牛结节性皮肤病的流行特点及防控对策

牛结节性皮肤病（LSD）是由牛结节性皮肤病病毒（LSDV）引起的一种牛急性、亚急性全身感染的病毒性传染病。在全球多数地区有流行发病史,并呈逐年扩增趋势。作为一种近几年新传入我国的病毒性传染病,受气候环境因素影响,有明显季节性,多发于高温潮湿季节。该病传播途径多元化,农产品往来、动物贸易流动、野生动物流窜迁徙、饲料调运、患病牛精液配种等均可导致病毒传播,引发牛出现以皮肤硬状结节为主要特征的临床症状,传染性强,易造成大面积传播,对养牛业产生极大的危害性,严重制约牛产业有序健康发展。为更好地认识和了解该病毒的特性,本文整理了牛结节性皮肤病的全球流行史,通过流行病学分析,综合阐述了发病临床特征,并根据不同的诊断方法,提出了有针对性的预防控制措施,以期为预防该病发生和建立综合性的生物安全防控体系提供帮助,从而确保牛群健康,提高养殖效益。     

黑龙江省某牛场种公牛牛白细胞粘附缺陷病（BLAD）的调查

BLAD（Bovine Leukocyte Adhesion Deficiency）是一种遗传免疫缺陷性疾病,能够引起牛持续感染和严重影响牛生长发育,已给养牛业造成了巨大的经济损失。为了解黑龙江省家畜繁育指导站种公牛BLAD携带及其发生情况,采用RT-PCR扩增牛CD18部分基因片段后,用TaqⅠ对扩增产物进行酶切方法...     

牛传染性鼻气管炎研究进展

牛传染性鼻气管炎是由牛传染性鼻气管炎病毒引起的,以高热、上呼吸道疾病和流产为主要特征。该病是牛的重要传染病之一,给养牛业造成了巨大的经济损失。笔者从病原学、流行病学、临床症状与病理变化、发病机理、诊断方法、预防与控制6个方面阐述牛传染性鼻气管炎的研究进展。     

牛传染性鼻气管炎病毒的分离鉴定及gD基因序列分析

[目的]从疑似牛传染性鼻气管炎病毒感染的牛鼻腔棉拭子中分离出1株病毒,对其进行鉴定和序列分析。[方法]从疑似牛传染性鼻气管炎病毒感染的牛鼻腔棉拭子中分离到1株病毒,将其命名为NM株。通过PCR、MDBK细胞病变观察、中和试验、动物回归试验、gD基因序列分析对其进行鉴定。[结果]确定该分离株为牛传染性鼻气管炎病毒强毒株。NM株病毒能使MDBK细胞产生牛传染性鼻气管炎病毒典型性细胞病变。Reed-Muench法测定NM株病毒的TCID50为10-6.0/ml。NM株病毒与IBRV阳性血清发生中和反应,而与IBRV阴性血清不发生中和反应。NM株病毒能使8月龄IBRV抗体阴性牛致病,表现出牛传染性鼻气管炎的典型临床症状。gD基因序列鉴定结果表明NM株病毒与IBRV K22株的同源性最高。[结论]该研究可为IBR诊断试剂与疫苗的研制奠定基础。     

G6P[5]型牛轮状病毒的分离鉴定

轮状病毒(Rotavirus,RV)是全世界范围内引发多种幼龄动物及婴幼儿病毒性腹泻的最主要病原之一,给畜牧业发展和人类健康造成严重危害。通过RT-PCR对来自宁夏犊牛腹泻粪样进行检测,选取阳性样品经MA104细胞进行病毒分离。细胞盲传4代后出现CPE,至7代后细胞CPE现象明显,获得1株牛轮状病毒,扩增VP7、VP4基因并测序分析,结果表明该分离株属于G6P[5]型轮状病毒,命名为NX28。研究明确了G6P[5]型在国内牛群中的存在及流行,并为下一步的牛轮状病毒的分子流行病学研究奠定基础。     

A novel real-time RT-PCR with TaqM an-MGB probes and its application in detecting BVDV infections in dairy farms

A real-time RT-PCR assay using Taq Man-MGB probes was developed to detect and type the bovine viral diarrhea virus(BVDV) in cattle.Universal primers and Taq Man-MGB probes were designed from the 5′-untranslated region of known pestiviral sequences.Prior to optimizing the assay, c RNAs were transcribed in vitro from the BVDV 1 and BVDV 2 RTPCR products to make standard curves.The detection limit of the assay was 1.72×102 copies for BVDV 1 and 2.14×102copies for BVDV 2.The specificity of the assay evaluated on several BVDV strains including bovine herpesvirus 1(BHV 1), foot and mouth disease virus(FMDV) and several classical swine fever virus(CSFV) strains showed specific detection of the positive virus over 40 cycles.The assay was highly reproducible with the coefficient of variance ranging from 1.04 to 1.33% for BVDV 1 and from 0.83 to 1.48% for BVDV 2, respectively.Using this method, we tested a total of 2 327 cattle from three dairy farms for the presence of BVDV persistently infected(PI) animals.In this assay, each RT-PCR template contained a mixture of ten samples from different animals.The occurrence rate of PI cattle in three farms ranging from 0.9 to 2.54% could represent partly the PI rates in cattle farm in China.In conclusion, using our real-time PCR assay, we could effectively detect and type BVDV and identify PI cattle in a rapid and cost-effective manner.     

