油楠基因组DNA提取·ISSR反应体系优化及引物筛选

[目的]对油楠基因组DNA提取、ISSR反应体系优化及引物筛选进行探讨。[方法]运用改良CTAB法对油楠树皮进行基因组DNA提取,利用单因素试验,对油楠ISSR-PCR反应各因素水平进行优化。[结果]运用改良CTAB法对油楠树皮进行基因组DNA提取效果最佳;最优体系:20μl反应体系中,模板用量20 ng,引物浓度0.6μmol/L,d NTPs浓度0.2 mmol/L,Mg2+浓度2.0 mmol/L,Taq酶用量1.5 U,10倍反应缓冲液2μl,dd H2O补至20μl;以该体系为基础进行引物筛选,在100条ISSR随机引物中筛选出13条多态性较高、扩增条带清晰、重复性好的引物。[结论]该研究丰富了油楠遗传学基本资料,为油楠遗传多样性研究奠定基础。     

槟榔基因组DNA提取及ISSR反应体系的优化

以槟榔为试验材料,用改良的CTAB法提取基因组DNA,并设置不同梯度分别对每个PCR反应因子做了相应的试验。结果表明：改良的CTAB法提取的槟榔基因组纯度高、质量好;同时,建立了适合槟榔ISSR-PCR反应体系,即20μLPCR反应体积中,模板DNA浓度为30ng/μL,Mg2＋浓度为2.5mmol/L,TaqDNA聚合酶1.0U,dNTPs浓度为0.4mmol/L,引物为浓度为0.8μmol/L。     

槟榔基因组DNA提取及ISSR反应体系的优化

以槟榔为试验材料,用改良的CTAB法提取基因组DNA,并设置不同梯度分别对每个PCR反应因子做了相应的试验.结果表明:改良的CTAB法提取的槟榔基因组纯度高、质量好;同时,建立了适合槟榔ISSR-PCR反应体系,即20μL PCR反应体积中,模板DNA浓度为30 ng/μL,浓度为2.5 mmol/L,Taq DNA聚合酶1.0 U,dNTPs浓度为0.4 mmol/L,引物为浓度为0.8μmol/L.     

树莓基因组DNA的提取及ISSR反应体系的正交优化

以树莓优良野生种质插田泡(Rubus coreanus)为材料,比较了SDS法、CTAB法和改良CTAB法提取树莓基因组DNA的效果,结果发现三种方法均能提取到树莓DNA,但改良CTAB法优于CTAB法和SDS法,其所得的DNA质量最好,杂质最少.通过正交试验设计,对Taq酶,primer,dNTP和DNA用量进行了筛选,建立了树莓ISSR技术最优反应体系,即25μl反应体系中含有1 ×PCR Buffer,2 mmol/LMg2+,1.5 U Taq酶,0.2 μmol/L primer,0.4 mmol/L dNTP和20 ng DNA.采用引物UBC835和UBC873分别对10个树莓品种和8个树莓野生资源进行检验发现,该体系工作效果良好.     

3种实蝇基因组DNA提取及ISSR-PCR反应体系的建立

为探讨高品质实蝇基因组DNA提取,研究模板DNA浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶用量、dNTP浓度、退火温度及时间对ISSR-PCR扩增结果的影响,以3种实蝇为材料,建立通用且稳定的实蝇ISSR-PCR反应体系。结果表明:获得了高品质实蝇基因组DNA;确立了通用且稳定的实蝇ISSR-PCR反应体系:10×PCRBuffer2.5μL,模板DNA50ng,引物0.25μmol/L,TaqDNA聚合酶0.50U,dNTP200μmol/L,最后加ddH2O至25μL;明确了ISSR-PCR扩增程序:94℃预变性5min,94℃变性30s,52.4℃退火45s,72℃延伸90s,循环36次,最后72℃延伸7min,4℃保存。体系的建立弥补了实蝇传统形态检测的不足,为快速准确鉴定、种群异质性及遗传多样性分析奠定了基础。     

大果油茶基因组DNA提取及ISSR反应体系建立

【目的】建立大果油茶的ISSR-PCR适宜扩增反应体系和程序,为其深入研究奠定基础。【方法】以大果油茶嫩叶片为供试材料,采用改良的SDS法提取其基因组DNA,并对其ISSR反应体系条件进行筛选及优化。【结果】提取的基因组DNA纯度和完整性较好,OD260/OD280值在1.8～2.0之间,DNA无降解现象,完全可以满足ISSR-PCR扩增要求。在25.0μLISSR-PCR反应体系中,各组分的适宜浓度配比为：40ng/μL模板DNA1.0μL、2.5mmol/LdNTPs2.0μL、5U/μLTaqDNA聚合酶0.2μL、10μmol/L引物1.0μL、10×PCR Buffer2.5μL（含有Mg2＋）,加ddH2O至25.0μL。PCR反应程序为：94℃预变性5min;94℃变性40s,52℃和53℃退火40s,72℃延伸90s,40个循环;最后72℃延伸7min。由此可获得带型丰富和清晰可辨的DNA指纹图谱。【结论】建立的ISSR-PCR反应体系可用于研究大果油茶遗传变异和多样性。     

