苹果锈果类病毒新疆分离物的核苷酸序列分析

苹果锈果类病毒(Apple scar skin viroid,ASSVd)属于Pospiviroidae科(Hashimoto et al.,1987),主要侵染苹果和梨(陈炜等,1988a,b),是我国苹果产区的一种重要病害。刘福昌等(1985)和陈炜等(1988a、b)对ASSVd进行了研究。     

我国苹果黑星病发生概况及研究进展

苹果黑星病[Venturia inaequalis (Cooke) Wint]是世界各苹果产区的重要病害之一, 具有流行速度快、危害性大、难于防治等特点。近年来苹果黑星病在我国有逐步蔓延的趋势, 严重威胁着我国苹果产业的发展。本文对我国苹果黑星病的发生、分布、初侵染来源、病害发展过程、症状特点、主要防治措施及研究历史等进行了概括和总结, 并提出了我国苹果黑星病研究中存在的问题和未来的研究方向, 以期为我国苹果黑星病的防治、深入开展相关研究等提供参考。     

多霉清、氨基酸钙防治苹果轮纹病药效试验研究

苹果轮纹病又称粗皮病,轮纹褐腐病等,俗名烂果病。轮纹病是为害苹果果实和枝杆的重要病害,近几年有加重发展的趋势。据连续几年在我市调查结果表明,有些果园发病率达29.5％～40％。亦有更甚者,几乎绝产,成为苹果生产亟待解决的一大难题。为探明多霉清和氨基酸钙在苹果轮纹病上的防效,为大面积推广应用提供依据,笔者于2001年和2002年对该药肥的防效进行小区试验和小面积示范的试验研究,     

新疆苹果皱果类病毒(AFCVd)的检测与序列分析

采集新疆焉耆地区的老果园中的苹果（Malus domestica Brkn）树枝条、叶片和韧皮部,提取总RNA,根据GenBank中的AB104558序列设计引物,利用RT-PCR技术扩增出苹果皱果类病毒（Apple fruit crinkle viroid ,AFCVd）特异条带,通过回收、克隆和测序,结果表明,获得的10条序列,已在GenBank中登录（登录号：EU031507～EU031516）。利用带有AFCVd目的DNA的质粒为模板,成功地合成了地高辛标记的cDNA探针,该探针能很好地用于AFCVd的检测。并利用原位RT-PCR技术做进一步检测,证明苹果叶片中有苹果皱果类病毒存在,主要分布在叶肉细胞的细胞核中。     

果袋透气性对苹果黑点病、Pb及总酸含量的影响

选择9种代表性的双层果袋进行试验,果实采收后10 d内对果实各项指标按GB10651－1989进行检测,结果发现：果袋的透气性对苹果果实黑点病指数、总酸含量及重金属Pb含量有显著影响。果袋透气性越大,果实黑点病指数越小;果实中总酸含量越高,口感越好;果实中Pb的含量越大(同种条件下),安全风险越高。在保证苹果安全的前提下,苹果黑点病指数越低越好,总酸含量越高越好,结合中国绿色苹果生产标准及现有的技术水平,宜选用透气性为3～5 μm/(Pa·s)的果袋。     

套袋对“寒富”苹果果实香气成分的影响

套袋是我国苹果生产的一项关键技术,而目前有关套袋技术的研究主要集中于果实微域环境、果皮结构、果皮抗逆能力、果实品质等方面, 很少考虑果袋对果实内质的影响。果实香气是果实内质的主要组成部分, 对果实的风味起重要作用, 但是关于果袋材质对果实风味的影响鲜见报道。研究不同材质果袋对苹果果实香气的影响, 可为有效调控果实香气、提高果实品质提供依据, 为更科学合理地选择果袋、完善套袋技术措施、研发新型果袋提供参考。本研究采用静态顶空和气相色谱/质谱联用技术, 研究了套用不同材质果袋(塑膜袋、双层纸袋、反光膜袋)对“寒富”苹果果实香气成分的影响。结果表明: 套袋降低了“寒富”苹果果实中芳香物质的总含量, 但不同材质果袋影响程度不同, 未套袋对照果实芳香物质总含量为0.792 μg·g^-1, 套塑膜袋果实芳香物质总含量略低于对照, 套双层纸袋果实芳香物质总含量为对照的59.97%, 套反光膜袋果实芳香物质总含量为对照的79.67%; 套袋提高了果实中酯类物质的总含量, 降低了醇类、醛类物质的总含量; “寒富”苹果果实特征香气成分为2-甲基丁酸乙酯、丁酸乙酯、2-甲基丁酸己酯、己酸乙酯、己醛, 属于“酯香型”; 2-甲基丁酸乙酯为套塑膜袋和双层纸袋果实最重要的特征香气成分, 丁酸乙酯和2-甲基丁酸乙酯为套反光膜袋果实最重要的特征香气成分, 2-甲基丁酸乙酯和己醛为不套袋果实最重要的特征香气成分。果实套袋不利于重要香气成分(E)-2-己烯醛的生成, 这可能是导致套袋果实香味稍逊于不套袋果实的一个原因。     

