动情期和动情间期雌性小鼠GR和TH的免疫活性及血清CORT水平的比较

受到卵巢雌激素和孕激素波动的影响,动情周期会影响雌性动物的行为和情绪。然而,关于引起这些行为改变的神经内分泌机制还需要进一步研究。通过阴道脱落细胞染色法确定小鼠动情周期的各个阶段。用酶联免疫吸附法检测动情期和动情间期血清雌二醇(E2)和皮质酮(CORT)水平,用免疫组织化学方法检测脑区糖皮质激素受体(GR)和酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元的表达。结果发现,与动情间期雌鼠相比,动情期雌鼠血清E2浓度升高(P0.05),但CORT水平没有变化;海马CA1区和齿状回(DG)GR-IR神经元表达增加(P0.05),下丘脑室旁核(PVN)和中脑腹侧被盖区(VTA)的TH-IR神经元表达增加(P0.05)。结果说明,雌性小鼠在动情期和动情间期GR和儿茶酚胺能神经元活动不同,这些差异可能是动情周期引起行为变化的一个重要因素。     

线粒体凋亡通路在皮质酮(CORT)诱导海马神经元凋亡中的作用

为在细胞水平探讨皮质酮(CORT)诱导HT22细胞凋亡的机制,以模拟冷应激过程中机体分泌的糖皮质激素对海马神经元的作用。试验组HT22细胞用500μmol/L CORT处理3 h,对照组不予处理。用CCK8法检测CORT对HT22细胞活力的影响,Annexin/PI流式细胞术检测细胞凋亡率。为了进一步研究CORT引起的海马神经元凋亡是否是由线粒体凋亡通路介导的,用JC-1探针检测线粒体膜电位的变化,免疫蛋白印迹(Western blot)检测凋亡相关蛋白细胞色素c(Cyt-c)、Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达。结果显示,与对照组相比,500μmol/L CORT处理组细胞生存率显著降低,细胞凋亡率显著升高,线粒体膜电位显著下降,Cyt-c、Bax/Bcl-2及活化的Caspase-3表达水平显著升高。结果表明,500μmol/L CORT处理3 h会导致HT22细胞凋亡,并且线粒体凋亡通路在该过程中发挥重要作用。     

口服人参茎叶皂苷减缓环磷酰胺诱导的氧化应激作用研究

考察小鼠口服人参茎叶总皂苷(GSLS)水溶液(50 mg/L)的抗氧化作用。将30只雌性ICR小鼠随机分成5组,A、B、C和D组小鼠一次腹腔注射环磷酰胺(Cy)诱导氧化应激;E组不注射Cy作为空白对照。A组试验全程每天饮水口服GSLS溶液;B组于Cy应激前每天饮水口服GSLS溶液;C组于Cy应激后每天饮水口服GSLS溶液;D组不口服GSLS,作为Cy应激对照。于试验第9天处死小鼠,检测脏器(胸腺和脾脏)指数以及胸腺、脾脏中丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)含量。结果表明,小鼠饮水口服GSLS可显著缓解由Cy诱导的氧化应激作用,提高应激小鼠的胸腺指数及血清中T-SOD活性,脏器中丙二醛MDA水平降低。Cy应激前、后均饮用GSLS的抗应激效果最佳,但应激前与应激后饮用人参茎叶皂苷无显著性差异。     

热应激条件下猪肠道糖皮质激素受体的表达变化

为探究糖皮质激素受体(GR)在热应激引发猪肠道病变中的作用,本研究将48头2月龄左右的健康猪(15±2 kg)随机分为两组(实验组和对照组),实验组饲养于环境温度为35±1℃的人工气候温室,对照组环境温度为28±3℃,相对湿度均为75%～80%。在热应激的第1 d、7 d、14 d和21 d迫杀受试猪,采集其肠道组织,采用免疫组织化学法和western blot分别检测了GR在不同肠道组织的分布及表达情况。免疫组织化学结果显示,热应激第7 d和第14 d实验组猪十二指肠粘膜层GR表达量显著增高;盲肠和结肠GR表达量在热应激第14 d上调。Western blot结果显示,实验组猪十二指肠和结肠中GR表达量随应激时间延长而增加,在热应激第14 d达到峰值。而盲肠GR表达量较对照组显著下调(p0.05)。本实验表明热应激影响猪肠道GR的表达水平,为进一步阐述GR在热应激诱发猪炎性肠病的作用提供实验依据。     

