苹果病毒病害与无病毒苗繁殖

苹果病毒病害与无病毒苗繁殖于绍夫（山东省烟台市经济植物研究所）（上接１９９５年第１期５０页）三、病毒的脱除与检测（一）病毒脱除技术苹果病毒的脱除，通常采用热处理脱毒和茎尖培养脱毒等两种方法。１．热处理脱毒：据研究，苹果树在３７±１℃的温度下，生长１个...     

进境樱桃脱毒处理及健康评测技术研究

以进境樱桃为材料,用热处理结合茎尖培养法对樱桃李属坏死环斑病毒株进行脱毒技术研究,并应用PCR技术对脱毒苗进行健康检测。结果表明:0.5mm以下茎尖培养可以去除樱桃病毒,茎尖越小,去除病毒的效果越好,但成苗率降低;0.8mm以上茎尖培养不能去除病毒,但是成苗率较高。(37±1)℃高温连续处理3～4周后,剥取茎尖培养,可以提高去除病毒的效果,对成苗率影响不大,热处理时间越长,去除病毒效果越好。但被处理的试管苗易死亡,樱桃病试管苗在(37±1)℃高温下,以处理4周为宜。     

四个苹果砧木和品种苹果潜隐性病毒的变温热处理脱毒效果分析

以同时携带ASPV、ACLSV、ASGV 3种潜隐性病毒的"八棱海棠"、"小金海棠"、"华红"和"JAZZ"组培苗为试材,分别采用2种变温热处理方式结合茎尖培养的脱毒方法,运用RTPCR技术对组培苗内病毒进行跟踪检测,研究了不同苹果品种和砧木对变温热处理结合茎尖培养脱除苹果潜隐性病毒的反应以及脱毒苗的适宜检测时机。结果表明:变温热处理条件不同,病毒脱除效果不同。同一热处理条件下,不同苹果基因型其病毒脱除率也不同。"小金海棠"脱毒率最高,"JAZZ"和"八棱海棠"次之,"华红"最低。同时,不同病毒种类的被脱除率存在差异,ASPV最容易脱除,ACLSV居中,ASGV最难脱除。脱毒完成后180d,病毒总检出率最高;220d,3种病毒均有检出,检出顺序为ASGV最先,ACLSV次之,ASPV最晚。因此,对脱毒苗进行多次跟踪检测十分必要。     

小金海棠高效脱毒检测体系的探讨

 以小金海棠组培苗为试材，对其进行苹果潜隐病毒接种、脱毒及检测方法的研究，探讨了一种针对小金海棠的快速高效的脱毒检测体系。结果表明，恒温38℃处理20 d或变温38／22℃处理30 d并结合茎尖培养，对脱除小金海棠苹果褪绿叶斑病毒和苹果茎沟病毒的效果较好。离体条件下，指示植物‘苏俄苹果’和‘弗琴尼苹果’不适合检测该两种病毒，而用PAS—ELISA法检测结果较灵敏。     

苹果试管苗携带病毒种类数量与脱除效率的关系

以感染不同种类和数量病毒的富嘎、维纳斯黄金、新2001富士苹果试管苗为材料,分别采用热处理（36℃）和热处理结合化学处理（36℃+25μg/mL病毒醚）脱毒。处理过程中,维纳斯黄金表现出良好的耐热性,富嘎耐热性较差,处理结束时,新2001富士2组脱毒处理植株株高和增殖系数显著低于对照组植株。对再生植株的成活率分析发现,维纳斯黄金平均成活率最高,为83.2%,富嘎和新2001富士的差别不大,分别为64.0%和59.2%。采用RT-PCR方法对再生植株进行病毒检测。结果显示,富嘎、维纳斯黄金的脱毒率较高,分别为94.7%、88.9%;新2001富士的较低,为46.2%;ACLSV、ASGV和ASPV的平均脱除率分别为56.1%、41.0%和63.9%。比较不同品种和不同病毒的脱除效率发现,苹果病毒的脱除效率与病毒的数量不存在明显的相关性,但与病毒的种类关系密切。     

