嗜酸乳杆菌抗氧化活性评价及其对小鼠单核巨噬细胞氧化应激的影响

本试验旨在评价嗜酸乳杆菌抗氧化活性及其对小鼠单核巨噬细胞(RAW 264.7细胞)氧化应激的影响.制备嗜酸乳杆菌培养物上清液、完整细胞和胞内提取物,比较其对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、羟自由基和亚油酸的清除能力.筛选抗氧化能力较强的嗜酸乳杆菌培养物上清液,设置4个剂量(5、25、50和125μL)分别作...     

白藜芦醇对氧化应激仔猪回肠黏膜形态、抗氧化能力、紧密连接蛋白及炎性因子mRNA表达的影响

本试验旨在研究白藜芦醇(Res)对氧化应激仔猪肠道黏膜结构、抗氧化能力、紧密连接蛋白及炎性因子mRNA表达的影响.选择健康状况良好、胎次相近的28日龄三元杂交(杜×长×大)断奶仔猪30头,随机分为5组,对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加0、10、30、90 mg/kg Res,每组6个重复,每个重复1头仔猪...     

苏氨酸对大鼠小肠上皮细胞系IEC-6细胞活性和紧密连接蛋白表达的影响

本研究旨在探讨苏氨酸对大鼠小肠上皮细胞活性和增殖的影响,并研究苏氨酸是否对大鼠小肠上皮细胞紧密连接蛋白表达具有调控作用。试验采用不同浓度的苏氨酸(0、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0 mmol/L)处理大鼠小肠上皮细胞系IEC-6细胞24 h,用噻唑兰(MTT)法测定IEC-6细胞活性,苏木精-伊红(HE)染色观察IEC-6细胞增殖情况,Western-blot法检测IEC-6细胞紧密连接蛋白表达情况。结果表明:各浓度的苏氨酸均能不同程度地提高IEC-6细胞的活性,0.5 mmol/L苏氨酸处理24 h时IEC-6细胞的活性最高,且与未经苏氨酸处理的对照组差异显著(P0.05)。不同浓度的苏氨酸均能促进IEC-6细胞的增殖,且在苏氨酸浓度为0.5 mmol/L时促增殖作用最明显。与未经苏氨酸处理的对照组相比,0.1 mmol/L的苏氨酸对紧密连接蛋白claudin-3的表达未产生显著影响(P0.05),但显著促进了occludin的表达(P 0.05);苏氨酸浓度为0.5、1.0、5.0、10.0 mmol/L时均显著促进上述2种紧密连接蛋白的表达(P 0.05),使claudin-3的相对表达量分别增加了1.84、7.08、8.71、3.83倍,occludin的相对表达量分别增加了2.65、2.71、2.82、3.88倍。综上,适宜浓度的苏氨酸对大鼠小肠上皮细胞系IEC-6细胞的活性和增殖具有促进作用,且在浓度为0.5 mmol/L时作用最显著,同时促进了紧密连接蛋白claudin-3和occludin的表达。     

β-Conglycinin酶解肽对仔猪空肠上皮细胞通透性及紧密连接蛋白表达的影响

本研究通过测定大豆抗原β-Conglycinin酶解肽(52ku)对仔猪空肠上皮细胞(IPEC)通透性及紧密连接蛋白Occludin与ZO-1基因mRNA表达的影响,为探索其对肠道损伤的相关机制提供依据。本试验分别采用不同浓度(0、0.125、0.25、0.5、1、2mg·mL-1)52ku酶解肽处理IPEC 2、4、6、8、12、24h后,通过测定细胞存活力(MTT值)、跨上皮细胞电阻值(TEER)以及细胞培养液中碱性磷酸酶(AP)的活性,检测52ku酶解肽对细胞膜通透性的影响。并选取0.5mg·mL-1 52ku酶解肽处理IPEC 24h后,用实时荧光定量PCR方法检测Occludin与ZO-1基因mRNA表达量的变化情况。结果表明,52ku酶解肽处理仔猪空肠上皮细胞后,MTT值和TEER呈时间-剂量依赖性降低(P0.05)。24h处理后,AP活性呈显著升高趋势(P0.05)。与对照组相比,52ku酶解肽可使Occludin和ZO-1基因mRNA相对表达量均呈显著下降趋势(P0.05)。总之,52ku酶解肽使仔猪空肠上皮细胞通透性增加,并降低Occludin或ZO-1的mRNA表达。     

