鸡滑液囊支原体的分离鉴定及病理组织学观察

为了解宁夏及其周边不同地区蛋鸡场中的鸡滑液囊支原体的种类及其致病力,采用改良Frey氏鸡滑液囊支原体培养基,从疑似感染鸡滑液囊支原体的不同蛋鸡群中分离出病原株,设计鸡滑液囊支原体vlhA基因特异性引物,对分离到的病原进行基因序列扩增并测序,使用MEGA6.0软件中的邻接法(Neighbor-joining,NJ)构建分离株系统发育树并进行遗传进化分析,采用从临床症状最明显的鸡体分离的菌株进行动物感染试验,制作石蜡切片,HE染色,病理组织学观察。结果表明,所分离到的病原菌均为鸡滑液囊支原体,部分菌株之间极其相似;鸡滑液囊支原体不仅可以使鸡只关节肿胀、生长缓慢,也可引起鸡只的肝脏轻微肿大,肝细胞部分坏死、间质增生;脾脏结缔组织增生,出血。     

鸡滑液囊支原体病继发大肠杆菌感染的诊断

2011年10月贵州省息烽县某养鸡场送检雏鸡病例,为确诊病因,进行了流行病学调查,剖检病变观察,细菌学、PCR检测和鸡胚接种试验。发病鸡多见于12日龄,一侧或双侧跗关节肿胀,患部背侧滑膜囊出现囊肿和跛行。肝脏病料大肠杆菌分离率12.5%(1/8),该菌对庆大霉素和氟苯尼考敏感,而对四环素、青霉素、氧氟沙星、链霉素、卡那霉素、恩诺沙星均已产生耐药。针对滑液囊支原体16S rRNA基因设计引物能扩增出653 bp的特异性条带,而病毒性关节炎病原S1基因引物未见扩增条带。病鸡关节滑液囊液接种鸡胚见出血水肿病变,死亡鸡胚卵黄囊和尿囊液染色镜检可见直径约为0.2μm多形态的球状体。由此确诊该病例为鸡滑液囊支原体病继发大肠杆菌感染。     

4株滑液囊支原体分离株的分子鉴定及vlhA基因的序列分析

为了从分子水平对4株滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)分离株进行鉴定,同时分析其膜蛋白vlhA的基因序列以及蛋白的功能结构域。通过PCR扩增其16S rRNA和vlhA基因序列,以16S rRNA序列构建分子进化树并分析4株MS分离株和其他支原体参考株的同源性;利用生物信息学工具对vlhA基因的核酸序列和蛋白序列进行分析,查找其保守结构域,预测其可能具有的功能。结果表明,4株MS分离株在16S rRNA基因序列上与MS不同菌株具有同源性,可以确定为滑液囊支原体;其vlhA基因序列分为保守区和高变区,保守区和部分高变区组成主要膜抗原基因MSPB;vlhA蛋白共含有10个保守的结构域,7个保守域位于保守区,8个保守域位于MSPB区,其中的75 Asp～425 Asn之间的氨基酸残基预测与细胞黏附有关;75 Asp～126 Val与129 Val～206 Val之间的氨基酸残基为免疫球蛋白超家族结构,与受体/配体功能相关,可能都参与MS感染宿主的过程。     

鸡滑液囊支原体的分离和鉴定研究

从河南某肉种鸡场疑似鸡滑液囊支原体感染的病鸡跗关节样品进行病原的分离与鉴定.分离菌经瑞氏染色,在油镜下呈球形或椭圆形.在固体培养基上表现为细小、光滑、致密的小菌落,菌落形态为“煎蛋状”.L型细菌鉴定发现菌体仍保持原有形态.菌体能够吸附红细胞,分解葡萄糖,但不能分解精氨酸和尿素,还可致SPF鸡胚死亡,说明该分离菌为支原体.进一步的血清学试验结果表明,该分离菌为鸡滑液囊支原体,而不是鸡毒支原体.根据已发表的鸡滑液囊支原体血凝素基因序列vlhA设计合成一对引物,经PCR扩增,该菌体能够扩增出鸡滑液囊支原体(773 bp)的特异性片段.人工感染试验结果显示,SPF鸡能够复制出自然病例.     