草莓病毒脱除方法的比较与评价

以感染病毒的草莓品种宝交早生为试材,利用多重RT-PCR同时检测SMoV和SMYEV技术,对茎尖培养、热处理、抗病毒药剂处理3种脱毒方法进行了比较和评价,以期为草莓脱毒苗培育提供重要参考.结果表明,0.2mn茎尖和0.5 mm茎尖都能够有效地脱除SMoV和SMYEV;热处理能够脱除草莓试管苗中的SMoV,但不能脱除SMYEv,39℃恒温处理30 d,SMoV脱除率达到63.0%;利巴韦林不能清除草莓植株体内的SMov和SMYEV.综合脱毒率和茎尖分化成苗率2个指标,认为0.5 mm茎尖培养是适宜的草莓病毒脱除方法.     

苹果病毒病与无病毒苗木的生产

(续上期42页) 苹果无病毒苗木的生产5如何脱除苹果潜隐性病毒 苹果的非潜隐性病毒因症状明显,故只需从未发生过花叶、锈果及绿皱果病的树上采集接穗即可。而苹果潜隐性病毒需要进行脱毒,目前脱毒的方法有多种,常用的方法有:5.1热处理脱毒法 热处理脱毒机理不十分清楚,目前一般认为高温能抑制病毒的增殖和扩散,并使苹果树的生长速度加快,超过病毒的增殖和扩散,使新长出的嫩梢梢尖部分不带病毒,利用这部分梢尖进行无病毒个体的培育。具体过程如下:(1)脱毒材料的准备:每年3～4月份盆栽山定子实生砧木,发芽后用切接法把待脱毒的接穗嫁接在山定子…     

4个苹果品种和2种砧木试管苗对热处理脱毒效应的研究

本试验采用变温热处理结合茎尖培养对4个苹果品种和2种砧木组培苗脱除潜隐性病毒的效应进行了研究.结果表明:不同的苹果品种和砧木耐热性不同.其中王林、珠美海棠的耐热性最强,L-6、金矮生的耐热性居中,首红、天汪1号耐热性最差.在相同处理条件下,不同的苹果基因型脱毒率存在差异.其中王林脱毒效率最高,3种病毒的同时脱除率达到100％;金矮生 ACLSV和ASPV两种病毒的同时脱除率达到100％;ASGV的脱除率也在80％以上;株美海棠、L-6、天汪1号、首红的脱除率较低.另外,不同病毒种类脱除的难易程度也存有差异,ACLSV最容易脱除,ASGV最难脱除,ASPV居中.     

红实美草莓脱毒技术研究

以感染病毒的红实美草莓为材料.时试管苗热处理脱毒和试管苗热处理后茎尖培养脱毒的成活率和脱毒率效果进行研究.试验结果表明,试管苗热处理后茎尖培养脱毒能显著提高脱毒效果,比试管苗热处理脱毒效果好;其中剥离0.5～0.6 mm的茎尖培养成苗,试管苗0.5～1.0 cm高时40℃(4 h)～250C(20 h)变温处理4周,再次剥离0.5～0.6 mm茎尖培养的脱毒效果最好,成活率85.6%,脱毒率98.8%.     

山楂属植物中苹果褪绿叶斑病毒的RT-PCR检测及病毒脱除方法

【目的】建立优化的山楂属植物苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)的RT-PCR检测体系,获得以山楂组培苗为试材的高效ACLSV脱除方法。【方法】基于转录组高通量测序解析的山楂属植物ACLSV基因组序列设计病毒检测引物,比较c DNA模板浓度、Taq DNA聚合酶种类及采样部位对病毒RT-PCR检测效果的影响。通过组培苗热处理和培养基中添加三氮唑核苷来脱除山楂植株中的ACLSV。【结果】基于转录组高通量测序获得的2个ACLSV山楂分离物的全基因组序列设计并筛选出适合于山楂属植物ACLSV的RT-PCR检测引物。建立了优化的山楂属植物ACLSV的RT-PCR检测体系。对80份山楂样品进行病毒检测,其中有18个样本检测出ACLSV,带毒率为22.5%。比较了热处理(37℃、30d)、化学处理(培养基中添加20 mg·L-1的三氮唑核苷,处理40 d)、热处理与化学处理结合方法(处理30 d)3种方法对山楂组培苗中ACLSV的脱除效率,表明热处理或热处理与化学处理结合的方法能够完全脱除山楂中的ACLSV,而单独化学处理的脱毒率不能达到100%。【结论】建立了优化的山楂属植物ACLSV的RT-PCR检测体系,表明组培苗热处理是脱除山楂植株中ACLSV的有效方法。     