牛至油对断奶仔猪小肠形态、细胞因子含量及紧密连接蛋白mRNA表达的影响

将120头25日龄断奶的“大白×长白”二元杂交仔猪按公母各半、体质量相近的原则随机分为4组,每组3个重复,每个重复10头猪,分别饲喂添加0,300,500,800 mg/kg牛至油的基础日粮,试验期为30 d,测定小肠形态、小肠组织细胞因子和SIgA含量及肠道紧密连接相关基因mRNA表达。结果显示,不同质量浓度的牛至油对小肠各段绒毛高度与隐窝深度的比值均有一定提高,并且在空肠与回肠结果中500 mg/kg牛至油组与对照组相比有显著性差异(P<0.05)和极显著性差异(P<0.01);各小肠段细胞因子、SIgA都有所提高,只是显著性不同;肠道紧密连接基因相对表达量都有增加,特别是500 mg/kg牛至油组在各段小肠中与对照组存在显著性差异(P<0.05)。结果表明,日粮中添加牛至油可以改善断奶仔猪小肠形态结构及其功能,促进仔猪肠道健康。     

添加硒对氧化应激仔猪抗氧化能力和组织细胞超微结构的影响

本试验采用已建立的氧化应激模型,进一步研究添加硒对氧化应激仔猪抗氧化能力和组织细胞超微结构的影响。试验采用2×3＋1因子试验设计,84头（26±2）d断奶仔猪随机分配到7个处理中,每个处理6个重复,每个重复2头猪。检测血清抗氧化酶活力、MDA含量和组织细胞超微结构。结果发现：与非应激组相比,氧化应激引起血清抗氧化酶活力降低和MDA含量上升,肝脏和脾脏发生细胞凋亡;对应激试猪,随着硒添加水平的升高,氧化损伤的程度减弱。表现为GSH、GPx、SOD和CAT活性提高,MDA降低,细胞结构损伤减弱。当硒添加量上升到0.6mg/kg时,其抗氧化酶活力可达到与非应激组差异不显著的水平。结果表明,氧化应激会降低机体抗氧化能力,损伤细胞结构,补充硒有助于维持机体氧化还原稳衡动态的正常,减轻细胞的过氧化损伤;在本试验条件下,在氧化应激仔猪日粮中添加0.6mg/kg硒可获得较好的抗应激效应。     

猴头菇多糖对氧化应激的IPEC-J2细胞抗氧化能力及紧密连接蛋白ZO-1的影响

旨在探究在H_2O_2诱导的氧化应激损伤状态下,猴头菇多糖(HEPs)对IPEC-J2细胞的保护作用。将IPEC-J2细胞分为5组:空白组、模型组、HEPs低剂量组、HEPs中剂量组、HEPs高剂量组。采用MTT法分别选取试验用的H_2O_2和HEPs的最佳剂量;利用DCFH-DA染色观察并测定细胞内活性氧簇(ROS)的含量;通过比色法检测培养细胞上清液中丙二醛(MDA)的含量,细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活力以及乳酸脱氢酶(LDH)的释放率;应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测紧密连接蛋白ZO-1基因的转录水平。结果显示,(1)构建IPEC-J2细胞氧化应激模型的H_2O_2浓度为0.4mmol·L-1。(2)H_2O_2能够极显著地增加细胞内的ROS含量,诱导细胞凋亡,同时极显著地降低了SOD和CAT的活力,极显著地升高MDA含量与LDH释放率。但是,与模型组相比,经过HEPs预处理后,细胞内ROS的含量极显著地降低(P0.01);同时极显著地提高了SOD和CAT的活力(P0.01),极显著地降低了MDA含量与LDH释放率(P0.01)。(3)实时荧光定量PCR结果显示,H_2O_2能够极显著地降低ZO-1基因的转录量(P0.01),与模型组比较,HEPs能够极显著的提高ZO-1基因的转录量(P0.01);Western blot结果显示ZO-1蛋白的表达量与ZO-1基因类似。可见,猴头菇多糖对H_2O_2诱导氧化损伤状态下的IPEC-J2细胞具有保护作用。     

