猪流行性腹泻病毒的分离鉴定

目的:讨论猪流行性腹泻病毒的分离鉴定。方法:选取大型猪场中疑似猪流行性腹泻病死的仔猪的肠道内容物制成标本进行分离,RNA提取,反转录,RT-PCR,小白鼠感受性试验。结果:使用胰酶检测细胞的毒性,结果50μg/ml以下的胰酶含量对细胞没有毒性。经过RT-PCR检测确定病毒为猪流行性腹泻病毒(PEDV)。在小白鼠感受性试验中,小白鼠没有死亡,将其内脏解剖后,没有确定的变化。结论:经过分离达到病毒PEDV,在诊断中使用RT-PCR检测确诊可行。     

猪流行性腹泻病毒SDbz株的分离与鉴定

病料应用套式RT-PCR检测呈现PEDV阳性,经处理将其接种到含终质量浓度50 mg/L胰酶的Vero细胞上进行病毒分离传代,盲传到10代左右开始出现局灶性CPE,20代以后特征性CPE稳定出现.将病毒Vero细胞培养物应用毒价测定及病毒中和试验、套式RT-PCR和间接免疫荧光进行检测鉴定,证明所分离到的病毒为PEDV,并将其命名为PEDV SDbz株.     

猪流行性腹泻病毒SD株的分离与鉴定

利用Vero细胞自安徽合肥腹泻仔猪小肠内容物中分离到一株病毒,经胶体金、PCR方法和攻毒试验,确定为猪流行性腹泻病毒,命名为SD株。SD株在Vero细胞上传代,第8代(F8)开始出现稳定的细胞病变(CPE),F8代的毒价(TCID50)为10-6.25/0.1 m L,F8代细胞培养物接种未吃初乳仔猪,接种仔猪均出现典型腹泻症状,死亡仔猪3头(50%),未死亡猪生长严重发育不良,说明SD株具有较强的致病性。     

猪流行性腹泻病毒SDbz株的分离与鉴定

取病死仔猪十二指肠、空肠及肠内容物制成匀浆,应用套式RT-PCR检测呈现猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性,经处理将其接种到含终浓度50μg/mL胰酶的Vero细胞上进行病毒分离传代,盲传到10代左右开始出现局灶性细胞病变(CPE),20代以后特征性CPE稳定出现。将病毒Vero细胞培养物应用毒价测定及病毒中和试验、套式RT-PCR和间接免疫荧光进行检测鉴定,证明所分离到的病毒为PEDV,并将其命名为PEDVSDbz株。     

猪流行性腹泻病毒的分离培养与鉴定

猪流行性腹泻病是严重威胁养猪业的传染性疾病之一,上海市农业科学院畜牧兽医研究所成功分离到一株猪流行性腹泻病毒（PED）,并且采用采用对发病猪的小肠粘膜进行人工攻毒以及无菌处理后进行接种操作,使PED病毒长成了单层的VERO（非洲绿猴肾）传代细胞。本文对猪流行性腹泻病毒的分离培养与鉴定进行了介绍。     

猪腹泻相关的冠状病毒检测方法研究进展

猪冠状病毒是猪病毒性腹泻的一类重要病原,感染仔猪死亡率可达100％,给养猪业带来了巨大的经济损失.文章将对猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪德尔塔冠状病毒以及猪急性腹泻综合征冠状病毒等4种猪冠状病毒检测方法研究现状进行总结,对各种方法的优缺点和应用前景进行系统的讨论和展望,以期为临床上猪冠状病毒的高效检测、精准防...     

猪流行性腹泻病毒ShT株的分离及传代培养

从广东省某猪场疑为病毒性腹泻的发病猪采集腹泻粪便样品,以PCR方法扩增出猪流行性腹泻病毒N基因后,采用细胞培养法进行病毒分离.用套式PCR、胶体金试纸卡和血清中和试验对细胞分离物进行检验,证实其为一株猪流行性腹泻病毒,命名为ShT株.将猪流行性腹泻病毒ShT株在Vero细胞上进行传代培养,观察其培养特性.结果表明,PEDV ShT株能在Vero细胞稳定传代,第20代、25代、30代病毒液的TCID50/0.1 mL分别为10-7.0、10-7.13、10-7.33.     

