犬乳腺肿瘤治疗的研究进展

乳腺肿瘤是犬常见的肿瘤类型,研究犬乳腺肿瘤的治疗可以对人类乳腺肿瘤的治疗提供参考.归纳了近年来国内外乳腺肿瘤的治疗方法及进展,提出了犬的乳腺肿瘤的治疗建议,为犬的乳腺肿瘤的治疗提供了理论参考和依据.     

卵巢切除术对犬乳腺肿瘤的作用

对９０只乳腺肿瘤母犬在肿瘤手术后进行了２年的研究,其中２９只在乳腺肿瘤形成之前已切除卵巢;２２只在乳腺肿瘤手术时切除卵巢;３９只未切除卵巢。５８只（６４％）患乳腺良性肿瘤的犬,有１５只（２６％）在术后２年内又形成新肿瘤。３２只（３６％）在术后２年内又形成新肿瘤。３２只（３６％）恶性肿瘤犬分为组织扩散性及非扩散性癌两类,在患扩散性癌的母犬中,切除或不切除卵巢者分别有６３％和５７％死于肿瘤,而在患非扩     

犬的乳腺肿瘤

乳腺肿瘤是母犬最常见的一类疾病,9-11岁的老龄母犬多见,公犬少见。美国的一项调查发现,乳腺肿瘤占犬类所有肿瘤的13．4％,而这些肿瘤有41．7％发生在未节育的母犬。犬的乳腺肿瘤以小型狮子狗、英国的斯普林斯班尼犬、考克斯班尼犬、塞特种猎狗、德国牧羊犬、马耳他犬、约克郡犬、德国猎犬的发病率较高。     

犬乳腺肿瘤的诊治

犬的乳腺肿瘤是犬最常发的肿瘤病,仅次于皮肤肿瘤。笔者自１９９９年至此２００１年间共收治了乳腺瘤病犬３例,经手术摘除治疗,预后良好,现将诊疗体会介绍如下。１ 病例临诊     

顺铂诱导体外犬乳腺肿瘤细胞凋亡影响

为研究顺铂诱导体外犬乳腺肿瘤细胞CHMp凋亡影响,本试验采用不同浓度的顺铂以不同作用时间处理细胞,用MTT法检测细胞活性,通过透射电镜观察CHMp细胞形态学变化,用流式细胞仪研究CHMp细胞凋亡和周期。结果显示,CHMp细胞生长受浓度和时间双重依赖,浓度越高,时间越长,抑制越明显,在电镜下观察细胞出现明显的凋亡形态,同时5μmol/L顺铂作用24 h后细胞阻滞于G1/S期,比例高达75.12%。结果表明,顺铂能抑制CHMp增殖,诱导细胞凋亡,阻滞细胞G1/S期。     

犬乳腺肿瘤的超声断层扫描诊断

在１９只患乳腺肿瘤的母犬研究超声断层扫描技术诊断乳腺肿瘤的有效性和可靠性。首先用超声图像评估乳腺病变的形状,大小,回声及其与周围组织的关系;之后切除肿瘤,进行组织学检查。通过比较超声图像及组织学检查结果,表明在１１例恶性肿瘤中,有９例的肿瘤声图像为不规则的多边形,所有１１例的肿瘤内部回声为非均匀的,７例的肿瘤超声图像规则,呈现为圆球形或卵圆形图像,所有８例的肿瘤内部回声为均质的,且都表现回声增强,     

IGFBP-2 PTEN蛋白在犬乳腺肿瘤中的表达

为了探讨IGFBP-2、PTEN蛋白表达与犬乳腺肿瘤生物学行为关系。采用免疫组织化学PV法对临床收集的71例乳腺肿瘤,4例非典型性增生和6例健康犬乳腺组织中IGFBP-2和PTEN蛋白的表达水平进行检测,并分析它们与临床病理特征之间的关系。结果 IGFBP-2和PTEN蛋白染色主要定位于胞浆,少量可见于胞核和胞膜。IGFBP-2和PTEN蛋白在犬正常、增生乳腺组织中和良性乳腺肿瘤中的表达差异不显著(P0.05),但与恶性乳腺肿瘤相比二者表达差异极显著(P0.01)。IGFBP-2和PTEN蛋白表达与患犬年龄、肿瘤大小和预后无关。表明联合检测IGFBP-2、PTEN表达可作为犬乳腺癌生物学行为判断的重要指标。     