宁夏某肉牛场牛支原体分离鉴定及病理组织学观察

为了分离鉴定宁夏某肉牛场牛支原体和分析该病原对靶器官的损伤,采用Thiaucourt's液体筛选培养基和固体培养基进行病原分离,设计牛支原体16SrRNA通用引物和uvrC特异性引物进行基因序列扩增并测序,使用DNA Star软件将分离菌株测序结果与GenBank中的标准株序列进行同源性比较,采用MEGA6.0软件中的邻接法(Neighbor-joining,NJ)依据16SrRNA和uvrC序列构建分离株系统发育树并进行遗传进化分析,采用石蜡切片,HE染色,病理组织学观察。结果表明,病原菌落呈油煎蛋样,16S rRNA和uvrC扩增片段与阳性对照一致,16S rRNA和uvrC基因序列构建的系统发育树与牛支原体在同一分支;肺组织结构消失,部分肺泡腔实变、塌陷,局灶性肺出血,肺泡腔内可见炎性细胞浸润;肺泡隔增厚、出血,肺泡内有少量脱落的上皮细胞;肺泡壁断裂,肺泡腔可见红色的炎性渗出物,有纤维结缔组织增生。     

牛支原体新疆株的分离鉴定

为调查新疆规模化奶牛场病牛死亡原因并确定病原,本研究无菌采集7份肺炎病死牛病变肺组织样,通过牛支原体液体培养基和固体培养基分离到1株支原体,采用形态学观察和生化试验鉴定该分离株,采用支原体特异性引物和牛支原体16S rRNA通用引物扩增基因序列并测序,使用DNAStar软件将分离菌株测序结果与GenBank中的标准株序列进行同源性比对,采用Mega 6.0软件中的邻接法(Neighbor-Joining,NJ)依据16S rRNA序列构建分离株系统进化树。结果显示,分离株菌落呈典型的"煎蛋样",菌落中心凹陷深入培养基,周边菲薄而透明,经Dienes染液染色后,菌落中心呈深蓝色。该分离株不分解葡萄糖、尿素、不水解精氨酸,血细胞吸附试验和溶血试验均呈阴性,氯化三苯基四氮唑还原反应呈阳性,产生膜和斑。PCR反应扩增出大小为1 911 bp的牛支原体特异性目的片段;分离株16S rRNA基因序列与牛支原体标准株PG45的序列同源性为99.8%,与牛支原体地方株(Mb NM2012、Mb HB0801、Mb Hubei-1、Mb Ningxia-1、Mb CQ-W70和Mb 08M)的同源性为99.3%～99.7%。系统进化树显示,分离株16S rRNA基因与Mb Ningxia-1株和Mb 08M株亲缘关系较近,处于同一分支。本研究结果证实了引起病牛死亡的病原为牛支原体,为新疆牛支原体病的防治提供了科学依据。     

牛支原体新疆株的分离鉴定

为调查新疆规模化奶牛场病牛死亡原因并确定病原,本研究无菌采集7份肺炎病死牛病变肺组织样,通过牛支原体液体培养基和固体培养基分离到1株支原体,采用形态学观察和生化试验鉴定该分离株,采用支原体特异性引物和牛支原体16S rRNA通用引物扩增基因序列并测序,使用DNAStar软件将分离菌株测序结果与GenBank中的标准株序列进行同源性比对,采用Mega 6.0软件中的邻接法(Neighbor-Joining,NJ)依据16S rRNA序列构建分离株系统进化树。结果显示,分离株菌落呈典型的"煎蛋样",菌落中心凹陷深入培养基,周边菲薄而透明,经Dienes染液染色后,菌落中心呈深蓝色。该分离株不分解葡萄糖、尿素、不水解精氨酸,血细胞吸附试验和溶血试验均呈阴性,氯化三苯基四氮唑还原反应呈阳性,产生膜和斑。PCR反应扩增出大小为1 911 bp的牛支原体特异性目的片段;分离株16S rRNA基因序列与牛支原体标准株PG45的序列同源性为99.8%,与牛支原体地方株(Mb NM2012、Mb HB0801、Mb Hubei-1、Mb Ningxia-1、Mb CQ-W70和Mb 08M)的同源性为99.3%～99.7%。系统进化树显示,分离株16S rRNA基因与Mb Ningxia-1株和Mb 08M株亲缘关系较近,处于同一分支。本研究结果证实了引起病牛死亡的病原为牛支原体,为新疆牛支原体病的防治提供了科学依据。     

