不同质粒在大肠杆菌宿主细胞中的不稳定性研究

对几种不同的质粒在相同宿主中的稳定性进行检测,结果表明,在非选择压力下,４种不同的质粒在大肠 杆菌宿主细中的稳定性有明显的差异,其中,ＰＵＣＧ４１８最稳定,该质粒失去的速率仅为０．５％;     

三种质粒DNA对不同大肠杆菌菌株转化率的比较

将重组ＤＮＡ导入细菌细胞是分子克隆的中心工作之一．转化率的高低直接关系到实验成败．使用３种质粒ｐＢＲ３２２、ｐｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ和ｐＵＣ１８，对３种大肠杆菌菌株进行转化，比较转化率，推荐使用１００ｍｍｌ／ＬＣａＣｌ２，ｐＨ６～８和４℃１２ｈ作为转化的优选条件。     

运用随机扩增多态性和质粒指纹图谱法进行大肠杆菌O157的分子多态性分析

为了解大肠杆菌O157分离菌株的分子特征,建立了随机扩增多态性和质粒指纹图谱2种分型方法,对10株从粪便和动物组织分离的大肠杆菌O157进行了分型研究,结合主要毒力基因的检测和药敏试验,以进一步验证分离菌株之间的亲缘关系.随机扩增多态性分析分别在遗传距离为0.89、0.973处将所有细菌分类:其中有2株菌株具有相似的扩增图谱,可以聚为同一类,亲缘关系较近,其余8株细菌类聚为两大类.质粒图谱分析在不同的进化距离处将所有细菌分类,形成具有复杂分枝的树状图.毒力因子检测结果显示:10株分离菌株均含有hly、eae、uid、flich7基因.药敏试验幸明:其中2株细菌具有不同于其他8株细菌的耐药谱,与随机扩增多态性分析和质粒图谱分析相一致.比较随机扩增多态性和质粒指纹图谱2种分型方法发现:它们虽具有相似的结果,但质粒图谱法分析更能反映出菌株之间的亲缘关系.     

利用质粒指纹图谱法对大肠杆菌耐药质粒遗传特性的研究

为研究鸡源大肠杆菌耐药性及耐药的生物学特性，选用30株来自不同地区的鸡源大肠杆菌，在药敏试验的基础上，对耐药菌质粒进行了指纹图谱分析。结果表明：30株鸡源大肠杆菌对氨苄青霉素、青霉素、四环素的耐药率为100.00%，对氯霉素、庆大霉素、利福平、红霉素的耐药率为60.00%-93.33%，多重耐药率为26.67%-80.00%，质粒图谱比较发现：来源相同的菌株质粒图谱相同或相似；来源不同的菌株质粒图谱一般不同。聚类分析表明：30株大肠杆菌遗传距离在0.224-0.416处聚成五类，其中同一地区聚为一类。这表明同一地区的大肠杆菌病的病原之间有一定的同源性。其次，这30株大肠杆菌在遗传距离为0.864处聚成一大类，说明它们之间有一定程度的遗传相关性。     

麝致病性大肠杆菌的质粒DNA分析

[目的]将麝致病性大肠杆菌从分子水平上分型,为麝大肠杆菌的分子流行学研究提供基础材料。[方法]采用Lysis Triton法对24株麝致病性大肠杆菌进行质粒抽提,并用HindⅢ、EcoRⅠ及BamHⅠ3种内切酶对质粒进行单酶切。[结果]质粒得率为91.6%,24株麝致病性大肠杆菌具有相同或相似的质粒图谱。[结论]质粒DNA分析为四川养麝场致病性大肠杆菌的分子流行病学提供了科学依据。     

不同条件对大肠杆菌K12转化质粒pKD46效率研究

研究了不同处理方法、不同生长时期以及热激时间等因素对Escherichia coli K12转化质粒pKD46效率的影响。结果表明,在OD600为0.43时,利用RbCl法制备的新鲜感受态细胞,在42℃热激90s时,对质粒pKD46的转化效率最高,可达到5.4×106。同时,优化了其他影响转化效率的因素。     

麝致病性大肠杆菌的质粒DNA分析(英文)

[Objective] The pathogenic Escherichia coli in musk deer was classified at molecular level to provide basic materials for molecular epidemiology of pathogenic Escherichia coli in musk deer. [Method] Plasmids from 24 pathogenic Escherichia coli in musk deer were extracted by the Lysis Triton method, and then identified by single enzyme digestion with three endonucleases of Hind Ⅲ, EcoR Ⅰ and BamH Ⅰ. [Result] The yield rate of plasmids was 91.6%, and 24 pathogenic Escherichia coli in musk deer had the identical or similar plasmid profiles. [Conclusion] Plasmid DNA analysis offers scientific basis for molecular epidemiology of pathogenic Escherichia coli in musk deer in Sichuan Institute of Musk Deer Breeding.     