冷热应激对小鼠应激激素含量的影响

为研究冷热应激对神经内分泌系统的影响,试验随机选用30只雌性ICR小鼠,构建慢性冷热应激模型,采用酶联免疫吸附法测定血清中的皮质酮、肾上腺素及生长激素含量,并测量应激前后小鼠体重。结果显示,与对照组相比,冷热应激组小鼠体重显著降低(P<0.05);冷热应激组小鼠皮质酮与肾上腺素含量极显著升高(P<0.01),冷热应激组之间无显著差异(P>0.05)。冷热应激组小鼠血清中生长激素(GH)浓度极显著降低(P<0.01),且冷应激组GH浓度极显著低于热应激组(P<0.01)。结果说明,冷热应激激活机体下丘脑—垂体—肾上腺皮质系统和交感神经—肾上腺髓质系统,致使其分泌更多的皮质酮与肾上腺素来调节并完成对应激的适应,较好地维持内环境的相对稳定,且冷热应激可抑制生长激素的分泌,影响小鼠的生长发育。     

壳寡糖缓解大鼠海马神经元氧化应激的效果及机制

壳寡糖(COSs)具有抗氧化应激的作用,但其对海马神经元氧化应激的效果及机制尚不清楚。本试验采用不同浓度过氧化氢(H₂O₂)诱导大鼠海马神经元氧化应激模型,并添加不同浓度的COSs,考察COSs对氧化应激海马神经元的作用效果及其对神经肽可卡因-苯丙胺调节转录因子(CART)基因表达的影响。结果显示,与对照组相比,H₂O₂处理海马神经元后,丙二醛(MDA)含量极显著升高(P<0.01),谷胱甘肽(GSH)含量和过氧化氢酶(CAT)活性极显著降低(P<0.01),表明海马神经元氧化应激模型构建成功。与H₂O₂组相比,不同浓度的COSs处理海马神经元后,MDA含量均极显著降低(P<0.01),GSH含量均极显著升高(P<0.01),并且添加10 mg/L COSs具有最佳效果,表明COSs可缓解海马神经元氧化应激。荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,H₂O₂组中CART基因转录表达水平极显著降...     

“肿节风三清”口服液缓解肉鸡热应激的效果观察

本研究旨在观察“肿节风三清”口服液(下简称口服液)对黄羽肉鸡热应激反应的缓解作用,从而为其进一步的临床研究奠定基础。将75只黄羽肉鸡随机分为5组,分别为常温组、热应激组、热应激-药物组(低、中、高剂量)。热应激结束后,测定热应激黄羽肉鸡血清皮质酮(CORT)、生化指标、抗氧化能力以及心肌组织热休克蛋白70(Hsp70)水平,考察口服液对高温引起黄羽肉鸡热应激的缓解效果。结果表明,热应激会使黄羽肉鸡血清代谢酶活性增强,血清CORT含量增加,Hsp70水平升高,诱导氧化应激导致氧化损伤。饮水给予口服液后,热应激黄羽肉鸡的血清CORT含量及血清生化指标趋于正常,抗氧化能力增强,Hsp70水平显著上调。表明“肿节风三清”口服液对高温引起的黄羽肉鸡热应激具有较好的缓解作用。     