犬乳腺肿瘤的手术治疗

2012年夏季,陕西省眉县营头镇白某饲养的一只德国纯种牧羊犬患病,经诊断为犬乳腺肿瘤,采用手术疗法将瘤体切除,并应用抗生素及破伤风抗毒素等药物防止继发感染,术后患犬恢复良好,至今未复发.主要对该例手术治疗经过作一介绍,以期为兽医同仁提供参考.     

犬乳腺肿瘤标志物的研究现状

乳腺肿瘤是母犬中最常见的肿瘤,严重威胁其生命。标志物的评估能够为患病犬提供早期诊断、治疗选择和预后。虽然到目前为止已经进行了多项研究,但有关犬乳腺肿瘤标志物的评估仍不全面,还需要进行更详细的研究。本文综述了标志物在犬乳腺肿瘤中的研究现状,为进一步研究标志物在犬乳腺肿瘤的应用提供参考。     

敲低SQLE基因对奶牛乳腺上皮细胞增殖及凋亡的影响

为了探讨角鲨烯环氧酶（squalene epoxidase,SQLE）基因对体外培养奶牛乳腺细胞凋亡及增殖的影响,本研究用RNAi技术敲低奶牛乳腺上皮细胞中SQLE基因;用实时荧光定量PCR方法检测奶牛乳腺上皮细胞中SQLE基因及凋亡和周期相关基因的表达;用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;用周期和凋亡检测试剂盒筛选细胞,用流式细胞术准确计数处于不同周期的细胞数和凋亡细胞数。结果显示,奶牛乳腺上皮细胞转染siRNA后,SQLE基因相对表达量显著下降（P<0.05）,细胞增殖受到极显著抑制（P<0.01）;G1期细胞数量显著下降（P<0.05）,G2期细胞数量没有显著性改变,S期细胞数量显著上升（P<0.05）;肿瘤坏死因子超家族成员6（又称Fas或CD5）的相对表达量显著上升（P<0.05）,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B（cyclin dependent kinase inhibitor 1B,P27）相对表达量显著上升（P<0.05）,而细胞周期素D1（Cyclin D1）、B淋巴细胞瘤因子2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（cyclin dependent kinase inhibitor 1A,P21）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X,apoptosis regulator,Bax）显著下降（P<0.05）。综上所述,敲低SQLE基因通过调节相关基因的表达抑制乳腺上皮细胞的增殖。     

中草药添加剂对奶牛乳腺上皮细胞增殖及泌乳性能影响

为探讨中草药添加剂对奶牛乳腺上皮细胞泌乳功能的影响,选取3种与泌乳功能相关的中药（甲珠、通草、蒲公英）,应用CASY细胞分析仪及HPLC分别检测其对奶牛乳腺上皮细胞增殖、细胞活力及乳腺上皮细胞分泌β-酪蛋白、乳糖的影响。试验结果表明,通草对乳腺上皮细胞泌乳性能影响不显著（P〉0.05）;甲珠和蒲公英对奶牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白和乳糖分泌有显著的促进作用（P〈0.05）,并呈一定的剂量依赖效应,综合考虑确定蒲公英30 mg/mL为其最佳作用浓度。     

Effect of Glycyl-tRNA Synthetase on Cell Proliferation of Bovine Mammary Epithelial Cells

Glycyl-tRNA synthetase is an important member of aminoacyl-tRNA synthetase family.However,the knowledge about expression and regulation mechanism of GlyRS in the development of bovine mammary gland is limited.To reveal the relationship among GlyRS and bovine mammary gland development and lactation,EdU immunofluorescence and flow cytometry were used to analyze the impact of GlyRS on the number of DNA and the influence of the cell cycle of BMEC,and the expression of Cyclin D1 of BMEC by Real-time PCR and Western blotting.The results showed that the DNA synthesis of BMEC,the numbers of cells in S and G2/M phase,and Cyclin D1 expression levels in BMEC were all increased after BMEC was transfected with a GlyRS overexpression vector,whereas all of the above indexes were reduced after BMEC was transfected with a shRNA targeting against GlyRS.This study revealed that GlyRS accelerates cell cycle transformation,increases the number of DNA synthesis by upregulating the expression of Cyclin D1,thereby promoting BMEC proliferation.     

