甲*福*三对辣椒疫霉和白绢病菌增效作用的测定

室内测定了甲霜灵、福美双、三唑酮不同比例混配对辣椒疫霉菌(Phytophthoracapsici)和辣椒白绢病菌(Sclerotiumrolfsii)的增效作用,结果表明,5∶20∶6、5∶10∶3两种混配比例对两种病菌均具有增效作用,对辣椒疫霉菌的增效倍数分别为1.59、1.81,对辣椒白绢病菌的增效倍数分别为2.32、2.00.     

辣椒疫霉菌在土壤中消长动态研究

为有效防治辣椒疫霉病，对辣椒疫霉病田土壤进行了病菌分离、菌株配对培养、越冬存活形式等研究。结果表明：病田土壤中的疫霉菌数量有明显的季节性变化。以5-8月最多，冬季和初春最少；湖南长沙地区疫霉菌的配对型有A2和A1A2两种类型，多以卵孢子形态在土壤中越冬；病田土壤和植物病残体是辣椒疫霉病最主要的初侵染源。     

辣椒土传病原菌三重PCR检测体系的建立与应用

【目的】建立简便、快速、准确同时检测辣椒疫霉(Phytophthora capsici)、白绢病菌(Sclerotium rolfsii)和青枯病菌(Ralstonia solanacearum)的多重PCR检测体系,为辣椒多种土传病害同时早期诊断提供技术支撑。【方法】以3种辣椒土传病害病原菌辣椒疫霉、白绢病菌和青枯病菌为研究对象,参考相关文献筛选出3种病原菌的3对特异性引物PCA1F/PCA1R、SCR-F/SCR-R和RalfliC-F/RalfliC-R,以引物浓度、退火温度、循环次数及延伸时间为变异因子,探索最佳反应体系,建立三重PCR检测方法,并基于田间实际发病样品对方法进行验证。【结果】优化的三重PCR反应体系25.0μL:3对引物PCA1F/PCA1R、SCR-F/SCR-R和RalfliC-F/RalfliC-R浓度分别为0.24、0.24和0.28μmol/L,DNA模板各10 ng,2×Multiplex PCR Mix 12.5μL,ddH2O补足至25.0μL。最佳扩增程序：94℃预变性1 min;94℃30 s,55.8℃30 s,72℃45 s,进行35个循...     

中、草药水提取物抑菌活性的测定

以辣椒疫霉菌、立枯丝核菌、番茄枯萎病菌、番茄早疫病菌、禾谷镰刀菌、大豆疫霉菌、番茄叶霉菌、烟草赤星病菌及玉米小斑病菌为供试菌种 ,用 30种中、草药的水提取物对其进行了抑菌活性测定。结果表明 ,大蒜提取液对立枯丝核菌、辣椒疫霉菌丝生长抑制率达 10 0 % ;猪胆汁对辣椒疫霉菌丝生长抑制率达 93.2 2 % ,对大豆疫霉菌丝生长抑制率达 80 .94 % ;金银花提取液对大豆疫霉菌丝生长抑制率达 10 0 % ;连翘提取液对大豆疫霉菌丝生长抑制率达 76 .10 % ;L S- 1为本课题组自行研制 ,由苦参、黄柏、蛇床子等 10余种中药组成 ,其对番茄早疫病菌、禾谷镰刀菌及大豆疫霉菌丝生长抑制率为 10 0 % ,对辣椒疫霉菌丝生长抑制率达 81.4 6 %以上 ,在病菌孢子萌发的抑制作用中对番茄枯萎病菌、番茄叶霉及玉米小斑病菌孢子萌发抑制率分别达到 90 .71% ,85 .71%和 77.14 %。     