野菊花水煎剂对免疫应激鸡血清ACTH和CORT含量及下丘脑CRHmRNA表达影响

为了研究野菊花水煎剂对实验性免疫应激鸡血清中,促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(CORT)含量及下丘脑中促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)mRNA表达水平的影响。试验分为空白组、对照组和野菊花组,平均每组80只雏鸡。野菊花组于30日龄口服野菊花水煎剂,早晚两次,连续7 d。对照组和野菊花组32日龄胸肌肉注射接种10羽份的新城疫Ⅰ系疫苗,造成实验性免疫应激,空白组注射等量生理盐水。每组分别于免疫接种后1、3、5、7、14、21 d随机抓取10只鸡心脏采血并取下丘脑。双抗体一步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测免疫应激后血清中ACTH和CORT的含量;实时荧光定量PCR法测定下丘脑CRH mRNA的表达水平。结果显示,野菊花能显著抑制血清中ACTH和CORT的含量及下丘脑中CRH mRNA的表达,对免疫应激有较好的缓解作用。     

黄连素对四氯化碳诱导的小鼠肝损伤的治疗作用研究

为了探究黄连素对四氯化碳(CCl₄)诱导的肝损伤的治疗效果及作用机制,试验选取80只健康昆明雌性小鼠,其中40只用于急性肝损伤试验,另外40只用于慢性肝损伤试验。急、慢性肝损伤试验中均将小鼠均随机分为对照组、模型组、黄连素组、水飞蓟宾组,每组10只。急性肝损伤试验中,黄连素组、水飞蓟宾组每天分别以黄连素(按体重25 mg/kg)溶液、水飞蓟宾(50 mg/kg)溶液预处理小鼠7 d后,一次性口服0.6%CCl₄(按体重5μL/g)。慢性肝损伤试验中,采用灌胃0.6%CCl₄溶液(按体重5μL/g),每周2次,连用6周,成功复制慢性肝损伤模型后黄连素组、水飞蓟宾组每天用黄连素(按体重50 mg/kg)溶液、水飞蓟宾(50 mg/kg)溶液治疗30 d。急性肝损伤和慢性肝损伤小鼠末次给药后间隔24 h,眼眶采血后处死小鼠,收集血清,检测天门冬氨酸氨基转移(AST)与丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性;取肝脏称湿重,计算肝脏指数;取肝脏左叶约1 cm×1 cm×0.25 cm,浸泡于4%多聚甲醛缓冲液中,用于病理组织学检查;其余肝...     

Ghrelin和SHU9119通过促进CART神经元调节小鼠采食

为研究Ghrelin和SHU9119如何作用于小鼠下丘脑可卡因和苯丙胺转录调节因子(CART)神经元参与小鼠采食调控,本试验以免疫荧光技术为主,利用代谢笼和冰冻切片的方式获取试验材料,综合小鼠采食量测定,CART神经元表达数目的统计学分析,及CART神经元、刺鼠相关蛋白(AgRP)神经元同黑皮质素4型受体(MC4R)神经元间共定位信息,对Ghrelin和SHU9119通过不同方式介导CART神经元以参与小鼠采食调控这一作用机理进行初步阐述。结果显示:健康4周龄C57BL/6雄性小鼠,腹腔注射Ghrelin(50μg/kg,n=3)后,其下丘脑背内侧核(DMH)区域CART神经元表达数目显著上升(P0.05);而SHU9119(50μg/kg,n=5)则显著促进弓状核(ARC)区域的CART神经元的表达(P0.01),2种药物促进CART神经元表达的部位并不相同。同时,2种药物的单独注射均可对小鼠采食活动产生一定的促进作用(Ghrelin组n=7;SHU9119组n=7)。有趣的是,CART神经元在DMH区域同AgRP神经元之间具有突触联系,而CART神经元与表达MC4R的神经元之间的共表达关系则发生在ARC区域。结合已有的研究证据,我们推测Ghrelin和SHU9119可能通过不同方式参与对CART神经元表达的调节,并最终影响小鼠采食活动。期望通过本研究为今后进一步探明外周信号分子如何参与促厌食神经元对机体能量代谢调控提供新的思路和证据。     