‘阳光玫瑰’葡萄试管苗热处理结合茎尖和腋芽培养脱毒技术研究

为进一步优化葡萄试管苗脱毒体系,以携带葡萄蚕豆萎蔫病毒（GFabV）、沙地葡萄茎痘相关病毒（GRSPaV）、葡萄灰比诺病毒（GPGV）、葡萄卷叶相关病毒–3(GLRaV-3)和葡萄病毒E(GVE)共5种病毒的‘阳光玫瑰’葡萄试管苗为材料,研究了热处理方式和时间以及热处理后茎尖和腋芽培养对脱毒的影响。结果表明,热处理方式影响试管苗的存活率和脱毒效率,以38℃/光照8 h+32℃/黑暗8 h变温处理效果最佳,其次为38℃/光照16 h+32℃/黑暗8 h变温处理以及38℃恒温/（光照16 h+黑暗8 h）处理。取38℃/光照8 h+32℃/黑暗8 h热处理10、15、20、25、30和40 d的试管苗1.5 mm左右的茎尖和茎尖下第1、2腋芽接种培养,茎尖存活率高于腋芽,繁殖成苗后检测,均脱除了上述5种病毒,其中热处理10 d的平均脱毒率为52.38%,25和30 d的脱毒率均达100%;随热处理时间延长,接种茎尖和腋芽的存活率下降,故热处理时间以25 d为宜。     

梨树苹果茎沟病毒的脱毒技术研究

１９９３—１９９６年,采用热处理材料茎尖培养及试管苗热处理方法,对１３个梨品种及矮化砧材料进行苹果茎沟病毒脱毒试验的结果表明,二者对茎沟病毒的脱除率分别较单纯茎尖培养高５７．０％和６２．４％。脱毒苗生根率和移栽成活率分别达７０％和８０％。     

苹果和梨树茎尖培养结合热处理脱病毒研究

1995～2000年,以18个苹果品种和15梨品种为试材,以茎尖培养结合热处理进行脱毒研究.用酶联免疫吸附法检测结果表明,苹果茎沟病毒和褪绿叶斑病毒脱毒率可分别达到75%以上和100%.现已获得16个苹果品种和6个梨品种的无病毒母本树.     

不同苹果品种和砧木的热处理脱病毒效应

以１３个苹果品种、砧木为试材,采用热处理和茎尖培养相结合的方法脱除病毒。结果表明：Ｍ４及国光的脱病毒效果最好,热处理３０天以上,脱毒率为８３．３％;金矮生和长富２号经２１天热处理,脱毒率也可达８０％;北斗和新乔纳金的脱毒率稍低,但也比传统热处理绿枝接高３６．７％和３０．０％。另外,各试材热处理后的死苗率和死苗高峰期有较大差异,而且茎尖培养绿枝芽的分化反应也不同。     

克服自交不亲和的几种处理方法

1、热处理的八朔柑花粉授粉 采集八朔柑花粉,将其分成四组,各组按如下之一种方法处理:40℃处理30分钟;40℃处理60分钟50℃处理30分钟,50℃处理60分钟(以下简称40℃×30′40℃×60′50℃×30′50℃×60′)。之后,将热处理后的花粉分别授到八朔柑未成熟花(长度约为成熟花的一半)的柱头上,每处理均授30朵花,授粉后套袋一周。     