杀菌剂及其不同配比对辣椒疫霉菌的室内抑制效果

采用生长速率法研究了18种杀菌剂对辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)的室内抑菌效果。研究结果表明:辣椒疫霉病菌对化学药剂表现敏感。其中50%烯酰吗啉WP、250 g/L吡唑嘧菌酯EC、100 g/L氰霜唑SC、20%氟吗啉WP、70%代森锰锌WP、500 g/L氟啶胺SC对辣椒疫霉菌抑菌效果较好,其EC50均20μg/m L。5种杀菌剂的不同配比中,20%氟吗啉WP∶50%烯酰吗啉WP(1∶5)和500 g/L氟啶胺SC∶100 g/L氰霜唑SC(3∶3)的增效作用最为明显,其共毒系数分别为2 409.84和2 321.76。筛选出了对辣椒疫霉病菌室内抑菌效果较好的药剂,为进一步田间药效试验奠定了基础。     

辽宁省辣椒疫霉菌生理小种鉴定

辣椒疫病是辽宁省辣椒生产上的重要病害,开展辽宁省辣椒疫病病菌生理小种鉴定,可为抗疫病辣椒新品种的选育提供理论依据。对来源于辽宁省不同辣椒产区的30个病样进行了分离鉴定,经致病性测定和形态特征观察,确定所分离的病菌均为辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian);利用中国辣椒疫霉菌生理小种鉴别通用寄主,对其进行了生理分化鉴定。根据供试菌株在鉴别寄主上的抗感反应,鉴定结果表明:辽宁地区辣椒疫霉菌划分为1号、2号和3号生理小种,发生频率分别为3.33%、26.67%和70%;其中3号生理小种为辽宁省辣椒疫霉菌的优势小种。从不同地区测定结果表明不同生理小种的分布与地域间的相关性不强。     

辣椒疫霉病菌拮抗菌的筛选鉴定及生防潜力

从湖南省长沙、衡阳、岳阳等地辣椒种植区土样中分离筛选出6株拮抗辣椒疫霉病菌的放线菌，采用含毒介质法检测，发现L57–60菌株发酵液的5倍稀释液对辣椒疫霉菌的抑制效果达到98.61%；通过形态学特征观察、生理生化特性鉴定以及16S rDNA、recA基因、atpD基因和rpo B基因联合建树分析，确定L57–60菌株为橄榄色链霉菌(Streptomycesolivaceus)。抗菌谱测定结果表明，L57–60菌株发酵液对辣椒枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、烟草炭疽病菌(Colletotrichummicotianae)、水稻纹枯病菌(Thanatephoruscucumeris)等12种病原菌均有拮抗作用。运用正交试验对L57–60菌株发酵培养基的碳源和氮源配比进行优化，结果最适培养基为高氏1号培养基，大米粉质量分数4%，黄豆粉质量分数0.5%。盆栽试验结果表明，L57–60菌株发酵液对辣椒疫霉的防效达到73.1%。     

菜病清对辣椒疫霉病菌的室内毒力测定

采用生长速率法对陕西省农业院新农药研究开发中心最新研制的高效，低毒防治蔬菜病害杀菌剂菜病情进行了室内毒力测定试验，结果表明，菜病清对辣椒疫霉病菌的增效系数为１７２．２１，明显大于１００，说明菜病清对辣椒疫霉病菌的毒效明显大于其有效成分单独使用时的毒效，增效作用显著。     

辣椒几丁质酶基因受疫霉菌及灰霉菌侵染时的表达变化

通过对已知全部辣椒表达序列标签(EST)数据分析发现,辣椒中至少含7个编码几丁质酶基因(分别为CaCHT-1、CaCHT-2、CaCHT-3、CaCHT-4、CaCHT-5、CaCHT-6和CaCHT-1.1)。采用半定量RT-PCR技术,分析辣椒幼苗在分别接种疫霉菌和灰霉菌后CaCHTs表达强度的变化。结果表明:在受到辣椒疫霉菌侵染时,除CaCHT-6外,CaCHT-1、CaCHT-2、CaCHT-3、CaCHT-4、CaCHT-5和CaCHT-1.1的表达水平均明显上升;而受到辣椒灰霉菌侵染时,CaCHT-1、CaCHT-4、CaCHT-5和CaCHT-1.1的表达水平均有不同程度的上升,CaCHT-3未检测到有表达,CaCHT-2和CaCHT-6的表达水平无可见的变化。结果提示,辣椒几丁质酶基因大部分成员均可受辣椒疫霉菌和灰霉菌的侵染诱导表达。     