小规模肉牛养殖现状及发展对策

通过对小规模肉牛养殖场进行调查,以现代畜牧业的理念分析了农户小规模肉牛养殖存在的问题,并提出促进小规模肉牛养殖产业发展的对策。     

微卫星标记在牛遗传育种中的应用研究

微卫星标记由于具有数量多、分布广且均匀、多态性丰富、分析快速方便等优点,已被广泛应用于牛的遗传育种之中。本就其在牛遗传育种中的应用研究进展作一综述。     

北平顶猴的规模化饲养与繁殖

北平顶猴是一种珍贵而具有特殊生理特性的灵长类实验动物。介绍了在人工饲养环境下北平顶猴(Macaca mulatta)的驯养、管理、繁殖和疾病防治。综述了养殖场选址、猴房设计建设、设施划分、科学管理、饲养繁殖、个体档案管理以及腹泻、外伤、寄生虫等疾病的预防及治疗措施。     

牛病毒性腹泻病毒山东株的分离与鉴定

牛病毒性腹泻病毒是牛病毒性腹泻-黏膜病的重要病原体,该病毒病是极为复杂、呈多临床类型表现的传染病,给世界养牛业造成了巨大的经济损失。本研究从疑似牛病毒性腹泻-黏膜病的粪便中分离得到一株病毒能使MDBK细胞产生细胞病变,经RT-PCR检测及扩增产物测序进一步证实,该病毒为牛病毒性腹泻-黏膜病病毒,TCID50测定该病毒的滴度为107.15TCID50/ml。该病毒株的分离鉴定为牛病毒性腹泻病毒疫苗的研制奠定了基础。     

湖南省畜禽肿瘤的调查研究——Ⅵ.牛白血病普查

本文报道了利用琼脂扩散试验,对湖南省境内21个牛场的奶牛、黄牛和水牛以及一个县农户的水牛进行的牛白血病检查的结果。     

运城市奶牛养殖业现状调查及分析

近年来运城市的奶牛养殖业发展迅速,但在饲养场地位置的选择、建筑布局、奶牛品种和生产水平、饲料生产和加工、质量标准和监控体系等方面仍存在一些问题,分析认为只有大力推进标准化奶牛养殖小区的建设才是根本出路。     

牛病毒性腹泻病毒Real-timePCR方法的建立及其应用

本研究在牛病毒性腹泻病毒5'UTR基因的保守区设计并合成了1对引物,建立了可以定量检测牛病毒性腹泻病毒核酸的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。该方法建立的标准曲线相关系数R2为0.999,扩增效率为95.9%,熔解曲线为单一峰值,可检测到初始模板中4.1×101copies/μL的牛病毒性腹泻病毒核酸,是常规RT-PCR方法敏感性的100倍。该检测方法与猪瘟病毒、传染性鼻气管炎病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛副流感病毒3型病毒等其它牛源病毒均不发生交叉反应;批内与批间重复性试验变异系数均小于2.2%。本试验建立的荧光定量PCR检测方法可用于牛病毒性腹泻病毒的临床诊断。同时,应用本方法对临床病例的各组织器官进行了病毒RNA定量检测结果表明,胸腺等淋巴组织的病毒含量最高,证实病毒主要侵害淋巴器官,此研究可为临床病例的病毒分离提供借鉴。     

Expression of bovine leukemia virus genome is blocked by a nonimmunoglobulin protein in plasma from infected cattle

Plasma of cattle infected with bovine leukemia virus contains a soluble factor that blocks the expression of the viral genome in cultured lymphocytes. The blocking factor is not present in plasma of bovine leukemia virus-free cattle or of cattle infected with common bovine viruses. Blocking of bovine leukemia virus expression by the plasma factor is reversible, and seems to be mediated by a nonimmunoglobulin protein molecule.     

奶牛繁殖决策支持系统的构建

【目的】通过精细化管理提高奶牛繁殖效率。【方法】采用Visual Basic .NET 2005、SQL SERVER 2000数据库等技术,结合奶牛繁殖关键环节及观测指标,构建基于C/S架构的繁殖奶牛信息管理系统。【结果】开发的奶牛繁殖决策支持系统,具有数据记录、维护、统计汇总以及智能提醒等功能,可对由发情到分娩、断奶及干奶等环节实现全程数字化管理,通过系统的计算将处于某一生产阶段的牛只列表自动提醒给用户,通过对主要繁殖指标的统计,用户可对繁殖结果进行综合评价。【结论】奶牛繁殖决策支持系统可为奶牛养殖场提供数字化管理技术支持,对提升奶牛繁殖性能具有重要意义。     