大果油茶基因组DNA提取及ISSR反应体系建立

【目的】建立大果油茶的ISSR-PCR适宜扩增反应体系和程序,为其深入研究奠定基础。【方法】以大果油茶嫩叶片为供试材料,采用改良的SDS法提取其基因组DNA,并对其ISSR反应体系条件进行筛选及优化。【结果】提取的基因组DNA纯度和完整性较好,OD260/OD280 值在1.8~2.0之间,DNA无降解现象,完全可以满足ISSR-PCR扩增要求。在25.0 μL ISSR-PCR反应体系中,各组分的适宜浓度配比为：40 ng/μL模板DNA 1.0 μL、2.5 mmol/L dNTPs 2.0 μL、5 U/μL TaqDNA聚合酶0.2 μL、10 μmol/L引物1.0 μL、10×PCR Buffer 2.5 μL（含有Mg 2+）,加ddH2O至25.0 μL。PCR反应程序为：94℃预变性5 min;94℃变性40 s,52℃和53℃退火40 s,72℃延伸90 s,40个循环;最后72℃延伸7 min。由此可获得带型丰富和清晰可辨的DNA指纹图谱。【结论】建立的ISSR-PCR反应体系可用于研究大果油茶遗传变异和多样性。     

白木香基因组DNA提取与ISSR反应体系的优化

白木香为瑞香科沉香属植物,是中国特有的珍贵药用植物,也是国产沉香药材唯一资源植物,现已濒临灭绝,被载入<中国植物红皮书>采用改良CTAB法提取白木香DNA较传统方法简单高效.通过琼脂糖凝胶电泳和OD260/OD280比值测定,所得基因组DNA纯度高,可作为ISSR等以PCR为基础的DNA多态性标记.通过优化影响白木香ISSR-PCR的主要参数,确立了适用于白木香的ISSR反应体系和扩增条件.结果表明在20μl反应体中,模板DNA、引物、Mg2+、dNTP和Taq DNA聚合酶5种主要成分的最适浓度分别为25 ng、0.8 μmol/L、2.5 mm01/L、0.2 mmol/L、1.0 U,扩增出足量产物至少需要35个循环.     

诺丽叶片DNA的提取及ISSR-PCR 反应体系的建立

[目的]提取诺丽（Morinda citrifoliaLinn.）叶片DNA,并建立ISSR-PCR反应体系。[方法]以3份采自海南、4份采自美国的诺丽种质的叶片为材料,对其DNA提取和ISSR分子标记方法进行了研究。[结果]采用改进的CTAB DNA微量提取法,可以得到高质量的诺丽叶片基因组DNA。用14条不同的ISSR引物对所提取的诺丽基因组DNA进行了ISSR分子标记分析,其中7条引物在诺丽DNA中可扩增出多态性产物。[结论]建立了诺丽叶片基因组DNA快速、高效的提取方法和ISSR标记体系,可为ISSR分析应用于诺丽遗传研究奠定良好的基础。     

蜡梅花瓣基因组DNA提取及RAPD-PCR反应体系优化

以蜡梅花瓣为试材,用改良CTAB法提取基因组DNA,并设置不同浓度梯度对每个PCR反应因子进行相应试验,结果表明,改良CTAB法提取蜡梅花瓣基因组纯度高、质量好。并采用正交试验设计的方法,对蜡梅RAPD-PCR条件进行了优化,结果表明,最佳的蜡梅RAPD-PCR反应体系(20μL)为:1×buffer,1.0 U TaqDNA聚合酶,2.0 mmol/L MgCl2,0.15 mmol/L dNTPs,0.5μmol/L引物和模板DNA 30～40 ng;适宜的扩增条件为:94℃预变性3 min;94℃变性30 s,38℃退火30 s,72℃延伸90 s,38个循环;72℃延伸7 min,4℃保存。     

孑遗植物水松（Glyptostrobus pensilis）数量性状间的相关聚类分析

以屏南水松天然林为研究对象，运用尺型聚类分析方法对水松种群的25个数量性状进行聚类分析，探讨水松数量性状间的相互关系及其对水松生长、遗传及生态经济性状的影响．结果表明：水松材积与树高、冠长、胸径等性状呈显著正相关，生长性状与光合作用的面积有关；树高是决定材积的第一要素；水松在干形遗传、自然整枝等方面的遗传性较为稳定．     

我国特有孑遗植物水松濒危原因及其保护对策

通过对水松各分布区实地调查,从生殖生物学、生态因子胁迫、人为干扰和遗传多样性等方面探讨水松濒危的主要原因。研究表明：水松原始的生物学特性制约了其生存规模,对生境的高要求影响了其持续繁衍,人为干扰引起的生境破碎化和过度砍伐所导致的个体数量下降是其濒危的直接因素,较低的遗传多样性水平是其濒危的内在因素。针对水松濒危的原因和...     