大豆球蛋白对仔猪小肠上皮细胞Occludin mRNA表达的影响

旨在研究纯化的大豆球蛋白对离体培养的仔猪空肠上皮细胞(IPEC细胞)通透性以及对细胞间紧密连接蛋白Occludin mRNA表达的影响。将不同浓度的大豆球蛋白(0～5.0mg·mL-1)与肠上皮细胞共同培养24h后,检测跨上皮细胞电阻值并用实时荧光定量PCR方法研究Occludin mRNA表达的变化规律。结果表明,与对照组相比,除大豆球蛋白浓度为0.5mg·mL-1时无明显变化,其他各浓度跨上皮细胞电阻值和Occludin mRNA相对表达量均呈显著下降趋势(P<0.001)。由此可知,大豆球蛋白使仔猪小肠上皮细胞通透性增加并使OccludinmRNA表达量下降,进一步明确了大豆球蛋白影响细胞增殖且对肠上皮细胞造成直接损伤,并破坏了肠上皮细胞完整性。     

嗜酸乳杆菌发酵棉粕对黄羽肉鸡免疫功能和抗氧化性能的影响

试验旨在研究嗜酸乳杆菌发酵棉粕对黄羽肉鸡免疫功能和抗氧化性能的影响。选取21日龄健康黄羽肉公鸡180只,随机分为3组：对照组、Ⅰ组和Ⅱ组,每组6个重复,每个重复10只鸡。对照组饲喂含6%棉粕的基础日粮,Ⅰ组饲喂含6%嗜酸乳杆菌发酵棉粕的试验日粮,Ⅱ组饲喂含6%棉粕和7×10⁴ CFU/g嗜酸乳杆菌的试验日粮。结果显示：①42日龄时,各组间免疫器官指数无显著差异（P>0.05）。64日龄时,Ⅰ组的脾脏指数、法氏囊指数和血清中白细胞介素-2（IL-2）含量分别显著提高了47.69%、20.59%和5.77%（P<0.05）,脾脏中白细胞介素-10（IL-10） mRNA表达量极显著提高了449.37%（P<0.01）。Ⅱ组脾脏中γ-干扰素（IFN-γ）和IL-10 mRNA表达量分别显著提高了153.45%和255.70%（P<0.05）;与Ⅱ组相比,Ⅰ组脾脏中IL-10 mRNA表达量提高了54.45%（P>0.05）。②42日龄时,与对照组相比,Ⅰ组血清的总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性和总抗氧化能力（T-AOC）分别显著提高了8.26%和22.13%（P<0.05）,肝脏T-AOC显著提高了22.34%（P<0.05）;与Ⅱ组相比,Ⅰ组血清T-AOC显著提高了27.25%（P<0.05）。64日龄时,与对照组相比,Ⅰ组血清、肝脏T-SOD活性分别极显著提高了10.17%、26.17%（P<0.01）,血清GSH-Px活性显著提高了20.45%（P<0.05）;与Ⅱ组相比,Ⅰ组血清、肝脏GSH-Px活性分别显著提高了19.45%、21.23%（P<0.05）,肝脏T-SOD活性极显著提高了18.41%（P<0.01）。以上研究结果提示,日粮中添加发酵棉粕可以显著增强黄羽肉鸡的免疫功能和抗氧化性能,嗜酸乳杆菌对黄羽肉鸡的免疫功能和抗氧化性能有一定的促进作用,但效果不显著。     