中药连翘对大肠杆菌R质粒消除作用的研究

目的：探讨中药连翘对大肠杆菌R质粒的消除作用,使其重新恢复对抗生素的敏感性。方法：将大肠杆菌DH5α制备成感受态后,导入含有Ampr基因的质粒,再用连翘作用转化后的大肠杆菌,经培养12h后,挑出亚抑菌浓度的菌落涂于含有Amp的平板上培养24h,观察有无细菌生长,并通过电泳检测是否消除质粒。结果：在含有Amp平板上无大肠杆菌生长,在不含Amp的平板上细菌生长良好,质粒DNA电泳检测结果经中药作用过的大肠杆菌无质粒带,表明连翘对质粒具有消除作用。     

黄芩和黄连对大肠杆菌R质粒消除作用的实验研究

目的：研究黄芩和黄连对大肠杆菌Ｒ质粒的消除作用。方法：以黄芩和黄连的提取物为质粒消除剂，携带Ｒ质粒的多重耐药性大肠杆菌Ｅ．１０２株为靶细胞，采用倍比稀释法和影印培养法及Ｋａｄｏ法，观察黄芩和黄连作用不同时间对大肠杆菌Ｒ质粒表达的影响。结果：黄芩和黄连作用２４ｈ，对大肠杆菌Ｒ质粒的消除率为５％￣２．４２％，延长时间至４８ｈ，消除率为２６．１４％￣２２．５７％。两个时间的消除率差异有显著意义（Ｐ〈０．     

大肠杆菌质粒与喹诺酮耐药性关系的研究

为研究大肠杆菌质粒与喹诺酮耐药性的关系，临床分离32株耐喹诺酮药物的致病性大肠杆菌，经质粒消除剂溴化乙淀（EB）、硫酸黄连素（BS）分别处理24h和48h，其中4株对喹诺酮的耐药水平明显降低。经消除剂作用的菌株提取质粒进行电泳检测， 结果只有大肠杆菌CE01[其中氧 氟沙星（OFL）的最小抑菌浓度（MIC）＞50μg/mL]的质粒带发生变化，且该质粒的转移与喹诺酮抗性有关。经消除剂BS作用24h，在含OFL 20μg/mL的琼脂不能生长的CE01XC1菌株其质粒带浓度显著降低；作用48h后，在含OFL 20μg/mL琼脂不能生长的CE01XC2菌株其质粒带被消除；BS作用48h后在含OFL 20μg/mL琼脂仍然生长的CE01XC3菌株及质粒带几乎未改变。另外3株耐药水平降低的菌株质粒带无变化。结果表明：大肠杆菌CE01含有与喹诺酮药物抗性有关的质粒，这一质粒被消除剂消除后，CE01菌株的耐药性显著下降，对OFL的MIC由大于50μg/mL变为小于20μg/mL。其它3株经质粒消除剂作用耐药水平降低的菌株可能是细胞膜通透性改变导致耐药。     

四川省规模化猪场大肠杆菌质粒DNA分析

在系统鉴定、药敏试验和血清型鉴定的基础上,对23株致病性大肠杆菌和5株标准血清型大肠杆菌进行了质粒DNA分析.结果表明,菌株的质粒获得率为100%,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,来源不同的菌株具有不同的质粒图谱.质粒图谱与血清型及耐药谱之间无明显关系.     