猪流行性腹泻病毒的分离和鉴定

从广州某猪场采集疑为病毒性腹泻的病猪粪便，除菌处理后接种PK—15传代细胞，采用在接种物和细胞维持波中加入60μg/mL胰蛋白酶的方法，分离到一株野毒。中和试验、动物回归试验和电镜观察结果表明，分离的病毒为猪流行性腹泻病毒(PEDV)。     

猪流行性腹泻病毒的分离及RT-PCR方法的建立

应用RT-PCR方法对2012年华南地区某大型猪场疑似猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）病料检测,选取阳性病料接种vero细胞,培养至15代,出现明显的细胞病变。为了更好的检测该病毒,根据M基因设计引物,建立了一个快速的RT-PCR方法。     

猪流行性腹泻病病毒的分离鉴定

猪流行性腹泻病,是造成养猪业经济损失严重的传染病之一。本文是针对某养猪场的病死猪进行临床症状观察、病理剖检,通过病毒的分离培养及RT-PCR鉴定,确诊病死猪病原为猪流行性腹泻病毒应加强对猪流行性腹泻病的诊断及监控。     

猪流行性腹泻病毒SD201604株的分离鉴定及致病性研究

本研究旨在获得猪流行性腹泻病毒（PEDV）分离株,并对其致病性进行研究。应用Vero细胞从山东某猪场腹泻病料中进行病毒分离,通过细胞病变、免疫荧光试验、电镜观察和RT-RCR进行鉴定,并对分离株的S基因序列进行分析;应用10^3.5 TCID₅₀/mL分离株口服接种3日龄仔猪并观察临床症状和病理变化;用不同滴度的分离株分别口服接种3日龄仔猪（3 mL/只）,统计各组仔猪的死亡率,确定最小致死量。结果显示,成功分离到1株PEDV,命名为PEDV SD201604株。该分离毒株能在Vero细胞上增殖,产生细胞病变,传代至F6代时病毒滴度可达10^3.5 TCID₅₀/mL,免疫荧光试验和RT-RCR检测均为PEDV阳性。电镜观察可见直径大小约为100 nm的病毒粒子,有明显的囊膜和纤突,具有PEDV病毒粒子典型的形态特征,确定分离株为PEDV。S基因序列分析显示,分离株为国内流行的PEDV变异株。动物回归试验结果显示,口服感染该分离株的5头3日龄仔猪全部出现典型的PED临床症状和病理变化,其中3头死亡。最小致死量试验结果表明,口服感染3 mL病毒含量为10^4.5 TCID₅₀/mL的分离株可使仔猪全部死亡。本试验结果可为PEDV的分离鉴定及生物学研究提供参考与借鉴。     

猪丁型冠状病毒的分离鉴定与基因分析

对山东省某养殖场的腹泻病料进行检测,确认为猪丁型冠状病毒(PDCoV)阳性。使用ST细胞分离到一株PDCoV,命名为SD株。全基因序列测定以及与GenBank中其他68株PDCoV全基因序列比对分析以及遗传进化分析结果表明:PDCoV SD株的全基因组(不包括3'poly(A)尾)序列长度为25414个核苷酸(nt),与参考株HKU15-155、CH/Sichuan/S27/2012和CH-HB-2014的核苷酸同源性分别为98.97%、99.06%和99.13%;此外,在nsp2区的1739~1744位(对应于HKU15-44序列)中的6 nt(TTTGAA)缺失和nsp3区的2810~2818位的9 nt(TCGGCAATG)缺失为特征性基因突变;69株PDCoV呈现出明显的地域特征,其中美国与韩国的PDCoV毒株为一个大分支,越南与泰国PDCoV毒株为另一个小分支,中国的23株PDCoV则呈现出4个小分支,充分展现了该病毒的基因多样性。试验可为中国PDCoV的流行病学和诊断研究以及进一步的疫苗开发提供参考。     