枯草芽孢杆菌与嗜酸乳杆菌对黄羽肉鸡小肠黏膜形态和免疫器官指数的影响

为了研究枯草芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌对黄羽肉鸡小肠黏膜形态参数和免疫器官指数的影响,试验将1日龄健康肉鸡180只随机分成3组,每组3个重复,每个重复20只,1组为对照组,饲喂基础日粮;2,3组在基础日粮中分别添加0.1%枯草芽孢杆菌、0.1%嗜酸乳杆菌,并采用组织学技术研究肉鸡小肠黏膜的形态结构与免疫器官指数的变化。结果表明:1)与对照组相比,3组肉鸡十二指肠绒毛高度显著提高(P0.05),2,3组绒毛长度/隐窝深度(V/C值)显著提高(P0.05);2,3组空肠绒毛高度有所提高,但差异不显著(P0.05),V/C值显著提高(P0.05);2,3组回肠绒毛高度均显著提高(P0.05),V/C值也显著提高(P0.05)。2)与对照组相比,2,3组肉鸡胸腺与法氏囊指数均有增加的趋势(P0.05)。说明枯草芽孢杆菌与嗜酸乳杆菌可以提高肉鸡小肠黏膜绒毛长度、V/C值和免疫器官指数。     

植酸酶基因在嗜酸乳杆菌中的表达

植酸酶和嗜酸乳杆菌是重要的饲料添加剂,为获得产植酸酶的嗜酸乳杆菌菌株,克隆了大肠杆菌植酸酶基因,构建表达载体并转化嗜酸乳杆菌,对重组嗜酸乳杆菌进行发酵产酶并测定所产酶液的酶学性质,进一步研究重组嗜酸乳杆菌的耐酸性及植酸酶液的抗蛋白酶活性。结果表明：重组嗜酸乳杆菌发酵24 h植酸酶活性为984 U/mL,植酸酶的最适催化pH为4.5,最适催化温度为60℃。重组嗜酸乳杆菌在pH 2.0～4.5有一定的耐酸性,在pH 2.0条件下2 h的存活率为76.4%。植酸酶液用胃蛋白酶处理160 min后植酸酶液剩余85%的相对酶活,用胰蛋白酶处理160 min后剩余29%的相对酶活。上述研究结果为重组嗜酸乳杆菌后续应用研究提供了重要依据。     

大黄素对免疫应激仔猪回肠黏膜形态、抗氧化能力、紧密连接蛋白及炎性因子mRNA表达的影响

试验旨在研究大黄素(emodin,ED)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的免疫应激断奶仔猪肠道的黏膜形态、抗氧化能力、紧密连接蛋白及炎性因子mRNA的影响。试验挑选健康状况良好、胎次相近的28日龄左右的三元杂交(杜×长×大)断奶仔猪24头,采用2×2双因素随机试验设计,分为日粮(基础日粮或日粮中添加300 mg/kg大黄素)和应激(生理盐水对照或脂多糖注射)两个处理,4个组设计如下:(1)CON组,饲喂基础日粮;(2)ED组,日粮中添加300 mg/kg大黄素;(3)LPS应激组,注射LPS、饲喂基础饲粮;(4)LPS+ED组,注射LPS、饲喂基础饲粮并添加300 mg/kg大黄素。在试验第21 d LPS应激组和LPS+大黄素组腹膜注射100μg/kg·BW LPS,建立免疫应激模型,对照组和大黄素组注射同等剂量的灭菌生理盐水。试验期为21 d。结果表明:对比基础日粮组,饲粮中添加300 mg/kg ED仔猪的绒毛高度和V/C指标显著升高(P<0.05);在饲粮中添加ED后,则会影响过氧化氢酶(CAT)活力的升高、总抗氧化能力(T-AOC)的上升(P...     

嗜酸乳杆菌的研究进展

嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)具有调节肠道菌群、抑制病原菌、增强免疫力、降低血脂等多种益生功效,其在食品、医药、饲料等领域中的应用日益增多。文章根据国内外嗜酸乳杆菌的研究与利用情况,对嗜酸乳杆菌的生物学特性、安全性、益生功能与应用等方面进行论述,并在此基础上探讨了嗜酸乳杆菌的发展前景。     

