鹅基因PCR-SSCP分析条件优化的研究

SSCP是一种新的分子遗传标记分析方法,但影响其试验效果的因素很多。本试验从多个方面对鹅OBR基因SS-CP方法的影响因素进行分析,结果发现应用15%的聚丙烯酰胺凝胶常温下低压电泳(丙烯酰胺/N,N′-亚甲基双丙烯酰胺为29∶1)效果最佳,条带清晰,容易识别,可应用于其他SSCP分析方法的参考。     

2种检测阿勒泰羊Fec~B基因酶切产物方法的比较

为了比较3%琼脂糖凝胶和12%非变性聚丙烯酰胺凝胶的溴化乙锭(EB)染色法检测阿勒泰羊FecB基因酶切产物的准确性,试验采用通用引物对阿勒泰羊的FecB基因序列进行PCR扩增,通过限制性内切酶AvaⅡ对扩增产物进行酶切消化,用EB染色的琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶检测相同条件下酶切的FecB基因产物,通过紫外凝胶成像仪(型号为Gel Doc 2000)进行比较,分析结果。结果表明:EB染色的12%非变性聚丙烯酰胺凝胶所得的酶切结果明显优于3%琼脂糖凝胶所得的酶切结果,因此可采用EB染色的12%非变性聚丙烯酰胺凝胶检测FecB基因。     

奶牛乳中早孕因子分子性质的研究

采用玫瑰花环抑制实验测定早孕因子(EPF)活性,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其肽图,聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测其等电点。结果表明:从孕牛乳中分离出EPF活性样物质,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳见2条蛋白带,其相对分子质量为21.0 ku、67.0 ku,等电点为6.8。     

制备性分段电泳纯化基因工程白细胞介素—2

采用具有高分辨率特性的聚丙烯酰胺凝胶为载体,以电泳技术将工程菌株的各种蛋白成分精细分离,再用紫外检测手段对白细胞介素—2(IL—2)基因表达产物在凝胶上定位,通过准确地切割凝胶,提取其中的蛋白质,获得了高纯度(>95%)的基因工程IL—2产物.经用同位素掺入法测定,其对小鼠胸腺细胞有明显的促进增殖活性     

高强度酚醛树脂交联剂成胶性能分析评价

交联剂主要分为有机交联剂、金属交联剂两大类别。传统交联剂体系多为单一体系,某一种交联物质单独与聚丙烯酰胺溶液发生反应形成凝胶,其凝胶特性优越性单一,适用限制条件多,不宜应用于矿场试验。本文从一个新的思路出发筛选出高效交联产品——高强度酚醛树脂交联剂,室内试验效果很好,并克服了传统交联剂低温、高矿化度环境下成胶强度低、甚至不成胶、凝胶不稳定易脱水等缺陷。高强度酚醛树脂交联剂是在两种交联剂用量不同条件下相互作用生成类似于金属交联剂性质的物质M和酚醛树脂类交联剂性质的物质N,两者分别与聚丙烯酰胺发生交联反应,两者的协同作用使之形成高质量凝胶,弥补了单一体系的缺陷,使之具有更广泛的适用性。     

四川西门塔尔牛血红蛋白及血清运铁蛋白多态性研究

235头血样,采用醋酸纤维薄膜电泳及聚丙烯酰胺凝胶双垂直板电泳检测血红蛋白(Hb)及血清运铁蛋白(Tf)的多态性。研究获得Hb及Tf的基因频率和基因型频率;Hb~A和Tf~D为优势基因,HbAA型和TfAD型为优势基因型。     

利用正交设计对简易银染法的优化研究

用正交设计研究了DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)凝胶的简易银染中各因素对银染效果的影响,通过PCR技术扩增了山西白猪第六世代15个耳组织基因组的两条微卫星DNA序列,这些序列经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离和500ladder Marker标记跑板后,利用正交法设计简易银染法各因素的组合,对凝胶进行染色。试验结果表明,染色液用AgNO3浓度0.10%、显色用含NaOH1.50%、甲醛0.40%混合液、水温30℃时对PAGE凝胶染色的效果最好。     