新型生物杀菌剂新奥霉素对七种蔬菜病原菌的室内毒力测定

为明确新奥霉素对蔬菜病原菌的抑制活性,采用菌丝生长速率法测定了新奥霉素对7种蔬菜病原菌的毒力。结果表明,新奥霉素对7种蔬菜病原菌均具有一定的抑制作用,其中对疫霉菌表现出较强的抑制作用,对大豆疫霉根腐病菌(Phytophthora sojae)、茄绵疫病菌(Phytophthora parasitica)和辣椒疫病菌(Phytophthora capsici)的EC50分别为7.18、11.17、76.90 mg/L;而对茄子褐纹病菌(Phomopsis vexans)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)和番茄早疫病菌(Alternaria solani)的抑制作用较弱,其EC50分别为83.85、105.20、178.29、195.28 mg/L。     

辣椒疫病生防菌的筛选、鉴定及其抑菌机理初探

采用平板稀释法和平板对峙试验,从武汉、荆州、宜昌和荆门等地的辣椒根际土壤中分离到185株细菌,筛选到1株具有高效拮抗辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)的生防菌Bs04。通过形态学观察、生理生化指标测定、16S r DNA序列测定及进化树构建,确定菌株Bs04为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。Bs04对辣椒疫霉菌丝生长抑制率达80%,同时对烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica var.nicotiana)、棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sb.vesinfectum)和黄瓜立枯病菌(Rhizoctonia solani)具有明显的抑制作用。利用光学显微镜观察Bs04对辣椒疫霉菌丝形态的影响,发现菌丝分支增多、顶端畸形、原生质浓缩及生长缓慢等现象,表明Bs04具有显著的抑菌作用。     

不同甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂对辣椒疫霉菌的离体活性及防病方式的影响

比较了4种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂对辣椒疫霉菌的离体活性及其对辣椒疫霉病的保护和治疗作用.结果表明:醚菌酯、嘧菌酯、烯肟菌酯和唑菌胺酯对辣椒疫霉菌菌丝生长的抑制作用相对较差,EC50分别为8.88,34.64,125.90,17.04μg·mL-1;对孢子囊形成具有较高抑制活性,EC50分别为1.31,3.43,6.92,1.92μg·mL-1;对孢子囊萌发活性更高,EC50分别为0.94,2.50,1.73,0.76μg·mL-1.活体试验表明,4种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂对辣椒疫霉病具有很好的保护和治疗作用,且保护作用强于治疗作用.4种杀菌剂保护作用的防病效果均在67.9%以上.     

香蕉枯萎病拮抗细菌对4种土传植物病原真菌的抑制作用

测定了从果园土壤中分离的4株香蕉枯萎病拮抗细菌对粉蕉根腐病菌(Pythiumsp.)、辣椒白绢病菌(Sclerotium rolfsii)、节瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.binincasae)的抑菌效果以及对香蕉枯萎病的防治效果。结果表明,3种拮抗细菌bio-B3、bio-d4和bio-P对4种病菌的生长具有显著的抑制作用,产生明显的抑菌带,拮抗细菌bio-d5对辣椒白绢病菌不产生抑菌带,但对其他3种病菌均产生明显的抑菌带;4种拮抗菌株对节瓜枯萎病菌和香蕉枯萎病菌孢子萌发具有显著的抑制作用,其发酵原液对病菌孢子萌发的抑制率较高,抑制率为76.4%~100%,随着稀释倍数的增加,其抑制效果逐渐降低;拮抗细菌bio-B3、bio-d4b、io-d5发酵液1002、00和300倍稀释液对香蕉枯萎病的防治效果为53.3%~80.2%,它们之间无显著性差异,但显著大于bio-P和恶霉灵的防治效果。     