小鼠弓形虫病病状及卵巢功能变化

为研究小鼠弓形虫病病状及卵巢功能的变化,将雌性小鼠随机地分为实验组与对照组,每组各30例.实验组雌性小鼠感染弓形虫,观察其临床症状及体温变化.体温升高并出现稽留热.在感染弓形虫后第45、90d的发情间期采血,对照组也在相同的时间采血.采用放射性免疫方法,测定血清中的雌二醇含量,并于两次采血后将两组小鼠剖检.结果4-5d时实验组与对照组小鼠血清雌二醇含量分别为12.29 ±4.39pg/mL与10.56±8.34pg/mL,90d时实验组与对照组小鼠血清雌二醇含量分别为7.76±3.67pg/mL与10.23±4.85pg/mL;实验组90d血清雌二醇水平降低,与实验组45d时及对照组45d时比较,差异均有显著性.弓形虫感染的小鼠主要脏器严重受损,肠淋巴结可见大量的巨噬细胞.脑组织可见慢性炎症改变及弓形虫包囊体,卵巢呈炎性变化.结论：弓形虫感染引起轻度临床症状和严重病理变化,导致小鼠卵巢功能下降.     

日粮添加绿原酸对热应激小鼠睾丸抗氧化功能的影响

试验旨在探讨日粮添加不同剂量绿原酸对热应激小鼠睾丸指数、形态、抗氧化及炎症反应的影响。试验择取体重日龄相近的健康雄性小鼠30只,随机分为5组,分别饲喂基础日粮添加绿原酸0 mg/kg(对照组)、0 mg/kg(热应激组,HS)、250 mg/kg(HS+C250组)、500 mg/kg(HS+C500组)及1 000 mg/kg(HS+C1 000组)。饲养10 d后,除对照组外均进行高温处理,8 d后取样分析。结果表明：1)与对照组相比,热处理显著降低小鼠睾丸指数并显著增加生精细胞脱落比率(P<0.05);与HS组相比,日粮添加1 000 mg/kg绿原酸显著增加热应激小鼠睾丸指数并降低生精细胞脱落比率(P<0.05)。2)与HS组相比,日粮添加1 000 mg/kg绿原酸显著降低了热应激小鼠睾丸组织中MDA含量并提高GSH水平(P<0.05),但睾丸组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD)及总抗氧化能力(T-AOC)活性在HS、HS+C250、HS+C500及HS+C1 000组之间无显著差异(P>0.05)。3)与HS组相比,日粮添加1 000 mg/kg绿原...     

黄芪水煎剂对免疫应激鸡血清ACTH和CORT含量及下丘脑CRH mRNA表达的影响

研究了黄芪水煎剂对实验性免疫应激鸡下丘脑血清中促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(CORT)含量及促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)mRNA表达水平的影响。试验分为空白组、对照组和黄芪低、中、高剂量组。黄芪组于30日龄开始早晚2次口服黄芪水煎剂,给药剂量为低、中、高3组每天剂量分别为0.5、1、1.5g生药/只,连续7d。对照组、黄芪组于32日龄胸肌注射接种10×剂量的新城疫Ⅰ系疫苗(NDVⅠ),造成实验性免疫应激;空白组注射等量生理盐水。分别于免疫接种后的1、3、5、7、14、21d每组随机取8只鸡,进行心脏采血,取下丘脑。ELISA检测免疫应激后血清中ACTH和CORT含量;RT-PCR测定下丘脑CRH mRNA表达水平。结果显示,对照组注射大剂量新城疫Ⅰ系疫苗后,可引起血清中ACTH和CORT的含量和CRH mRNA的表达水平都显著升高,造成了实验性免疫应激。黄芪低剂量组对免疫应激的缓解作用不明显,而黄芪中、高剂量组对免疫应激有显著的缓解作用。结果表明,注射大剂量新城疫Ⅰ系疫苗可引起鸡的免疫应激,一定剂量的黄芪水煎剂可以缓解新城疫Ⅰ系疫苗引起的免疫应激。     