苹果试管苗热处理脱毒法的研究

苹果褪绿叶斑病毒（简称ＣＬＳＶ）、茎沟病毒（简称ＳＧＶ）,是感染苹果的两种重要的潜隐性病毒,在苹果上通常引起慢性衰退症。当用感病材料嫁接时,往往导致衰退病急性暴发,给生产造成毁灭性损失。ＣＬＳＶ和ＳＧＶ均是通过嫁接传染,目前尚无有效的预防和治疗方法,而采用脱毒方法杜绝苗木带毒,把好育苗关,是防治病毒的根本出路。热处理是脱除苹果病毒的主要方法,这在国内已有较多的报道。但直接对试管苗进行热处理脱毒,尚未见报道。本试验系统研究了茎尖培养的试管苗,在光照培养箱内直接进行热处理的方法及优点,并采用酶联免疫…     

苹果品种热处理脱除病毒试验小结

果树病毒病害的防治是果园病虫害综合防治的内容之一。采用无病毒材料从事苹果栽培是防除病毒病害的根本途径。在欧洲多数果树生产发达国,生产无病毒苗木,一般先采用热处理的方法获得无病毒材料,经检测确认无毒后,正式列入繁殖计划。热处理脱毒作为常规手段用于实践,却很少见有关热处理过程中植株反应及操作技术环节的报导。为了掌握苹果品种热处理脱除病毒的技术细节,1992年1月至5月,在联邦德国果树植保研究所(位于多森海姆)进行了本试验。     

通过玻璃化超低温处理脱除草莓轻型黄边病毒(SMYEV)研究

以草莓品种明宝为材料,取茎尖做初代培养,继代扩繁5次后,取2mm左右的茎尖,利用玻璃化超低温技术对SMYEV进行脱除,并利用结合内标的多重RT-PCR技术对再生植株进行病毒检测。结果表明,在病毒脱除过程中,预培养蔗糖浓度为0.5mol/L,处理3d;装载处理为25℃,60min;玻璃化处理为0℃,120min;液氮处理60min后,进行40℃水浴2min,草莓茎尖的存活率为76%,而草莓轻型黄边病毒的脱除率为95%。只有通过液氮处理才可以脱除该病毒,液氮处理前的玻璃化处理脱毒率为0。利用超低温脱毒法可以简便有效地脱除SMYEV。     

苹果组培苗脱毒试验

热处理是苹果获得无病毒原种材料的有效途径之一。我们研究了不同品种苹果组培苗热处理对褪绿叶斑病毒、茎沟病毒的脱毒率和影响组培苗脱毒的因素 ,现报道如下。(1)材料和方法　分别从经指示植物和血清酶联免疫检测带有褪绿叶斑病毒、茎沟病毒的国光、金晕、秋富 1号、优良短枝、北斗苹果树正在生长的新梢上取茎尖 ,用 70 %酒精处理 4 0秒 ,再用 0 .1%升汞处理 8分钟 ,用无菌蒸馏水冲洗 3～ 4次 ,接种到外植体培养基MS+6 - BA1.5 mg/ L上 ,茎尖正常分化后 ,移入 MS+6 - BA1.2 mg/ L +IAA0 .3mg/ L +蔗糖 30 g/ L+琼脂 7g/ L的分化培…     

虎雪兰玻璃化超低温法脱毒技术的研究

以兰属花卉虎雪兰组培原球茎为试材,采用玻璃化超低温法对兰花病毒脱除进行了研究,以期为虎雪兰玻璃化超低温法脱毒体系的建立提供参考依据。结果表明:在蔗糖浓度0.5 mol·L-1预培养4 d,然后在蔗糖0.6 mol·L-1加载液冰上处理50 min,之后转入PVS2溶液冰上玻璃化处理120 min,再液氮冷冻40 min,37℃水浴解冻3 min,最后卸载液(1/2MS+1.2 mol·L-1蔗糖)卸载20 min,待恢复培养后,原球茎成活率可达到65%以上,随机检测不同处理样品的脱毒率可达97%。