陕西辣椒疫病病原鉴定及其防治剂的室内筛选

通过对陕西辣椒疫病病原菌的分离培养和形态学观察,将引起陕西辣椒疫病的病原菌鉴定为辣椒疫霉(Phytophthora capsici Leonia);利用一套鉴别寄主,通过常规抗病性鉴定技术,对陕西辣椒疫霉菌进行生理小种鉴定,并采用菌丝生长抑制法和孢子囊萌发抑制法测定了12种常用的防治剂对辣椒疫霉菌的毒力.结果表明:陕西辣椒疫霉菌分离物属于生理小种3;不同供试药剂对菌丝生长和孢子囊萌发的抑制中浓度差异达到极显著水平;对辣椒疫霉菌菌丝生长抑制效果较好的是辣椒病菌清和活康壮,EC50分别为252.76 μg/mL(r=0.8669)和376.18 μg/mL(r=0.9304);对孢子囊萌发抑制效果较好的是69%烯酰吗啉WP和80%代森锰锌WP,EC50分别为317.61 μg/mL(r=0.9767)和421.70 μg/mL(r=0.9573);60%椒霸菌毒克星WP和50%扑海因WP对辣椒疫霉菌菌丝生长和孢子囊萌发几乎没有抑制作用.     

水杨酸等4种诱导剂诱导辣椒抗疫病作用的研究

 对水杨酸(SA)、CaCl2、KH2PO4和VA菌根4种诱导剂诱导辣椒抗疫病的作用试验结果表明,4种诱导剂中,只有SA能显著提高辣椒的抗疫病性,其它3种诱导剂对辣椒的抗性无明显影响。SA处理的最佳浓度范围为0.15～0.3g·L-1,SA处理后1～5d接种辣椒疫霉菌,辣椒植株开始表达出较高的诱导抗性,这种抗病作用可持续20d以上。低浓度的SA(<0.3g·L-1)对疫霉菌没有直接的抑菌作用,说明辣椒苗产生的抗性主要是诱导抗性。     

5种植物乙醇提取物及其复配物对荔枝霜疫霉菌的抑菌活性

[目的]研究5种植物乙醇提取物及其复配物对荔枝霜疫霉菌的抑菌活性,为开发荔枝水果保鲜剂和植物源复配杀菌剂提供科学依据.[方法]采用超声波辅助提取法提取丁香、黄柏、细辛、苦参和花椒等5种植物的乙醇提取物,利用生长速率法和孢子囊萌发法探讨5种植物乙醇提取物及其复配物对荔枝霜疫霉菌的抑制作用.[结果]丁香、黄柏和细辛在提取物浓度5.000 mg/mL下对荔枝霜疫霉菌的抑菌率均为100.00%,苦参和花椒的抑菌率分别为83.00%和74.00%.丁香、细辛、黄柏、苦参和花椒的乙醇提取物对荔枝霜疫霉菌的抑菌中浓度(EC50)分别为0.30、0.51、0.58、1.21和1.48 mg/mL.在1:1 (V/V)的配比下,苦参与花椒乙醇提取物的复配物抑制荔枝霜疫霉菌菌丝生长的增效比率(SR)最高,为4.59,表现为增效作用;丁香+黄柏、丁香+细辛和黄柏+细辛复配物的SR则在0.5~1.5,表现为相加作用.[结论]丁香、黄柏、细辛、苦参和花椒等5种植物的乙醇提取物对荔枝霜疫霉菌有较强的抑菌活性,其复配物对抑制荔枝霜疫霉菌菌丝生长具有增效或相加作用.在抑菌复配剂配伍时,可从降低成本和保护野生植物资源角度考虑选择适当的植物种类.     