贮前苯胺蓝染色预测苹果冷藏末期表皮病害

为了实现对苹果贮藏末期表皮病害的预测,以红富士苹果（Malus domestica Borkh cv. Fuji）为试材,通过苯胺兰染色的方法,研究了苹果采后苯胺兰染色与果实贮藏末期几种表皮病害的关系。结果表明：富士苹果采后苯胺兰染色指数与贮藏末期的好果率呈明显负相关,相关系数为-0.947;果实苯胺兰染色的级别与二氧化碳伤害指数和腐烂指数密切相关,其决定系数分别为0.9779和0.8394,但苯胺兰染色的级别与贮藏末期果实的虎皮病和皮孔斑点病之间无明显的相关性。因此,苹果采后苯胺兰染色可用于预测果实贮藏末期的好果率。     

残塬沟壑区果园复合种植对土壤动物群落特征的影响

为了解苹果复合种植即果-蔬[MB]、果-草[MH]、果-荒[MW]、果-粮[MZ]模式下土壤动物群落结构特征,采用手拣法和改良干、湿生漏斗法,对黄土残塬沟壑区苹果园4种复合种植模式下的土壤动物群落组成及特征进行调查研究。4种模式下共分离得到土壤动物57.33百只/m~2,隶属4门11纲23目42个类群。4种复合种植模式下土壤动物个体密度和类群数的垂直分布特征表现出明显的表聚特征,水平分布特征表现为果-草[MH]果-蔬[MB]果-荒[MW]≥果-粮[MZ]。果-草[MH]复合种植模式下土壤动物的多样性指数、均匀度指数及丰富度指数最高,优势度指数最低,表明4种复合种植模式对果园土壤动物类群多样性的影响呈现不同的特征。研究结果可为黄土残塬沟壑区苹果果园生物多样性保护提供土壤动物生态学依据。     

苹果苦痘病综合防治技术研究

苹果苦痘病是苹果植株缺钙引起的果实表皮病变,由于钙素吸收量不足,优质果变成了残次果,是对苹果生产影响最大的生理病害。据调查我市高产园片病果率在8％,严重发病园片病果率在20％,严重影响了果农收入。我站近年进行了系列试验示范,研究硝酸钙综合防治技术,力求探索出最佳防治措施。     

桃树霉心病的发生及综合防治措施

1症状特征 桃树霉心病又叫心腐病,是北方落叶果树果实腐烂的重要病害,除为害桃树外,梨、苹果、葡萄、李、核桃也可受害。病菌主要危害果实,发生霉心病时,一般症状不明显,较难识别。其主要症状有两种类型：一是,果实心室霉变。发病初期,在果实心室与萼筒相连的一端出现淡褐色、不连续的点状或条状小斑,逐渐扩展形成不规则黑褐色斑块,导致心室壁变色。有的病果在心室内出现灰白色、褐色、     

小麦品种“良麦2号”α-醇溶蛋白基因序列分析

根据α-醇溶蛋白基因编码区两端保守区设计引物，对小麦品种“良麦2号”总DNA进行PCR扩增得到约900bp的DNA片段，对其进行克隆测序，获得3条基因序列，GenBank登录号分别为：DQ417343、DQ417344和DQ417345。其中，DQ417343和DQ417345分别为942bp和921 bp，可分别编码313和306个氨基酸残基；而DQ417344编码区长度为852bp，由于存在2个提前终止密码子，不能编码有功能的成熟蛋白，为假基因。序列比对显示这3个基因与已知α-醇溶蛋白基因有较高一致性，但在N-端重复区和多聚谷氨酰胺区存在一些差异。     

