CYPB6MF反义基因转化获得青花菜雄性不育植株

通过根癌农杆菌LBA4404(含质粒反义CYP86MF基因片段)介导转化青花菜(Brassica oleracea L．var．italica Plenck)下胚轴，经卡那霉素选择压下连续选择、扩繁和生根培养，获得了青花菜转基因植株。经PCR、Southern blot、Northern blot检测证明，CYP86MF基因已经整合至转基因植株染色体中。经花器官观察，转基因植株中有雄蕊发育不良、花粉不萌发的植株。转基因植株自交不能结实，用转基因植株花粉对正常植株进行人工授粉，不能正常结实，表明转基因植株花粉是不育的。用正常花粉对转基因不育植株进行人工授粉，转基因不育植株能正常结实，表明转基因不育植株的雌性器官发育正常，其不育性与CYP86MF基因在转基因植株中的表达有关。     

反义CYP86MF基因植物表达载体的构建及其对白菜的转化

在获得一个与白菜核雄性不育相关的编码细胞色素P450(CYP450)的基因CYP86MF的基础上,采用PCR技术在该基因的内部第901个碱基至第1338个碱基之间设计引物,扩增出438 bp序列作为反义基因片段.把该反义片段连接至pBI121双元载体质粒上得到CaMV35S组成型启动子的表达载体pBI35S-AMF,随后利用"三亲杂交"法将pBI35S-AMF质粒转入农杆菌LBA4404和EHA105两个菌株中.PCR扩增和酶切鉴定结果表明,所构建的反义CYP86MF基因植物表达载体pBI35S-AMF是正确的,并已成功导入了根癌农杆菌中.随后,按照已建立的遗传转化体系对‘上海青'白菜进行了转化,并获得130了多株转化再生植株.     

利用HSP70反义基因片段创造植物雄性不育系

该文将HSP70反义基因片段与TA29花药特异性启动子连接构建成植物表达载体,应用农杆菌介导法将其导入到烟草细胞得到转基因植株.通过分子杂交检测和GUS基因表达检测及育性分析证明HSP70反义基因片段已整合进烟草基因组中,并导致转基因烟草出现雄性不育.花药和花粉的显微观察结果表明,转基因烟草的雌蕊正常、但花药和花粉出现败育,而对照植株的雌蕊和雄蕊都正常.通过线粒体HSP70蛋白的提取和测定,发现热激前后对照株的HSP70蛋白含量之比是1.39倍,转基因烟草不育株的HSP70蛋白含量之比为1.01倍,从而证明HSP70反义基因能够有效抑制HSP70蛋白表达而导致植物出现雄性不育.这一研究结果为利用基因工程技术创造植物雄性不育系提供了一种新的策略和途径.     

青花菜雄性不育系组培快繁技术研究

青花菜原产意大利,近几年在欧美各国及日本等发达国家迅速发展,中国引种较迟,大规模栽培种植的时间很短,但发展迅猛。由于中国90％左右的种子都是从国外引进,价格昂贵,且大部分为雄性不育,留种困难,给中国青花菜的生产带来了一定困难[1]。采用组织培养的方法保存不育株在育种上具有重要的应用价值。Anderson等[2]最早采用青花菜花芽建立雄性不育系快繁技术体系,用青花菜花蕾、花器官、叶片[3-4]、带柄子叶[5]及腋芽[6]作外植体进行组织培养研究均有过报道。本试验以国外引进的不育系杂交种植株上的腋芽和无菌苗的茎尖为外植体进行快繁研究,以期为青花菜繁殖及应用提供有效途径。     

8个青花菜栽培品种的ISSR和SSR的遗传多样性分析

采用20个ISSR引物和100对SSR引物,分析了来自中国和美国的8个青花菜（Brassica oleracea var.italica）栽培品种的遗传多样性。分别获得35个和22个多态性片段,平均分别为3.5个和2.2个;根据ISSR和SSR标记计算出品种遗传距离分别在0.271 3～0.970 2之间和0.175 7～0.922 3之间;聚类分析将8个品种分成2大类;根据2种标记计算的遗传距离及其遗传关系,所得结果基本一致,但存在一定差异。     