菜病清对辣椒疫霉病菌的室内毒力测定

采用生长速率法对陕西省农业科学院新农药研究开发中心最新研制的高效、低毒防治蔬菜病害杀菌剂菜病清进行了室内毒力测定试验。结果表明,菜病清对辣椒疫霉病菌的增效系数为１７２．２１,明显大于１００,说明菜病清对辣椒疫霉病菌的毒效明显大于其有效成分单独使用时的毒效,增效作用显著。     

寄主诱导的基因沉默对辣椒疫霉菌的影响

由辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)引起的辣椒疫病是生产中最严重的病害之一。本研究利用病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing, VIGS)技术,通过瞬时表达疫霉菌基因沉默信号,在本氏烟草(Nicotiana benthamiana)-疫霉菌互作系统中建立寄主诱导的基因沉默(host-induced gene silencing,HIGS)体系,为防治辣椒疫病提供新思路。首先,在TRV2-GFP和对照TRV2-GUS的本氏烟叶片上接种表达GFP的致病疫霉菌菌株14-3-GFP,结果显示TRV2-GFP植株中致病疫霉菌的GFP表达显著降低,表明利用VIGS技术构建的HIGS体系在本氏烟草—疫霉菌体系中可行。此外,选取辣椒疫霉菌致病相关基因 PcAvh1、 Pchmp1和 PcGK4,构建到TRV2载体上,通过在本氏烟草中表达结合接种辣椒疫霉菌,结果显示,与对照相比植物生长表型无明显变化,表达TRV2- PcGK4的植株对辣椒疫霉菌表现抗病,表达TRV2- PcAvh1和TRV2- Pchmp1的植株对辣椒疫霉菌的抗感性没有显著影响,表明 PcGK4可能是辣椒疫霉菌致病必须的基因之一。以上结果表明,利用HIGS技术沉默辣椒疫霉菌 PcGK4基因可有效降低辣椒疫霉菌对寄主的侵染,HIGS技术可用于辣椒疫霉菌致病关键基因的筛选和鉴定。     

农抗120和百菌清对辣椒炭疽病菌联合毒力的测定

在室内用平皿菌落直径法测定了农抗120、百菌清及其4种不同配比的混剂对辣椒炭疽菌的菌丝抑制作用和毒力。结果表明,农抗120和百菌清对辣椒炭疽病菌EC50值是2777．2mg／L和1090．7mg／L,农抗120的毒力小于百菌清;农抗120与百菌清以4：1～8：1混配增效系数(SR)为2．04～3．93,具有显著的增效作用,其中农抗120与百菌清6：1增效系数最大,达3．93,为最佳配比;农抗120与百菌清6：1混配对9种植物病原真菌的平均抑菌率为84．4％,显著高于农抗120的75．5％和百菌清的66．0％。     

致病疫霉拮抗菌筛选及复合发酵液的抑菌作用研究

为了利用微生物源活性物质控制马铃薯晚疫病,对显著抑制致病疫霉菌丝生长的拮抗微生物进行了筛选,并研究其单一发酵液和复合发酵液对致病疫霉的抑制作用。结果表明:从36种微生物中筛选出了16种对致病疫霉菌丝生长有显著抑制作用的微生物,其中B3282(细菌)、枯草芽孢杆菌和A32810(放线菌)这3种微生物的抑菌率均在70%以上;A4228、A32912、A5253和A32914等4种放线菌的抑菌率均在60%以上。对36种微生物单一发酵液的抑菌试验表明:仅白菜黑斑病菌、梨黑斑病菌和A32914的发酵液对致病疫霉表现出较强的抑制作用,抑菌率分别为80.51%、70.20%和48.91%;进一步将36种单一发酵液两两复合后发现,部分复合发酵液表现出了明显的增效作用,其中抑菌率最高及增效作用最强的是梨黑斑病菌和白菜黑斑病菌浓度为10 mg/ mL的复合发酵液,抑菌率达90.38%。