鸡蛋黄碱性磷酸酶的提纯和性质

用乙醚抽提、硫酸铵沉淀,凝胶过滤、亲和层析等方法从鸡蛋黄中提取碱性磷酸酶,提纯倍数为470倍。用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测得该酶的等电点为3.85和4.35;用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得该酶的分子量为148000和70500;该酶对热不稳定;聚丙烯酰胺凝胶电泳出现二条带,证明该酶可能存在两种同工酶。     

家蚕浓核病血液蛋白的醋酸纤维膜电泳

<正>应用电泳方法研究家蚕血液蛋白始于五十年代,通过纸上电泳或用提塞留斯氏电泳仪(Tiselius apparatus)不连续电泳法等进行电泳,认为家蚕血蛋白由五种成分组成,近年来用聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳法,最多能分离出17—18条带,其中有9条主带(何家禄等).家蚕血蛋白成分的电泳图谱,因电泳方法而异,聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳法,分离效果高,图谱清晰.     

肌旋毛虫功能性抗原实验研究

本实验应用生化萃取技术和体外人工培养技术,制备了肌旋毛虫匀浆(HO)抗原和排泄—分泌物(ES)抗原,并对两种不同来源抗原的部分生化特性和免疫学特性进行了比较。HO抗原通过SephadexG—200又分为第一峰(FP)和第二峰(SP)。在5～20％的聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳和薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳上,ES和FP抗原出现许多条电泳区带。ES、FP和HO抗原对小鼠的保护力(肌幼虫减少率)分别为78％,76％和46％。     

天峻县藏羊血清运铁蛋白多态性研究

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳对青海省天峻县146只藏羊的血清运铁蛋白进行了分型。结果发现：被检藏羊的TF位点上有TF^A、TF^G、TF^B、TF^L、TF^C、TF^D、TF^M和TF^Q8个等位基因，其中：TF^B(0.2705)，TF^C(0.3562)和TF^D(0.1712)为优势等位基因；其有25种基因。     

滇陆新品系猪血清蛋白(酶)多态性的研究

试验采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳方法,分别对云南省滇陆新品系猪(N1)4个世代120头猪5个基因座(Tf、Pa、Po、AmⅡ、AKP)的遗传多态性进行了测定,计算了各世代的平均基因杂合度以及对第5世代进行了遗传平衡性检验.结果表明,滇陆系所测的5个基因座均表现出多态性;平均基因杂合度逐代降低,由零世代的0.386降低到第5世代的0.303,降低了27%;第5世代除AmⅡ基因座外,其余均符合Hardy-Weinberg平衡定律,处于遗传平衡之中.     

孕牛乳中早孕因子的分离纯化

采用硫酸铵分级盐析、DEAE-52纤维素离子交换层析、G-100葡聚糖凝胶层析、ConA-Sepharose 6B LL亲和层析的方法分离纯化健康怀孕奶牛(妊娠4个月)乳中的早孕因子,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其肽图。结果表明:从孕牛乳中分离出EPF活性样物质,其蛋白含量为0.290 mg/mL,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳见2条蛋白带,其相对分子质量为21.0 ku、67.0 ku。说明这条分离纯化早孕因子的技术路线是可行的。     