利用花序轴组培快繁青花菜萝卜胞质雄性不育系的研究*

 以萝卜胞质不育型青花菜的幼嫩花序轴为外植体进行组织培养,可成功诱导出苗。将幼嫩花序轴接种到不同激素配比的诱导培养基上,均有愈伤组织产生,其中在MS + 6-BA 1.0mg/L + NAA 0.2mg/L培养基培养效果最好,诱导率高达100%;用MS + NAA 0.01mg/L +KT 0.2mg/L + 6-BA 0.5mg/L分化不定芽时,不定芽分化效果最好,芽分化率可达6.16;用1/2 MS + NAA 0.2mg/L进行生根培养,生根率高达86.7%,平均根数13.5条,在一定的温度和湿度条件下培养,移栽成活率可达85%以上。     

农杆菌介导法获得籼稻温敏核雄性不育系转Bt基因植株

通过农杆菌介导法将Bt融合型基因cry1Ab/cry1Ac导入籼稻温敏核雄性不育系03B198S和03B199S的愈伤组织,经过多轮潮霉素筛选,获得了一批独立转化体,同时,从每一个独立转化体至少再生出5株绿苗。经PCR、RT-PCR检测证实该Bt融合型基因已整合到部分受体基因组中,并表现出不同程度的表达。这些阳性转基因植株在异地异季低温条件下割蔸栽植,部分恢复可育,且表现出很强的抗螟虫性能。     

青花菜P450CYP79F1全长克隆、表达及其与不同器官中莱菔硫烷含量的相关性分析

【目的】克隆青花菜细胞色素家族P450CYP79F1,分析其序列特征,阐明其在不同发育时期器官中的表达情况及其与莱菔硫烷含量的关系,为进一步揭示莱菔硫烷合成机理提供科学依据,为青花菜品种改良和新品种选育奠定基础。【方法】通过5′和3ˊ端RACE克隆技术获得青花菜CYP79F1全长序列,利用DNAMAN 6.0进行基因拼接、氨基酸序列分析和蛋白二级结构预测,结合在线分析程序和软件进行基因和编码蛋白生物信息学分析;利用荧光定量PCR技术研究CYP79F1在不同发育器官中的表达情况;结合HPLC方法测定各相应时期器官中莱菔硫烷含量,包括青花菜发育时期的根、茎、叶,成熟花球,抽薹期花蕾（顶端蕾、成熟蕾、开花前1 d的蕾和花）和种子;对CYP79F1表达量与和莱菔硫烷含量进行相关性分析。【结果】获得了CYP79F1全长序列,GenBank登录号为MG012890,该基因全长2 014 bp,包含一个1 620 bp的开放读码框（ORF）,编码540个氨基酸;编码的蛋白与甘蓝、白菜、芥蓝和油菜等同源蛋白的相似性均在95%以上;生物信息学分析表明该基因编码的酶蛋白有2个信号肽和2个跨膜结构域,为亲水性稳定蛋白,Wolf Psort预测其亚细胞定位于细胞质中;CYP79F1在根和茎中的表达量较高,叶中表达量最低,在花器官发育时期,自顶端蕾到花发育过程中呈现逐渐降低的表达趋势,种子中该基因表达量与花处于同一水平。Pearson相关性分析显示,青花菜发育时期的根、茎、叶、成熟花球、抽薹期花蕾和种子中莱菔硫烷含量与CYP79F1表达量无显著相关关系,但抽薹期花蕾自顶端花蕾到花中莱菔硫烷生成量与CYP79F1表达量呈显著正相关关系（R=0.96,P<0.05）,CYP79F1在调控莱菔硫烷的生成方面起重要作用,尤其是在生殖器官花蕾的发育过程中,能够显著上调莱菔硫烷的生成量。【结论】CYP79F1在青花菜不同发育器官中对莱菔硫烷的生成发挥着重要调控作用,可能与青花菜不同器官中莱菔硫烷含量多样性密切相关。     

Plant Male Sterility Induced by Anti-Gene CYP86MFin Brassica oleracea var. Italica

An anti-gene CYP86MF was introduced into hypocotyls of broccoli （Brassica oleracea L.var. italica Plenck） with Agrobacterium tumefaciens, and the transgenic plants were obtained by kanamycin selection. The results of PCR, Southern blot and Northern blot indicated that the anti-CYP86MF has been integrated into chromosome of the transgenic plant. And also, plants with hypogenetic stamina or ungerminated pollen were observed. The transgenic male sterility plant could fructify via artificial pollination with normal pollen. Thus it was proved that the pistil of male sterility plant was normally developed, and the sterility originated from anti-CYP86MF.     