海藻多糖对仔猪小肠上皮细胞紧密连接蛋白及核转录因子-κB信号通路相关基因表达的影响

本试验旨在研究不同浓度海藻多糖对仔猪小肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)紧密连接蛋白及核转录因子-κB(NF-κB)信号通路相关基因表达的影响。IPEC-J2细胞加入浓度分别为0(对照)、60、120和240μg/mL的海藻多糖处理培养基培养24 h,分析海藻多糖对IPEC-J2细胞机械屏障和免疫屏障相关基因以及蛋白表达的影响。结果表明:1)与对照组相比,60、120μg/mL的海藻多糖可以显著上调紧密连接蛋白闭锁蛋白(occludin)和闭合小环蛋白-1(ZO-1)的mRNA相对表达量(P0.05);但240μg/mL海藻多糖组occludin和ZO-1的mRNA相对表达量与对照组无显著差异(P0.05)。与对照组相比,120和240μg/mL的海藻多糖可以显著上调封闭蛋白-1(claudin-1)的mRNA相对表达量(P0.05)。与对照组相比,120、240μg/mL的海藻多糖可以显著上调claudin-1和ZO-1的蛋白相对表达量(P0.05)。2)与对照组相比,60、120和240μg/mL的海藻多糖均显著降低了髓样分化蛋白88(MyD88)和p65的mRNA相对表达量(P0.05),240μg/mL的海藻多糖显著降低了Toll样受体-4(TLR-4)和核转录因子-κB抑制蛋白α(IκBα)的mRNA相对表达量(P0.05)。由此可知,海藻多糖可以上调IPEC-J2细胞紧密连接蛋白occludin、claudin-1和ZO-1的mRNA相对表达量,降低IPEC-J2细胞NF-κB信号通路相关基因的表达,对改善仔猪小肠上皮细胞屏障功能具有积极的作用。     

早期断奶对仔猪肠通透性和肠上皮紧密连接蛋白Occludin mRNA 表达的影响

本文旨在研究早期断奶仔猪的肠通透性变化并探讨其机制.试验采用32头21日龄断奶仔猪,并于仔猪21、28和35日龄取样测定血浆D-乳酸含量、二胺氧化酶(DAO)活性和尿中乳果糖/甘露醇比率观察肠通透性改变,同时检测肠上皮紧密连接蛋白Occludin mRNA表达水平.结果显示:与断奶前相比,28日龄时血浆D-乳酸含量、DAO活性和乳果糖/甘露醇比差异达到显著水平(P<0.05),且至35日龄时,肠道仍然维持这种较高的通透性;仔猪断奶后Occludin mRNA相对表达量下降明显,与断奶前相比差异显著(P<0.05),35日龄时,表达量有所恢复,但仍然低于断奶前表达水平.试验结果提示,早期断奶后仔猪肠道的通透性增加,肠屏障功能破坏,可能归因于肠上皮细胞紧密连接蛋白Occludin mRNA表达下降.     

凝结芽孢杆菌对断奶仔猪肠道抗氧化和抗病毒能力的影响

为了研究日粮中添加凝结芽孢杆菌对断奶仔猪肠道抗氧化和抗病毒能力的影响,试验选取24头21日龄的健康断奶仔猪(杜×长×大),随机分为3组(对照组、BC6组、BC7组),每组8个重复,对照组饲喂基础日粮,BC6组饲喂基础日粮+凝结芽孢杆菌(2×10~6 cfu/g饲料),BC7组饲喂基础日粮+凝结芽孢杆菌(2×10~7 cfu/g饲料),于试验第21天屠宰取样,检测空肠黏膜组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活力和丙二醛(MDA)、过氧化氢(H_2O_2)含量,以及空肠炎性抗病毒和免疫调节相关基因[热休克蛋白1(HSPH1)、趋化因子(CCL2)、干扰素-α(IFN-α)、干扰素-β(IFN-β)、白细胞介素-4(IL-4)、抗氧化应激转录因子2(Nrf-2)基因]及相关蛋白[2’-5’寡聚腺苷酸合成酶1(OAS1)、抗黏液病毒1(MX1)]的相对表达量。结果表明:与对照组相比, BC6组空肠MDA、H_2O_2的含量显著降低(P0.05),HSPH1、IFN-β基因的相对表达量显著下调(P0.05),OAS1蛋白相对表达量显著升高(P0.05);BC7组空肠H_2O_2的含量显著降低(P0.05),SOD和CAT活力显著升高(P0.05),IL-4、HSPH1和Nrf-2基因的相对表达量显著下调(P0.05),IFN-β基因的相对表达量显著上调(P0.05),MX1蛋白相对表达量显著升高(P0.05)。说明日粮中添加凝结芽孢杆菌可以提高断奶仔猪肠道抗氧化能力和抗病毒能力,促进仔猪肠道吸收,从而维护肠道稳态,且日粮中添加2×10~7cfu/g的凝结芽孢杆菌效果更好。     