牛肠毒素性产气荚膜梭菌的分离及鉴定

对黑龙江省3个地区牛场疫牛进行临床诊断，剖检结果为小肠出血性肠炎和心内外膜严重出血等症状，进行了细菌的分离培养、涂片镜检、生化试验和动物感染试验。结果表明：分离菌株均为革兰氏阳性粗短杆菌，严格厌氧，在血平板上具有双溶血环，能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和暴酵牛乳，肠毒素检测试验阳性，厌气肉肝汤培养物0．2mL小白鼠尾静脉注射，2～10h可使其致死。试验结果表明3个分离株均为产气荚膜梭菌。     

牛肠道病毒RT-PCR检测方法的建立及初步应用

参照GenBank中登录的牛肠道病毒(BEV)全基因组序列,针对其3D基因设计合成了1对特异性引物,提取病毒RNA,逆转录为cDNA,进行PCR扩增,经条件优化,建立了BEV的RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性进行验证。结果显示,该方法从分离的牛肠道病毒中扩增出了732 bp的特异性目的片段;且对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCoV)等相关病毒均无交叉反应;其检出敏感度达10-1TCID50。应用该方法对山东地区84份临床疑似发病牛样品进行检测,21份为阳性,阳性检出率为25%。     

基于Web的猪育种管理系统设计

针对种猪场育种管理中存在的弊端和技术力量薄弱,提出构建基于Web的猪育种管理系统的设想,利用Web的资源共享功能,采用Asp.net技术完成系统设计。将系统应用到实践中,养殖户不需单独购买育种管理软件,只需登录到此系统的网络平台即可完成所有与育种相关的工作,可以降低猪场育种管理方面的成本。系统还可完成有遗传联系的猪场育种数据集成化,促进区域联合育种。与同类系统相比,系统添加了专家评估模块和猪性状优良库。专家可以分析猪场的育种现状,提供有针对性的技术服务。场方以猪性状优良库为参照标准,了解本场猪种优良情况,明确自身努力方向,提高本场种猪选育水平。     

牛冠状病毒核衣壳蛋白原核表达及鉴定

【目的】 诊断致犊牛腹泻冠状病毒。【方法】采集石河子、沙湾、奎屯等10个规模化奶牛场141份腹泻犊牛粪样,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)进行冠状病毒检测,PCR方法进行核酸复检。同时根据GenBank登录的牛冠状病毒 N基因序列,设计特异性引物,对Mebus分离株N基因进行扩增,克隆到PMD 19-T载体后,将测序正确的基因片段经EcoRI和HindIII双酶切后连接到PET-28a和PET-32a载体中,构建重组表达载体PET-28a-N和PET-32a-N,进行测序,亚克隆入BL21(DE₃)表达载体,用IPTG进行诱导重组菌,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。【结果】所采集141份腹泻犊牛粪便中,用ELISA检测阳性率70.21%;再用RT-PCR检测出阳性率为61.7%同时,克隆了牛冠状病毒N基因,片段大小为1 400 bp,双酶切鉴定目的条带正确,测序结果与标准序列的进行比对同源性达到98.22%,通过SDS-PAGE分析证实表达的重组蛋白PET-28a-N-DE₃相对分子质量为54KD;重组蛋白BCV-32a-N-DE₃相对分子质量为70KD,Western blot分析表明该重组蛋白BCV-32a-N-DE₃和BCV-28a-N-DE₃和可以与牛冠状病毒阳性血清发生特异性反应。【结论】犊牛冠状病毒是导致石河子、沙湾、奎屯等10个规模化奶牛场和部分肉牛场犊牛腹泻的主要病原;ELISA方法和RT-PCR方法结合应用检测犊牛冠状病毒效果具有参考意义。获得的牛冠状病毒N蛋白具有很好的免疫反应性,为牛冠状病毒诊断试剂研发奠定基础。     

牛病毒腹泻病毒(BVDV)E2重组蛋白ELISA检测方法的初步建立

[目的]为牛病毒性腹泻病毒抗体快速检测提供敏感、特异检测方法.[方法]重组质粒pET-(1-345)转化宿主菌BL21(DE),以IPTG进行诱导表达,使外源基因获得了较高水平的表达; Westem一blot检测表达产物反应原性,同时进行特异性检测;将收集的纯培养物进行超声波裂解后以His bind kit蛋白质纯化试剂盒纯化回收目的蛋白,再以纯化后的目的蛋白作为包被抗原进行方阵滴定试验,确定目的蛋白作为包被抗原的最佳稀释度.[结果]重组蛋白表达可达菌体蛋白总量的19.7;,且具有较好的反应原性和特异性,以此方法建立的间接ELISA方法对收集的约43头份血清样品进行检测, 检测阳性结果与进口试剂盒检测结果符合率达到93.55;.[结论]以BVDV E2重组蛋白作为抗原建立的间接ELISA检测方法是可行的,为其进一步的标准化莫定基础.