原生质体非对称融合法获得花椰菜与ogura CMS甘蓝型油菜种间杂种

 摘要：甘蓝型油菜Ogu CMS系幼叶原生质体经剂量分别为0.0250、0.0750、0.3150 、0.4680和0.9600 J·cm-2 的紫外线辐照后， 与花椰菜下胚轴原生质体通过PEG法诱导融合。其中0.0250~0.4680J·cm-2获得再生植株68株，0.9600J· cm-2辐射剂量下没有获得再生株。通过根尖染色体计数、流式细胞仪倍性鉴定、同工酶酶谱分析、RAPD及Ogu CMS线粒体基因orf138特异引物扩增等方法对再生株进行了鉴定，结果表明，其中32株为杂种植株，Ogu线粒体基因orf138已转入花椰菜中。同时也发现，紫外线辐照剂量的增加对供体染色体的丢失程度影响不大。     

提高青花菜游离小孢子培养反应的研究

以大田生长的青花菜“上海4号”和“东村交配”为供试材料,研究了影响小孢子培养反应的因素。结果表明:挤压法收集小孢子,以含13%蔗糖的B5培养基为提取液,小孢子用500 mg/L秋水仙碱预处理1 d,以含17%蔗糖的NLN诱导培养基中添加0.23 mg/mL的AC,32℃、1 d热激处理后,转入25℃常温静置培养,培养3~4 d后蔗糖浓度改为13%,形成细胞团后进行45 r/min振荡培养,可提高胚状体的诱导频率及正常植株再生频率。     

花椰菜多倍体诱导研究初报

 以花椰菜二倍体小花为材料，在离体培养条件下，采用不同浓度（0.03%～0.1%）秋水仙素，在不同的处理时间（24～72h）条件下进行诱导。试验表明，在0.05%浓度，48h条件下诱导效果最好。本试验首次鉴定出了二倍体花椰菜染色体数目为2n=2×=18，诱导出的同源四倍体花椰菜的色体数目为2n=4×=36。四倍体与二倍体在形态学和细胞学上有明显差异。     

观赏羽衣甘蓝在上海园林中的应用

综述了羽衣甘蓝的形态特征、生态习性、观赏品种及其在上海园林中的应用。     

绿花椰菜多倍体育种研究

用改良L.D.Cua法进行多倍体诱变,研究了绿花椰菜(Brassica oleracea L.var.italica Plench)多倍体育种.结果显示,在不同处理时间条件下,幼苗对秋水仙素的敏感程度不同.用0.2%秋水仙素处理绿花椰菜幼苗72 h,死亡率低,变异率高,诱导效果好.多倍体绿花椰菜在形态、生理学特征以及染色体数目上有明显的改变.     

青花菜种质资源遗传多样性的ISSR分析

利用ISSR分子标记技术,对来自国内外的33个青花菜(Brassica oleracea var. italica)材料进行遗传多样性研究。从100条通用ISSR引物中筛选出15条用于PCR扩增,共得到可重复的211条清晰谱带,其中多态性谱带180条,多态性条带比率(PPB)为8531%,平均Neis基因多样性指数与Shannons信息指数为0332 7和0487 7;材料间遗传距离范围为009～045,平均028;聚类分析表明,33份青花菜种质可分为4组,没有明显的地域分布规律。结果表明,ISSR标记可用于青花菜种质的分子鉴定;青花菜供试材料具有一定的遗传多样性。     

结球甘蓝的离体快繁技术研究

以结球甘蓝无菌苗的胚轴和子叶为材料 ,几乎不生长愈伤组织 ,分化出不定芽。不定芽在添加 6 -BA的MS培养基上增殖很快 ,适宜的生根培养基为 1/ 2MS IBA0 5mg/L NAA0 1mg/L。通过增加培养基中糖和琼脂粉的用量 ,提高培养时的光照强度等有效控制了玻璃苗的产生     

花椰菜再生体系的优化

以子叶和上胚轴为外植体,研究了不同激素浓度下花椰菜离体培养的再生体系.结果表明,上胚轴作为外植体时不定芽分化率较高,在不加IAA或添加0.5 mg/L IAA的培养基上均能达到100%,最佳诱导培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IAA.子叶作为外植体时不定芽分化率低,最高为40%.