评估系统,在PRRS风险因素分析和评估模型构建的基础上,应用ASP.NET动态网页开发技术、C#编程语言、ADO.NET技术及MYSQL数据库管理系统,设计开发了具有前台信息采集评估和后台数据库管理2大主功能模块和8个子模块组成的基于Web的规模猪场PRRS风险评估系统.通过该系统可对个体规模化猪场PRRS风险相关数据进行在线采集,并针对各级风险指标提供风险评估报告和管理措施改进建议,有助于猪场疫病风险管理和预防.     

猪圆环病毒2型感染对高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫应答的影响

采用阻断ELISA法对单独接种高致病性猪繁殖与呼吸综合征组(hpPRRS,B组)及PCV2人工感染21 d后接种hpPRRS疫苗组(PB组)不同时期血清中的PRRSV抗体进行检测,同时对不同时期前腔静脉血进行CD4/CD8流式细胞术及血常规分析.结果表明,在接种后32 d B组白细胞含量极显著高于PB组(P＜0.01),接种后62 d B组淋巴细胞含量极显著高于PB组(P＜0.01),接种后75 d PB组幼稚型Th细胞含量显著高于B组(P＜0.05),接种后32、62及75 d B组Tc细胞含量为PB组的2.40、1.98和1.86倍,接种后32、48及62 d B组记忆/激活Th细胞含量分别为PB组的1.54、1.46及1.32倍.     

猪伪狂犬病毒病与圆环病毒病2型混合感染的诊断

为诊断贵州省都匀市贵定县某猪场送检病料的感染类型,调查了其流行病学、临床症状和病理剖检特征,并采用复合PCR检测技术对其进行检测。结果表明,该猪场存在猪伪狂犬病毒病与猪圆环病毒病的混合感染。     

一株猪圆环病毒2型的分离与分子鉴定

利用PCR技术初步检测疑似PCV2感染的猪肺脏和淋巴结中的病毒.将样品处理后接种于PK-15细胞.从感染PK-15细胞PCR扩增PCV2基因片段,克隆入pMD18-T载体,并进行序列测定和比较.序列分析结果表明,分离病毒的PCR产物与国内多株PCV2核酸同源性大于98%,说明所分离的病毒为PCV2.     

猪圆环病毒2型201105ZJ分离株的遗传变异分析

[目的]了解我国部分地区猪圆环病毒2型（PCV2）的遗传变异特性。[方法]使用细胞传代的方法对 PCR检测为猪圆环病毒2型阳性的病料进行病毒分离,并通过 PCR、IFA进行初步鉴定,并特异性扩增出该分离病毒的全基因组,并进行同源性和系统进化树分析。[结果]该研究成功分离出1株 PCV2毒株,并命名为201105ZJ株;该分离株能在 PK15细胞上增殖,特异性 PCR检测可扩增出特异性片段,经 PCV2阳性血清作用后,呈现特异性免疫荧光,其 TCID50偏低,为102.67;基因组全长1768bp,与13株参考毒株的序列同源性介于94.1%～96.8%;与 AF055392PCV2a的同源性最高,为96.8%;分离株201105ZJ 和AF055392属于基因型 PCV2a,与 PCV2c基因型亲缘关系较远。[结论]该研究中201105ZJ分离株的遗传变异特征对于疫苗的研发、PCV2致病机理的研究和华东地区 PCVAD的防控提供了理论依据。