富硒女贞子对热应激小鼠内分泌及免疫功能的影响

通过观察小鼠热应激模型的生长指标、免疫器官指数、血清IL-2及激素的动态水平,探讨富硒女贞子抗热应激的调节作用。将108只ICR小鼠随机分成6组(每组设3个重复),分别为常温对照组(C)、热应激组(HS)、普通女贞子组(1.5 g/kg,CLL)和富硒女贞子组(剂量分别为0.75 g/kg、1.5 g/kg、3.0 g/kg,分别表示为HSLL、MSLL、LSLL)。除C组外,其他各组于T:(40±1)℃,RH:40%~50%人工气候室中,11:00-13:00热应激2 h,应激期间不间断供水和药液(自由饮用);其余时间置于白天T:(35±4)℃,RH:45%~50%环境下,夜晚T:(28±5)℃,RH:30%~40%环境下,连续高温应激7 d。结果表明,在高温应激条件下,LSLL组的增重率(WG)和生长率(SGR)分别显著和极显著高于HS组(P0.05,P0.01);CLL组、MSLL组、LSLL组免疫器官指数均显著高于HS组(P0.05);热应激前期(1~3 d),HS组血清中促肾上腺皮质激素(ACTH)浓度显著增高(P0.01),CLL、MSLL和LSLL组均无显著差异(P0.05);HS组的皮质醇(CORT)浓度较C组显著升高(P0.05),女贞子各组均有降低,其中MSLL组与C组无显著差异(P0.05);HS组血清中的T3、T4浓度总体上呈现下降的趋势,但是CLL、LSLL组的T3、T4浓度均显著高于HS组(P0.01);IL-2方面,在热应激前期(1~3 d),富硒女贞子HSLL组、LSLL组的IL-2显著高于HS组和C组(P0.05,P0.01)。结果提示,富硒女贞子和女贞子对热应激造成小鼠生长不良及免疫器官损伤均具有明显的缓解作用,并能够增强热应激小鼠免疫调节功能,通过机体的内分泌-免疫调节网络系统,改善机体的内环境稳态,发挥提高动物耐热能力的作用,且以低剂量(0.75 g/kg)富硒女贞子组作用最佳。     

自拟中药复方制剂对热应激雌性小鼠发情的影响

为了研究中药复方制剂对热应激母鼠发情的影响,试验将60只雌性未孕的成年昆明小鼠随机分成3组,即室温对照组(25℃,全价鼠料)、热应激对照组(33℃,全价鼠料)和中药组(33℃,全价鼠料+1%中药复方制剂),观察雌性小鼠发情情况,试验30 d后称重,处死小鼠,采血分离血清检测促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(FH)、促性腺激素释放激素(GnRH)和雌二醇(E_2)含量;取小鼠卵巢称重后常规固定切片,观察卵巢变化。结果表明:热应激对照组发情只数、体重、卵巢重、促性腺激素释放激素含量、促卵泡素含量明显低于中药组且差异显著(P0.05);热应激对照组促黄体生成素含量、雌二醇含量低于中药组但差异不显著(P0.05);中药组可以明显改善放射冠排列、防止细胞核分解破裂。说明中药复方制剂对热应激下母畜乏情、卵巢发育不良有明显的改善作用,并能调节生殖内分泌系统功能,使生殖激素水平升高。     