河南省鸡致病性大肠杆菌耐药性质粒的研究

对河南省32个县市的93株鸡致病性大肠杆菌进行耐药性质粒的分析,并对其中12株100%耐庆大霉素(GM)的菌株进行耐药质粒的转化试验,成功获取了2个转化子。质粒检测结果表明:93株鸡致病性大肠杆菌可以分为49种质粒图谱类型,质粒电泳条带最多6条,最少1条,其中质粒图谱为1条条带的菌株占测试菌株的45.16%;同一地区、同一鸡场菌株的质粒图谱相同或相似,不同地区菌株的质粒图谱不同,但它们之间会有相同或相近的少量流行质粒存在。质粒转化结果表明:同一质粒可编码1个至数个抗药性基因,不同质粒可以携带相同或不同的抗性基因,证明了质粒可以传递多种耐药性,细菌的抗药性与抗药性质粒的转移有很大关系。     

麝致病性大肠杆菌的质粒DNA分析

1材料与方法1．1菌株从四川养麝研究所白沙养麝场和金凤山养麝场病麝和死亡麝的化脓灶及脓汁、实质器官分离鉴定的24株麝致病性大肠杆菌菌株,其中Ecoli-1、Ecoli-7、E．coli-10、Ecoli-12、Ecoli-15、E．coli-16、Ecoli．17、E．coli-18、E．coli-23从金凤山养麝场分离,其余15株从白沙养麝场分离,均由四川农业大学都江堰分校微生物实验室保存。     

鸡致病性大肠杆菌的质粒DNA指纹图谱分析

从山东省诸城地区6个集约化养鸡场的大肠杆菌感染鸡群的死鸡、毛蛋的心血中分离到32株细菌,经形态、培养特性及生化反应鉴定为大肠埃希氏杆菌(Escherichia.coli)简称大肠杆菌(E.coli)。对其作动物回归试验结果表明,全部为致病性大肠杆菌。从而证明从死鸡(毛蛋)心血中分离到的大肠杆菌与其致病性密切相关。将分离到的鸡大肠杆菌的14株优势血清型菌株进行了质粒DNA分析,通过碱裂解法小量提取质粒,然后对质粒进行了琼脂糖凝胶电泳分析,用hindⅢ限制性内切酶对质粒进行了酶切分析,结果表明:质粒的得率为100%,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,来源不同的菌株的质粒图谱一般不同。将血清型和质粒图谱比较发现:同一血清型可以有不同的质粒图谱,不同血清型可以有相似的质粒图谱,血清型与质粒图谱没有直接的联系。本试验同一来源菌株的质粒指纹图谱相同、但它们的血清型不一致的现象可作为自然条件下同一质粒在不同血清型大肠杆菌中扩散转化的一个分子生物学依据。     

水杨酸钠、氯霉素诱导和临床分离大肠杆菌的交叉耐药性研究

目的 临床分留和诱导对以上菌株分别测喹诺酮类、氨基糖苷类、磺胺类、大环内脂类、头孢菌素类、β-内酰胺类,氯霉素类等23种药物的交叉耐药性.方法 将ATCC25922接种于含有2倍最小抑菌浓度(MIC)的氯霉素和氯霉素(含5 μM水杨酸钠)营养肉汤中培养传代,可获得高耐药大肠杆菌氯霉素株(iCHL)和水杨一氯霉素株(iS-CHL).临床分离三株大肠杆菌(H1、H9、H10).结果 iS-CHL株和分离株H10对17种六类药物有交叉耐药性,而iCHL株对氯霉素高度耐药,对其它不如以上4株显著.结论 水杨酸钠可能激活了大肠杆菌多重外输泵而致多重耐药.     

四川省规模化猪场大肠杆菌质粒DNA分析

在系统鉴定、药敏试验和血清型鉴定的基础上,对２３株致病性大肠杆菌和５株标准血清型大肠杆菌进行了质粒ＤＮＡ分析。结果表明,菌株的质粒获得率１００％,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,来源不同的菌株具有不同的质粒图谱。质粒图谱与血清型及耐药谱之间无明显关系。     

黄芩和黄连对大肠杆菌R质粒消除作用的实验研究

目的：研究黄芩和黄连对大肠杆菌Ｒ质粒的消除作用。方法：以黄芩和黄连的提取物为质粒消除剂,携带Ｒ质粒的多重耐药性大肠杆菌Ｅ．１０２株为靶细菌,采用倍比稀释法和影印培养法及Ｋａｄｏ法,观察黄芩和黄连作用不同时间对大肠杆菌Ｒ质粒表达的影响。结果：黄芩和黄连作用２４ｈ,对大肠杆菌Ｒ质粒的消除率为５％～２．４２％,延长时间至４８ｈ,消除率为２６．１４％～２２．５７％。两个时间的消除率差异有显著意义（Ｐ＜０．０１）。Ｒ质粒消除表型可以表现为单一或两种耐药性的丢失。结论：黄芩和黄连对大肠杆菌Ｒ质粒具有消除作用