甘氨酰tRNA合成酶对奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响

甘氨酰tRNA合成酶(glycyl-tRNA synthetase,GlyRS)是重要的氨基酰tRNA合成酶(aminoacyl-tRNA synthetases,aaRSs)家族成员。目前,国内外关于GlyRS 在奶牛乳腺发育过程中表达及调节的研究鲜有报道。为了揭示GlyRS的表达与奶牛乳腺发育与泌乳之间的关系,本试验应用EdU免疫荧光法、流式细胞术检测GlyRS对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMEC)中DNA数目及细胞周期的影响,实时荧光定量PCR、Western blotting技术检测GlyRS对BMEC中Cyclin D1的表达影响。结果显示,GlyRS过表达时,细胞的DNA合成、处于S期和G2/M期的细胞数、细胞中Cyclin D1的表达均增加;GlyRS抑制后,细胞的DNA合成、处于S期和G2/M期的细胞数、细胞中Cyclin D1的表达均减少。表明GlyRS通过上调Cyclin D1的表达,加快细胞周期转换,增加DNA合成数目,从而促进BMEC增殖。     

中药王不留行对奶牛乳腺细胞增殖及泌乳的影响

为确定中药王不留行对奶牛乳腺细胞泌乳功能的影响,以王不留行为原料,通过水浸提得到王不留行提取液,测出王不留行提取液中增乳活性物质邻苯二甲酸二丁酯含量,设置不同浓度中药提取液进行细胞试验,观察其对细胞泌乳的影响,筛选出增乳效力最显著的药物浓度。结果2 mg/mL(生药浓度)药物组增乳效果最显著,提示中药王不留行可直接作用于奶牛乳腺上皮细胞促进泌乳。     

奶牛乳腺免疫细胞防御机理研究进展

奶牛乳腺中的初级吞噬细胞、嗜中性粒细胞(PMN)和巨噬细胞构成了抵御病原体入侵的第1道防线。在健康奶牛的乳腺中,巨噬细胞占主导地位且充当哨兵的角色。当病原体侵入乳腺时,巨噬细胞及乳腺上皮细胞就会释放出直接将PMN迁移到该区域的趋化剂,使PMN从循环中迅速流入并吞噬和杀灭细菌,起到保护的作用。抵御病原体入侵的第2道防线是由记忆细胞和免疫球蛋白组成的网络,它们与第1道防线相互作用。随着分子生物学技术的发展,更好地了解炎症反应的调节机制可为研究和调节宿主与病原体的相互作用提供理论基础,因此本文就奶牛乳腺免疫细胞防御机理的研究进展进行了综述。     

蛋氨酸对奶牛乳腺上皮细胞亚细胞蛋白质组的影响研究

为寻找奶牛乳腺上皮细胞亚细胞结构中与泌乳相关的重要蛋白质、从蛋白质水平揭示乳蛋白合成的调控机制,应用双向凝胶电泳技术分离体外培养的蛋氨酸处理组与正常组奶牛乳腺上皮细胞蛋白质,利用Image Maser 2D软件对图谱进行对比分析,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和数据库检索鉴定,并采用实时荧光定量PCR技术在mRNA水平上验证2-DE结果。质谱鉴定出8个表达上调的差异蛋白质,大多数差异蛋白质的功能涉及细胞骨架构成、能量代谢等过程。这些差异点的发现为研究奶牛泌乳机理提供了有益的线索。     