米非司酮486阻断鸡GR及其对地塞米松诱导的免疫抑制的逆转效应

本研究在应用 1 0 ,2 5 ,5 0 ,75 mg/ kg米非司酮阻断部分去除肾上腺鸡糖皮质激素受体 ( GR)的基础上研究了 2 5 mg/ kg和 5 0mg/ kg米非司酮对 1 0 ,2 5 ,5 0 ,75 mg/ kg地塞米松 ( Dex)引起的免疫抑制的逆转效应。结果显示 :2 5 ,5 0 mg/ kg米非司酮对 GR的阻断率可达 ( 39.2 5± 5 . 42 % )和 ( 74. 93±9.5 0 % ) ,为阻断鸡 GR提供了理想选择剂量。同时 2 5 mg/ kg米非司酮几乎可以完全逆转 1 0 ,2 5 ,5 0 mg/ kg Dex引起的脾细胞 IL - 2、IFN诱生活性 ,T、B细胞刺激增殖活性及淋巴器官体重比的下降 ;5 0 mg/ kg米非司酮可以部分逆转这些效应 ,并且还可阻断 Dex( 5 0mg/ kg以下剂量 )诱导的淋巴细胞凋亡。提示应用米非司酮部分阻断 GR可以逆转糖皮质激素 ( GC)诱导的免疫抑制效应 ,对畜禽应激性疾病的预防具有理论上的指导意义。     

苦参碱对PRRSV/LPS共刺激诱导小鼠炎症反应的作用

通过猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)和脂多糖(LPS)共刺激诱导小鼠炎症反应,探索苦参碱的抗炎机制。试验选取100只雌性昆明系小鼠,设置空白组、PRRSV组、LPS组、PRRSV和LPS共刺激组、苦参碱作用组。LPS和PRRSV共刺激30 min后腹腔注射40 mg/kg·bw苦参碱,每隔24 h给药1次,连续给药3次;共刺激1 d和7 d后,通过检测小鼠肺脏病理变化、血细胞中各种白细胞数变化、肺脏中IL-1β和TNF-αmRNA以及脾脏中Treg和Th17细胞的表达阐释苦参碱的抗炎作用。结果表明,PRRSV和LPS共刺激诱导小鼠严重的肺脏病理变化,主要表现为典型的间质性肺炎,苦参碱处理后影响血液中各种白细胞的含量以及肺脏中IL-1β和TNF-α的表达。苦参碱通过抑制白细胞的变化以及IL-1β和TNF-α的表达来改善PRRSV/LPS共刺激诱导的间质性肺炎。     

精子膜抗原SA—30诱导雌性小鼠的体液免疫反应

利用ELISA方法检测了精子膜抗原(sperm antigen-30,SA-30,从牛精子膜提取的一种糖蛋白)诱导雌性昆明系小鼠体液免疫反应的情况.结果表明,SA-30免疫后,无论是妊娠前(间情期)还是妊娠后(妊娠3d),小鼠的血清及子宫分泌物中都有抗SA-30抗体IgG存在;与对照组(用不加SA-30的佐剂免疫)比较,二者具有极显著性差异(P<0.01),说明SA-30具有较强的抗原性.本试验结果提示,抗体产生可能是SA-30引起生育力下降的原因之一.     

冷应激对雏鸡腓肠肌及血清NO代谢的影响

为了探明冷应激对雏鸡腓肠肌及血清NO代谢的影响,以公雏鸡为试验动物,进行急性(1,6及12h)与慢性(5,10及20d)冷应激处理(12±1)℃,检测了腓肠肌及血清NO含量、T-NOS与iNOS活性。结果表明,腓肠肌NO含量、T-NOS与iNOS活性在急性应激时均随应激时间的延长逐渐降低,而在慢性应激时随应激时间的延长均未出现显著性变化;血清NO含量、T-NOS与iNOS活性在急、慢性应激时均随应激时间的延长逐渐升高。从而说明冷应激可以改变腓肠肌及血清NO的代谢,而且不同程度的冷应激对相同或不同组织内NO的代谢产生的影响也不同。     

北京蜂王精(老年型)对环磷酰胺、应激及衰老所致小鼠免疫功能抑制的影响

北京蜂王精(老年型)对2月龄小鼠脾脏抗羊红细胞空斑形成细胞(PFC)数无明显影响,但可使注射环磷酰胺和应激所致免疫功能抑制的2月龄小鼠和15月龄老年小鼠明显减少的脾脏PFC数恢复正常或接近正常。它还显著增强ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖反应,并使15月龄小鼠显著降低的淋巴细胞增殖反应恢复至相当于2月龄小鼠的正常水平。