鸡滑液囊支原体的RT-PCR检测及基因序列分析

为确诊某鸡场肉鸡发病死亡的病因,通过临床症状、病理变化、RT-PCR检测、病原S1基因序列分析进行综合诊断。结果:(1)病鸡表现食欲不振、精神沉郁、跛行及无法站立、关节肿大等症状,剖检发现肿大关节内有大量黏液。(2)鸡滑液囊支原体RT-PCR扩增出现207 bp特异性条带,与预期结果一致。(3)病原S1基因序列分析显示与GenBank公布的鸡滑液囊支原体基因序列同源性均达到99%,构建系统进化树分析显示与GenBank公布的参考株聚为1支。综合诊断为鸡滑液囊支原体感染。     

我国部分地区鸡滑液囊支原体分离株vlhA基因遗传进化和同源性分析

为了探究鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae, MS)在我国的遗传变异情况，试验采集北京市、河南省、辽宁省、河北省、天津市、山东省、安徽省、江苏省、湖北省、江西省10个地区疑似感染MS的发病鸡上颚裂黏液，进行MS分离、纯培养及鉴定，采用PCR方法扩增阳性分离株vlhA基因片段并对其进行测序分析，利用MEGA 7.0软件构建分离株与GenBank中28株参考株的系统发育树并分析遗传进化关系，再利用MegAlign软件分析分离株和参考株vlhA基因的同源性。结果表明：共得到17株MS分离株，其中16株的基因型为K型，1株为L型。分离株与国外不同地区的参考株vlhA基因同源性较低，在71.8%～91.8%之间；与国内不同地区的参考株vlhA基因同源性较高，在82.3%～95.9%之间。说明目前在我国流行的MS分离株的优势基因型是K型，并存在一定变异。     

引起奶牛关节炎的牛支原体病原的分离鉴定

试验通过细菌分离培养及分子生物学诊断技术对一起引起奶牛关节炎的病原进行了鉴定。结果显示,该病原菌落形态为"油煎蛋样",牛支原体16S r RNA和uvr C均扩增出相应的片段,且16S r RNA和uvr C基因序列构建的系统发育树与牛支原体在同一分枝。说明引起该奶牛关节炎的病原菌为牛支原体。     

应用多重套式PCR检测鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体

根据已发表的鸡毒和鸡滑液支原体血凝素基因序列pMGA和vlhA各设计两对引物,建立鉴别诊断两种支原体的多重套式PCR方法,对其进行温度条件、Ⅱ步模板浓度优化及特异性、敏感性实验。该方法在两步PCR后能特异性地扩增出MG(408 bp)和MS(688 bp)两个目的片段。应用于临床样品检测,与支原体分离、SPA检测比较结果PCR灵敏度高于病原分离。     

云南省某养鸡场疑似肉鸡感染滑液囊支原体病例的诊断

2022年3月云南省大理市某肉鸡规模化养殖场出现疑似肉鸡感染滑液囊支原体病例。为明确病因，对病死肉鸡病料进行滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)核酸检测和MS可变脂蛋白血凝素基因(variable lipoprotein hemagglutinin gene A,vlhA)序列分析。结果显示：6羽病死肉鸡的病料样品中均检测到MS核酸，仅1羽病死肉鸡病料样品(6号样品)检测到vlhA基因；vlhA基因序列(MS-VLHA-TSS20220711-0871-01253 GO7)与中国的CHN-JX-JX02-2014、CHN-JS01-2013、CHN-HN03-2013、CHN-GD-LZ01-2014和CHN-GD-LZ03-2014滑液囊支原体株95%同源，与泰国的AHRU2015CU3505.1及匈牙利的IZSVE/378/D13/1滑液囊支原体株94%同源。     

一株牛支原体的分离鉴定及致病性初步研究

对采集到的疑似牛支原体肺炎肺组织病料进行病原的分离,并对分离株进行形态学、生化和分子生物学鉴定,结果显示成功分离获得1株牛支原体,命名为NM001.该分离株的菌落形态呈典型的"荷包蛋状",不能发酵葡萄糖,不能水解精氨酸,不分解尿素.PCR能够扩增出牛支原体特异的P48基因条带,16S rRNA基因序列与Ningxia-...     