家禽血浆、聚丙烯酰胺凝胶和电泳贮备液保存的探讨

本试验对鸡和鸭血浆、聚丙烯酰胺凝胶、电泳贮备液的保存时间及保存条件进行了研究。结果表明:鸡血浆在—20℃条件下保存6个月,解冻2次,对研究鸡血浆蛋白(酶)多态性(血浆运铁蛋白Tf、前白蛋白Pra、淀粉酶Amy、脂酶Es)没有影响;鸡血浆在—20℃条件下保存8个月,解冻3次,对研究鸡血浆Tf、Pra多态性无影响;鸭血浆在—20℃条件下保存8个月,解冻3次,对研究鸭Tf、Pra、Es、Amy、血红蛋白Hb多态性无影响;聚丙烯酰胺凝胶和贮备液(分离胶、浓缩胶、电极缓冲液、分离胶和浓缩胶缓冲液)在 4℃冰箱内保存8个月,不影响鸡和鸭血浆蛋白(酶)多态性的研究效果。     

扩展莫尼茨绦虫DAZ基因保守结构域所在片段的克隆及原核表达

为了克隆和表达编码扩展莫尼茨绦虫无精症缺失(DAZ)基因,试验根据GenBank中扩展莫尼茨绦虫DAZ基因cDNA序列(登录号为GH291478)设计1对特异性引物,以扩展莫尼茨绦虫组织总RNA为模板,RT-PCR扩增DAZ基因,并克隆到pMD19-T载体中进行序列测定,构建重组质粒pET28a-DAZ,转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞,以异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达;利用非变性聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)分析表达产物,通过螯合琼脂糖凝胶FF亲和层析柱对重组蛋白进行纯化。结果表明:重组DAZ基因在大肠杆菌中高效表达,表达的融合蛋白分子量约为14 ku。     

绿啄木鸟雌雄个体血清蛋白比较分析

为了提供绿啄木鸟的基础生理、生化指标依据,试验采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳(PAGE)的方法对绿啄木鸟雌雄个体血清蛋白进行分离、分析。结果表明:分离出的绿啄木鸟雌雄个体血清蛋白谱带数分别为13条、10条,电泳迁移率(Rm)为0.33,0.351,0.498处出现的谱带为雌性个体所特有。雌雄个体间血清蛋白谱带分布和蛋白质活力存在明显差异。     

垂直平板PAGE检测牛血清碱性磷酸酶同工酶方法的改进

在参考有关资料基础上,对用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测牛血清碱性磷酸酶同工酶过程中凝胶配制、加样量及染色反应等条件进行了改进,探索出一套适用于牛及其它物种血清碱性磷酸酶同工酶分析的方法。     

柴达木黄牛血清运铁蛋白的多态性

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法对 2 33头柴达木黄牛血清运铁蛋白的多态性特征进行研究。结果发现 :柴达木黄牛血清运铁蛋白的多态性受TFA1 ,TFA,TFB,TFD,TFF和TFE6个等位基因的控制 ,共有 1 4个基因型 ,其中TFD 为优势等位基因 (0 643 8)。柴达木黄牛TF基因座的群体间基因分化程度 (Gst为 0 74% )和每一个等位基因的分化程度 (最大的Fst为 0 0 66 5)很小。     

青海互助本地山羊血清运铁蛋白和血红蛋白的电泳分析

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法,对82份青海互助本地山羊血清运铁红蛋白和血红蛋白进行了电泳分析.结果发现:(1)被检山羊血清TF共有TFAA、TFAB、TFBB三种基因型,且以TFAA为优势基因型;TFA、TFB的基因频率分别为0.872、0.128.基因杂合度为0.223.(2)被检山羊血红蛋白全部呈单态的HBAA型.     

里氏木霉重组t-PA纯度、分子量及等电点鉴定

基因工程菌株里氏木霉(Trichodermareesei)生物合成的组织型纤溶酶原激活剂(tissue-typeplasminogenactivator,t-PA)经分离纯化后,采用还原SDS-PAGE和非还原PAGE分析达到了电泳纯,采用Superdex75PrepGrade凝胶过滤色谱分析达到了色谱纯;采用还原SDS-PAGE分析其相对分子质量为6.6×104,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳纤维蛋白自显影法检测其相对分子质量为6.6×104,与相关文献报道的一致。等电聚焦电泳测定其等电点为4.24。