黄瓜、西瓜、南瓜EIN3基因片段的克隆与序列分析

EIN3（Ethylene insensitive 3）是位于细胞核的核蛋白为乙烯信号转导的下游调控基因,根据GenBank所报道的植物EIN3基因mRNA的保守序列设计两个引物,以黄瓜、西瓜、南瓜总DNA为模板PCR扩增到3个725bp的基因片段，将片段序列在NCBI数据库中Blastn同源搜寻，显示151条有同源性的序列全部是EIN3基因，因此推断克隆的3个片段均为EIN3基因家族成员。NCBI网站的ORF Finder找到正确的开放式阅读框，翻译成为氨基酸序列，对CsEIN3、ClEIN3及CmEIN3氨基酸序列在NCBI网站进行Blastp比对, 在大分子结构数据库MMDB (Molecular Modelling Database) 搜索,3个推测蛋白保守结构域三级结构与拟南芥EIN3的DNA结合域(MMDB: 30598 PDB: 1WIJ )完全相同，系统进化分析表明，黄瓜、西瓜、南瓜与双子叶植物甜瓜、绿豆、蒺藜状苜蓿、烟草、番茄、拟南芥及单子叶水稻、桃红蝴蝶兰等的EIN3家族成员都有较高的相似性。     

山羊FSHR基因第10外显子的PCR-SSCP检测及其序列分析

利用PCR-SSCP技术检测山羊(Caprahircus)包括西农萨能奶山羊、关中奶山羊、陕南白山羊、安哥拉山羊和波尔山羊173个个体FSHR基因第10外显子的单核苷酸多态性(SNP)。结果未发现SNP位点。测序后获得山羊FSHR基因第10外显子的核苷酸序列,并在NCBI数据库中获得GenBank登录No.DQ069909和DQ069910。通过DNA序列分析发现,FSHR基因第10外显子第120位碱基不存在C→T的转换,也不存在颠换等其它遗传变化。山羊、绵羊(OvisariesL.)和普通牛(Bostaurus)FSHR基因第10外显子序列同源性比较和聚类分析结果表明,山羊、普通牛和绵羊该部分序列的相似性最高为99.3%;在物种间比较中,绵羊和普通牛纯合子该基因外显子序列的不相似性最高为3.4%;据FSHR基因外显子序列构建的分子系统树结果显示,山羊、绵羊和普通牛物种内的个体各自聚为一类;山羊和绵羊先聚为一类,然后再与普通牛聚为一类。提示FSHR基因第10外显子的核苷酸序列适合于物种间的动物分子树的构建。     

of Goat Follicle-stimulating Hormone Receptor (FSHR) Gene

利用PCR-SSCP技术检测山羊(Capra hircus)包括西农萨能奶山羊、关中奶山羊、陕南白山羊、安哥拉山羊和波尔山羊173个个体FSHR基因第10外显子的单核苷酸多态性 (SNP)。结果未发现SNP位点。测序后获得山羊FSHR基因第10外显子的核苷酸序列， 并在NCBI数据库中获得GenBank登录No.DQ069909和DQ069910。通过DNA序列分析发现， FSHR基因第10外显子第120位碱基不存在C→T的转换，也不存在颠换等其它遗传变化。山羊、绵羊 (Ovisaries L.) 和普通牛( Bos taurus) FSHR基因第10外显子序列同源性比较和聚类分析结果表明，山羊、普通牛和绵羊该部分序列的相似性最高为99.3%；在物种间比较中，绵羊和普通牛纯合子该基因外显子序列的不相似性最高为3.4%；据FSHR基因外显子序列构建的分子系统树结果显示，山羊、绵羊和普通牛物种内的个体各自聚为一类；山羊和绵羊先聚为一类，然后再与普通牛聚为一类。提示FSHR基因第10外显子的核苷酸序列适合于物种间的动物分子树的构建。     

苹果杂交后代植株果实着色性状的遗传分析和预测

苹果着色问题是影响我国许多产区苹果质量的重要因素,本研究利用苹果着色相关基因MdMYB1（GenBank登录号：DQ886414）设计引物进行PCR扩增,开发出一个酶切位点为HaeⅢ的CAPS标记Mb2,该标记可用于区分杂交亲本‘富士’和‘嘎拉’苹果及分析其杂交后代植株。进一步利用Mb2标记对该杂交组合的后代植株进行遗传分析,结果表明,可将77个后代植株分为2组,一组42个后代植株含有来自‘嘎拉’亲本的非红色性状等位基因以及来自‘富士’亲本的非红色性状等位基因或者红色性状等位基因,其果实颜色预测为非红色与红色或者非红色与桔红色;另一组35个后代植株含有来自‘嘎拉’亲本的红色性状等位基因以及来自‘富士’亲本的非红色性状等位基因或者红色性状等位基因,其果实颜色预测为桔红色与红色或者只有红色。本研究结果将为选育优质苹果新品种提供依据和方法参考。     