应用PCR快速检测鸡滑液囊支原体的研究

根据鸡滑液囊支原体(MS)16S rRNA设计引物,对1株MS阳性株、5株临床分离鉴定的MS、2株鸡毒支原体、1株多杀性巴氏杆菌、1株沙门菌、1株大肠杆菌和1株金黄色葡萄球菌进行PCR扩增,结果显示所有MS均出现1 077 bp特异性扩增条带,其余非MS则均未扩增出特异性条带。敏感性测定结果表明,优化的PCR反应体系能检出MS的最低DNA量为1 pg。建立的PCR方法用于快速检测临床样品检测,对鸡肿胀跗关节腔内容物直接进行PCR检测,检出率为21.1%(32/152),显著高于病原分离方法的9.2%(14/152),具有良好的实际应用意义。     

温氏附红细胞体16S rRNA基因的序列测定和分析

从自然感染附红细胞体的湖北黄牛无菌采集血液,分离附红细胞体并提取病原基因组,用血营养菌的16SrRNA基因的通用引物进行PCR扩增,得到长约1.5kb的扩增片段,将其克隆到pMD18-T载体后进行测序和分析.结果表明该片段全长为1 471 bp（GenBank收录号为AY946266）,同源性分析表明该序列与Neimark公布的温氏附红细胞体（AF016546）的16S rRNA基因序列同源性达到98.7%,证实该病原为温氏附红细胞体,从分子生物学水平证实了温氏附红细胞体在湖北省的存在.将该序列与5种支原体、14种血营养菌及边缘无浆体等的相应序列进行比较,建立系统发育树,结果表明温氏附红细胞体同边缘无浆体的关系较远,而与肺炎支原体组的亲缘关系较近.     

猪肺炎支原体西昌分离株16S rRNA和P46部分基因的克隆与序列分析

为了解西昌猪肺炎支原体的遗传变异情况,对西昌市Mhp分离株XC01的16S rRNA和P46基因部分序列进行PCR扩增和序列分析,并构建NJ树。结果显示,XC01的16S rRNA和P46基因片段的长度分别为1 146 bp和1 059 bp,与Mhp参考株的核苷酸序列同源性分别为97.5%～99.8%和98.6%～99.4%;构建的NJ树显示不同地方的Mhp株未形成明显的地理分支。结果表明,Mhp分离株的16S rRNA和P46基因序列高度保守,在遗传演化中未发生太大的变化。研究结果为猪肺炎支原体的分子遗传变异研究和开展分子流行病学调查提供参考依据。     

鸡滑液囊支原体病研究进展

鸡滑液囊支原体可引起鸡滑液囊炎,该病是鸡的一种急性或慢性传染病,以侵害关节滑液囊膜及腱鞘为主,引起关节渗出性滑膜炎、腱鞘炎及跗关节和脚掌肿胀。本文就鸡滑液囊支原体病的病原学特点、流行病学、临床症状、病理变化、诊断方法和预防治疗措施进行综述。     

禽源大肠埃希菌Biolog鉴定和系统发育分析

采用Biolog和16S rRNA基因序列分析法对中国兽医药品监察所菌种室收集保藏的18株大肠埃希菌(Escherichia coli)进行了鉴定.菌株经纯化培养,用Biolog微生物鉴定系统进行了鉴定,结果表明18株菌株为大肠埃希菌.提取基因组DNA,采用16S rRNA通用引物,用PCR进行16S rRNA基因序列扩增,扩增产物纯化后进行测序.序列经人工校对后用Clustal X 1.83软件进行比对分析,采用Mega 3.1软件构建系统发育树,结果表明18株菌株为大肠埃希菌.     

山羊支原体山羊肺炎亚种甘肃株的分离及鉴定

2007年甘肃某地羊场山羊发生以呼吸困难、咳嗽和胸膜肺炎为特征的呼吸道传染病,经临床诊断为羊支原体性肺炎.用改良的Thiaucourt's培养基对病山羊的肺组织进行病原分离,成功分离到1株支原体M1601,经菌落形态观察、生化试验、PCR鉴定、以16S rRNA基因序列构建的分子进化树分析和动物致病性试验,证明该分离株属于山羊支原体山羊肺炎亚种.     

鸡的传染性滑膜囊炎的诊治

鸡传染性滑膜囊炎又名鸡滑液囊支原体病或称滑液囊霉形体病,是由鸡滑液支原体引起鸡和火鸡的一种急性或慢性传染病。主要侵害关节滑膜和腔鞘膜,引起关节肿大、滑膜囊炎、胶鞘炎和亚临床上呼吸道感染,2008年6月上旬,陕西某大型鸡场发生了一种育成鸡以站立、行走不稳、关节肿大、病程长、死亡率低为特征的传染病。经诊断为由滑液囊支原体引起的鸡传染性滑膜炎,现报告如下。