屏南水松天然林主要种群的种间竞争

采用Lotka-Volterra竞争方程研究水松天然林种群与伴生树种间的竞争,用重要值百分数求取种间竞争系数,以优势种群在正常纯林中的优势度作为其容纳量。结果表明,平衡时水松和伴生树种的相对优势度分别为69.21%和30.79%,说明水松种群在天然林中仍处于支配地位,但研究发现,水松林有逐渐退化减少的趋势。     

孑遗植物屏南水松种群空间分布格局

运用4种典型聚集度指标和Iwao方程考察测定3块水松样地的种群空间格局类型,并分析其格局形成原因;对不同取样尺度下的格局变化进行系统研究。结果表明,屏南水松种群空间分布大体呈聚集分布,且在25 m2取样单元上聚集密度较大。研究结果可为屏南水松天然林群落的保护和经营管理提供理论依据。     

多花黄精ISSR反应体系的建立及正交优化设计

通过对多花黄精ISSR-PCR反应中的Taq酶、buffer(Mg2+)、模板DNA、dNTP以及引物5个关键因素进行了5因素4水平的正交设计试验,确立了适合多花黄精基因组DNA的稳定性强、扩增最多数量谱带的ISSR-PCR最优反应体系,即25μL的反应体系中含有1.0 U Taq DNA聚合酶,3.5 mmol.L-1buffer(Mg2+),80 ng模板DNA,0.08 mmol.L-1dNTP和0.16μmol.L-1引物。采用建立的多花黄精ISSR-PCR最佳反应体系进行退火温度梯度试验,确定了引物UBC841的最适退火温度为54.8℃,且最适退火温度因引物而异。这一优化的ISSR-PCR反应体系的建立为今后利用ISSR技术进行黄精种质资源分类、遗传图谱构建和基因定位奠定了良好的技术基础。     

黑木耳总DNA提取及PCR-ISSR引物筛选

以14个黑木耳[Auricularia auricla(L.ex Hook)Underw]菌株为试材,对黑木耳总DNA提取方法和ISSR-PCR扩增反应条件及引物进行了筛选.结果表明.改进的SDS抽提法可以在较短时间内提取到高纯度的DNA产物;并筛选出了可产生遗传多样性的15条引物,其中引物ISSR11、ISSR12、ISSR14扩增结果的稳定性好、多态性强.经凝胶电泳比较,引物ISSR14可作为黑木耳PCR-ISSR反应的适宜引物.     

模拟三峡库区消落带土壤水分变化条件下水松幼苗的光合生理响应

通过模拟三峡库区消落带土壤水分变化特征,设置了常规生长水分条件（NG）、轻度干旱水分胁迫（LD）、土壤水饱和（SW）以及水淹（BS） 4个不同处理组,研究水松当年实生幼苗在三峡库区消落带水位变化条件下的光合生理生态响应机理和适应性.研究结果表明,不同水分处理均显著影响水松叶片光合气体交换参数以及表观资源利用效率.水松幼苗LD组在整个处理期的净光合速率(Pn)平均值显著低于NG组22.025%;与SW、BS组Pn平均值分别高于NG组18.608%、48.987%形成鲜明对比.与此同时,水松幼苗LD组的 气孔导度(Gs)平均值显著低于NG组10.218%;SW和BS组的Gs平均值则分别显著高于NG组40.708%、87.566%.水松幼苗对土壤水分变化具有敏感的光合响应能力,在充足和较多水分条件下表现出增益的正向光合响应,显示出很强的耐水湿特点;但对于干旱水分胁迫则表现出不利的负向光合响应.在消落带防护林体系建设中,水松适宜栽植于土壤饱和水或渍水的环境中,尤其是在根部土壤水淹条件下其净光合速率达到最高;在干旱环境条件下则应注意浇水抗旱,使水松保持正常的净光合速率.      

巨竹ISSR反应体系的建立与优化

以巨竹叶片提取的基因组DNA为材料,用引物UBC810(序列为GAG AGA GAG AGA GAG AT)研究了PCR反应体系的主要成分、退火温度及循环次数对该种植物ISSR扩增结果的影响。结果表明,20μL的反应体系含40 ng模板DNA、0.6μmol.L-1引物,1.0 U Taq DNA聚合酶,2.5 mmol.L-1Mg2+,0.25 mmol.L-1dNTPs,1×Buffer。PCR扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性45 s,54.5℃复性30 s,70℃延伸90 s,循环40次;72℃延伸10 min,置4℃保存。     

水松花粉中的淀粉粒和胼胝质

水松花粉母细胞在１２月下旬至第二年元月上旬进行减数分裂，散粉时的成熟花粉为２－细胞结构。前期Ⅰ，淀粉粒主要分布在花粉母细胞内的周围。中期Ⅰ至末期Ⅱ，淀粉粒逐渐向中期Ⅰ，Ⅱ所形成的赤道区处聚集。花粉发育期中，淀粉粒聚集在核的周围，但这些淀粉粒在散粉前全部消失。胼胝质首先出现在花粉母细胞内壁和质膜之间，然后在减Ⅰ，Ⅱ赤道区处形成一环形和两个半圆形的胼胝质。营养细胞和生殖细胞周围及其之间具有明显的胼胝质荧光。