紫杆柽柳谷胱甘肽硫转移酶基因的克隆及功能鉴定

根据GenBank已公布的植物谷胱甘肽硫转移酶基因EST序列，设计引物利用3’和5’RACE方法，获得紫杆柽柳GST基因(TaGST)全长cDNA序列，全长为1175 bp，开放读码区672 bp, 编码224个氨基酸。其所编码的蛋白与大豆的GST10同源性最高为48%。利用pET-28a（+）构建了紫杆柽柳GST基因的原核表达载体，转入BL21大肠杆菌进行了原核表达。诱导表达蛋白的SDS-PAGE检测表明, 所表达的蛋白分子量约为26 kD，与预测的分子量大小一致。初步的酶学活性的检测表明所克隆的基因编码的肽段具有催化GST蛋白通用底物CDNB和GSH反应的活性。     

猪圆环病毒Ⅱ型SC株ORF3基因克隆及其编码蛋白的生物信息学分析

本研究根据GenBank登录的猪圆环病毒基因组序列(DQ180392.1)来设计引物,用PCR法扩增出PCV-2四川株(PCV-2SC)ORF3基因,并克隆到PMD19-T载体进行测序,同时利用在线生物信息学软件及数据库对ORF3基因及其编码蛋白进行生物信息学分析。研究结果表明,成功构建了命名为P-S-PCV-2SCORF3的重组质粒;测序结果得知PCV-2SCORF3基因全长315bp,共编码104个氨基酸;BLAST比对发现该基因与GenBank中国内外参考毒株核苷酸同源性在98%~100%之间。利用在线生物信息学软件对PCV-2SCORF3编码蛋白结构特征进行分析,发现该蛋白含有12个潜在的磷酸化位点,ORF3成熟蛋白有4个主要的抗原位点;亚细胞定位分析结果表明,编码蛋白主要存在于线粒体中和细胞核中并各占43.5%和34.8%,这证实了PCV-2SCORF3编码蛋白属于胞质蛋白,抗原区位集中于胞膜,有向胞核移动的趋势,功能强大,可能与细胞凋亡有关。疏水性分析发现,该编码蛋白具有一定的疏水性,与该蛋白的表面抗原决定族和膜蛋白中穿越膜的肽片段及该蛋白的高级结构的形成有关,预示其高疏水性区又与膜蛋白的跨膜区有...     

Genome-wide analysis of plastome sequence variation and development of plastidial CAPS markers in common potato and related <Emphasis Type="Italic">Solanum</Emphasis> species

The plastome sequence of the European cultivated potato, Solanum tuberosum subsp. tuberosum (tbr, GenBank accession no. DQ386163), was compared with that of S. bulbocastanum, a wild potato relative (blb, GenBank accession no. DQ347958), in order to characterize the degree and type of variability in different genomic regions, and develop molecular markers relevant to genetics, breeding and biotechnology of potato. One hundred forty-two and 251 PICs (Potentially Informative Characters) were found in coding and non-coding sequences (NCSs), respectively. Further, while variation in coding regions was almost exclusively due to nucleotide substitutions, 25% of PICs in NCSs of tbr and blb were due to indels, most of them mononucleotide or longer tandem repeats (micro and minisatellites). Four intergenic regions were selected for further analyses in other 16 tuber-bearing Solanum species. The rps16-trnQ ^UUG gene spacer was found to be the most variable, forty-six PICs in this region distinguishing 18 haplotypes. Analysis of haplotype relationships, based on variability in the four intergenic regions, confirmed that the most primitive species from Central America were the most distant to S. tuberosum. Finally, polymorphic sites in the same regions were used to develop a set of CAPS (Cleaved Amplified Polymorphic Sequences) markers for species/cytoplasm identification in Solanum spp.     

烟夜蛾泛素延伸蛋白基因的克隆与表达

应用RT-PCR技术，从烟夜蛾(Helicoverpa assulta)幼虫脂肪体组织总RNA中反转录扩增泛素延伸蛋白基因的cDNA片段，扩增得到的片段全长390bp，编码一个长为129个氨基酸残基的蛋白质，预测分子量14.8kDa。同源性分析表明，此cDNA序列为ubiquitin-53aa extension protein(ubi-53，UBE)基因，在泛素蛋白后融合了一个核糖体L40蛋白(ribosomal L40 protein)。使用Clustal W软件，对cDNA编码的氨基酸序列进行了同源性分析，分析表明：烟夜蛾的泛素延伸蛋白氨基酸序列与其他真核生物泛素延伸蛋白氨基酸序列高度同源（90%－98%），与棉铃虫核多角体病毒(HaSNPV)泛素的同源性为69%。将烟夜蛾的UBE基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-2上，转化大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG进行诱导表达，电泳检测到一条约40kDa大小的外源蛋白，用鼠抗GST抗体进行Western blot检测表明原核表达蛋白是目的蛋白。