人Bcl-2乳腺定位表达转基因小鼠的建立

以 p CAT、p WB和 p WC为原始质粒 ,构建 WAP启动子调控的 Bcl- 2乳腺组织特异性表达载体 p WBS。载体用Bgl +Sal +Pvu 酶切 ,回收 3.0 kb的基因片段 WAP- Bcl- 2 - SV40 Poly A,通过显微注射方法导入 C5 7BL / 6 J×DBA/ 2 JF1代小鼠受精卵的雄原核内。共注射 10 0 0枚卵 ,将存活的约 6 0 0枚卵分别移植至 2 9只假孕母鼠输卵管内 ,获得仔鼠 5 5只。PCR检测 ,阳性鼠 12只。Southern blot检测 ,阳性鼠 4只 ,其中公、母鼠各 2只 ,在饲养过程中 ,2只公鼠均意外死亡。Western blot证实 ,1只母鼠 Bcl- 2表达阳性 ,其 F1代的 40只小鼠中 ,有 18只呈 PCR阳性 ,其中母鼠8只 ,在 5个月的反复怀孕过程中 ,未观察到乳房有任何肿瘤或肿块的出现 ,证实 Bcl- 2单独在转基因鼠乳腺中表达不会引起转基因鼠乳腺癌的发生。     

miRNA对乳腺发育及泌乳调节作用的研究进展

microRNA(miRNA)是一类在转录后调节基因表达的非编码RNA,已有大量研究表明,miRNA参与多种生命活动的调节,包括细胞增殖与分化、激素分泌、新陈代谢、肌肉和脂肪的形成发育、免疫应答反应、疾病的发生和肿瘤的形成等.近年来miRNA已成为生命科学研究中的亮点.随着miRNA的发现及其功能研究的深入,有关乳腺生长发育和泌乳调控的研究也进入了miRNA调控的新层面.文章总结了乳腺发育和泌乳过程中miRNA表达的阶段特异性及健康乳腺和乳腺病变时miRNA的差异表达,综述了miRNA对乳腺发育和泌乳的调节作用,旨在为从miRNA层面研究乳腺发育及泌乳提供新思路.     

大豆黄酮和染料木素对体外培养奶牛乳腺上皮细胞增殖及抗氧化水平的影响

通过体外细胞培养的方法探讨大豆黄酮（Daidzein,Da）和染料木素（Genistein,Ge）对奶牛乳腺上皮细胞增殖及抗氧化水平的影响。试验分空白对照组、10ng／mL雌二醇（Ez）组、不同浓度Da和Ge（1、10、100、1000ng／mL）组,培养72h后,采用MTT法检测细胞增殖情况。结果表明,10、100ng／mLGe组和100、1000ng／mLDa组同空白对照组比较可显著促进奶牛乳腺上皮细胞的增殖（P〈0．05）,但均显著低于E2组（P〈0．05）。另取处于对数生长期的乳腺上皮细胞加入不同浓度Da和Ge（1、10、100、1000ng／mL）继续培养24h,检测细胞培养液中总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—PX）活性、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量。结果表明,100、1000ng／mLDa组及100、1000ng／mL Ge组较空白组显著提高了T—SOD活性（P〈0．05）,显著降低了MDA含量（P〈0．05）;100、1000ng／mL Da组及10、100、1000ng／mL Ge组显著提高了NO含量（P〈0．05）;1000ng／mL Da组及100、1000ng／mL Ge组显著提高了GSH—PX活性（P〈0．05）。可见,Da和Ge在一定浓度范围内均有促进奶牛乳腺上皮细胞增殖及抗氧化水平提高的作用。     

王不留行增乳活性单体对奶牛乳腺上皮细胞增殖及泌乳性能的影响

应用CASY细胞分析仪及HPLC分别检测王不留行邻苯二甲酸二丁酯对乳腺上皮细胞增殖、细胞活力及乳腺上皮细胞分泌β-酪蛋白、乳糖的影响,研究王不留行增乳活性单体邻苯二甲酸二丁酯对奶牛泌乳中期乳腺上皮细胞增殖和泌乳性能的影响。试验结果表明,王不留行增乳活性单体成份邻苯二甲酸二丁酯对奶牛乳腺上皮细胞的增殖和细胞活力提高均显著(P0.05);能显著提高乳腺上皮细胞β-酪蛋白的表达(P0.05),也能提高乳糖的分泌(P0.05,P0.05)。因此,王不留行增乳活性单体邻苯二甲酸二丁酯可显著提高乳腺上皮细胞的增殖和泌乳能力。