一株变异型猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及其灭活疫苗的免疫效力试验

本研究旨在分离猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）变异株,通过悬浮培养工艺制备成高效价的PEDV灭活疫苗。2017年从中国多个规模化猪场采集腹泻病死仔猪的小肠及其内容物200份,通过RT-PCR方法进行PEDV检测并测序,筛选一株PEDV变异株,将其在2 L反应器里悬浮培养的Vero细胞上进行病毒分离与传代培养,收获的病毒液鉴定后测定TCID₅₀,经甲醛灭活后加入氢氧化铝胶佐剂配制成PEDV灭活疫苗,对其物理性状、稳定性、黏度、无菌等进行检验,检验合格后免疫妊娠母猪及所产仔猪,对其安全性和免疫效力进行研究。结果显示,200份病料中有86份为PEDV阳性,将筛选的PEDV变异株病料在Vero细胞上传至第5代时出现细胞病变,传至第10代收获病毒液,经鉴定后确定为PEDV变异毒株,并命名为PEDV-GF10株。收获的病毒液浓缩后测得病毒滴度可达1×10^8.0 TCID₅₀/mL。疫苗检验合格后在母猪产前40和25 d时试验组后海穴肌内注射4 mL疫苗,空白组不免疫,结果显示试验组与空白组母猪的生产情况无明显差异,所产3日龄仔猪分别免疫不同剂量后体温无显著差异,表明该疫苗对母猪和仔猪均安全性良好。随机挑选试验组与空白组母猪所产3日龄仔猪各20头,分别口服4 mL PEDV-F10病毒培养物,空白组母猪所产仔猪在攻毒24 h后PEDV发病率为100%,抗体均为阴性;试验组母猪所产仔猪只有10%出现了轻微的腹泻症状,仔猪获得了高达90%保护率,且仔猪被动免疫后抗体能持续至35 d以上。以上结果表明,PEDV-GF10变异株通过悬浮细胞培养后病毒滴度显著提高,研制的PEDV-GF10株灭活疫苗安全有效,能够对中国的PEDV变异株达到有效防控,为国内PED防控提供了理论依据。     

Isolation and Identification of a Variant Porcine Epidemic Diarrhea Virus and the Immune Efficacy of Its Inactivated Vaccine

This study was aimed to isolate a mutant strain of porcine epidemic diarrhea virus and prepare a PEDV inactivated vaccine with high valence by suspension culture process for immunizing against PEDV effectively in China.200 small intestines and theirs contents of diarrhea piglets died of diarrhea,collected from many large-scale pig farms in China,were detected by RT-PCR and sequenced,a mutant strain of porcine epidemic diarrhea virus was selected and put on the suspension-cultured Vero cells in a 2 L reactor for virus isolation and continuous cell culture,the harvested virus suspension,which was identified and determined TCID₅₀,was inactivated by formaldehyde and mixed with aluminum hydroxide gel adjuvant to prepare PEDV inactivated vaccine.After its physical behavior,stability viscosity,sterility test were checked out,the safety and immune efficacy were studied by immunizing the pregnant pigs and theirs piglets.The results were as follows:86 samples were detected positive in 200 samples,cytopathy occurred after the mutant strain samples screened were passaged to 5th generation,the virus suspension was harvested in 10th generation and identified as a mutant strain of PEDV,named PEDV-GF10 strain.The virus titer of harvested virus suspension was measured up to 1×10^8.0 TCID₅₀/mL after concentrated.After the vaccine was checked out,the sows,40 and 25 days before delivery in experimental groups,were injected into Xuehai acupoint with 4 mL vaccine and the pigs in blank group were free of immunifications.The results showed that there were no obvious differences in the production status of the sows in experimental groups and blank group and the temperature of theirs 3-day-old healthy piglets injected different doses of vaccine,and the vaccine was safe to the sows and piglets.Forty 3-day-old piglets producted by pregnant sows in experimental groups and blank group were randomly selected and taken 4 mL 1×10^8.0TCID₅₀/mL F10 virus culture.The PEDV morbidity of piglets in blank group was 100% after injection and the antibodies were negative;10% piglets in blank group had mild diarrhea symptoms,the protection rate was up to 90%,antibody of passive immunity in piglets lasted for more than 35 days.Virus titer of mutant strain of PEDV-GF10 improved a lot by suspension cell culture,the PEDV-GF10 inactivated vaccine was safe,and could effectively prevent and control the variation strain of PEDV in China.     

Research Progress on Porcine Epidemic Diarrhea Virus

Porcine epidemic diarrhea (PED) caused by porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) is a contagious acute gastrointestinal infection, which has brought great economic losses to the pig industry in recent years.The article reviewed advances in molecular biology, methods of detection, genetic variation and vaccine development to provide references for further study in preventing porcine epidemic diarrhea.     

猪流行性腹泻病毒研究进展

猪流行性腹泻病毒是引起猪腹泻的重要病原体之一,广泛流行于世界各地,造成了重大的经济损失。文章阐述了猪流行性腹泻病毒的分子生物学特点,概括了病毒的检测方法,并对近年来流行病学及疫苗的研发情况进行了综述,以期对猪流行性腹泻病毒研究提供帮助。