植物乳杆菌对氧化应激肉鸡抗氧化能力和肠道真菌结构的影响

益生菌能够通过调节肠道菌群提高肉鸡的抗氧化能力,但肠道真菌在其中发挥的作用鲜有研究。因此,本试验旨在研究植物乳杆菌P8对氧化应激肉鸡回肠形态、抗氧化能力和盲肠真菌结构的影响。试验选用300只体重相近的1日龄肉鸡,随机分为3组,每组10个重复,每个重复10只鸡。对照组(Con组)肉鸡饲喂基础饲粮,地塞米松(DEX)处理组(DEX组)肉鸡饲喂基础饲粮并于试验第16天腹腔注射DEX,DEX和植物乳杆菌P8共处理组(DEX＿P8组)肉鸡饲喂含有1×108CFU/g植物乳杆菌P8菌粉的饲粮并于试验第16天腹腔注射DEX。试验第21天采集肉鸡血浆、回肠和盲肠内容物,测定回肠形态、抗氧化指标和盲肠内容物真菌组成结构。结果表明：1)与Con组相比,DEX处理对肉鸡回肠形态无显著影响(P>0.05),但显著降低了血浆和回肠黏膜中核因子E2相关因子2(Nrf2)、谷胱甘肽(GSH)含量及血红素氧合酶-1(HO-1)活性和总抗氧化能力(T-AOC)(P<0.05);饲粮中添加植物乳杆菌P8菌粉对DEX处理肉鸡回肠形态无显著影响(P>0.05),但显著提高了血浆和回肠黏膜中Nrf2、GSH含...     

嗜酸乳杆菌培养物对断奶仔猪肠道发育及消化酶活性的影响

研究旨在探讨在断奶仔猪饲粮中添加发酵豆粕及嗜酸乳杆菌培养物对仔猪肠道形态结构及空肠消化酶活性的影响。选用遗传背景、胎次和体重相近的21日龄断奶仔猪48头,随机分为4个处理,每个处理3个重复,每个重复4头仔猪。对照组仔猪饲喂玉米-豆粕型基础饲粮,试验Ⅰ组仔猪饲喂奶粉饲粮(由某公司提供),试验Ⅱ组仔猪饲喂用发酵豆粕代替10.0%普通豆粕的试验饲粮,试验Ⅲ组饲粮是在试验Ⅱ组基础上用嗜酸乳杆菌培养物代替3.0%原有原料,试验期21 d。结果显示:1饲粮中用发酵豆粕代替10%普通豆粕显著提高35日龄仔猪十二指肠、回肠绒毛高度,降低35日龄仔猪隐窝深度,提高绒毛高度/隐窝深度(V/C)(P0.05)。2饲粮添加3%嗜酸乳杆菌培养物显著提高了35日龄仔猪各段小肠的绒毛高度,降低35日龄仔猪各段小肠隐窝深度,提高42日龄各段小肠绒毛高度/隐窝深度(P0.05)。3通过透射电镜发现,对照组空肠微绒毛稀疏、短小、排列不整齐;试验组仔猪空肠微绒毛较长、整齐、密集,尤其是添加嗜酸乳杆菌组效果最好。4饲粮中用发酵豆粕代替10%普通豆粕显著提高了35日龄仔猪空肠蔗糖酶、麦芽糖酶活性(P0.05),提高42日龄仔猪麦芽糖酶活性(P0.05),提高42日龄仔猪麦芽糖酶活性。5饲粮添加3%嗜酸乳杆菌培养物与只添加发酵豆粕相比,仔猪空肠二糖酶、Ca2+/Mg2+-ATP酶活性差异不显著(P0.05),但35日龄时Na+/K+-ATP酶活性显著提高(P0.05)。发酵豆粕可改善仔猪空肠微绒毛结构,减缓断奶应激引起的乳糖酶急剧下降,提高蔗糖酶、麦芽糖酶活性。用嗜酸乳杆菌培养物替代原有原料3%后各指标效果更好,替代后其效果与奶粉饲粮的效果相当。