鸡胚接种毒害艾美耳球虫Eimeria necatrix的免疫研究

给15、17、19日胚龄的鸡胚经羊膜腔分别接种不同剂量的毒害艾美耳球虫Eimeria necatrix孢子化卵囊、孢子囊或子孢子,出雏后在无球虫环境中笼养,收集2~7日龄间全部粪便,以饱和盐水漂浮法检查卵囊的产生,并于17日龄时以1.2×105个/鸡的同源孢子化卵囊攻虫,以相对增重率(RWG)、病变计分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)评价免疫保护效果。结果表明,孢子化卵囊、孢子囊或子孢子经羊膜腔免疫接种后对鸡胚的孵化率无明显影响,所有接种组在出雏后2~7日龄间均能检获后代卵囊,攻虫后各免疫组的相对增重率由攻虫对照的38%~42.9%提高到73.2%~90.5%,病变计分减少率达50%~74.9%,相对卵囊产量为攻虫对照组的28.1%~60.2%,表明以一定剂量的E.necatrix孢子化卵囊、孢子囊或子孢子经羊膜腔免疫接种鸡胚,可诱导鸡在出雏后笼养条件下对同源艾美耳球虫的免疫保护力;比较不同剂量、不同胚龄的免疫效果,发现在试验设定条件下于17日胚龄接种8×104个子孢子/胚的效果最好。     

不同发育期两种艾美耳球虫在鸡消化道内的分布

对柔嫩艾美耳球虫Eimeria teenlla和巨型艾美耳球虫Eimeria maxima的卵囊、孢子囊和子孢子在鸡消化道和粪便中的分布情况进行了研究。口服接种柔嫩艾美耳球虫卵囊第1小时后,盲肠内孢子囊数为3.4×10~8、以后则逐渐减少;而子孢子数增加且直到接种后第12小时仍保持一个高水平。其它肠段只有少量的孢子囊和子孢子。在接种巨型艾美耳球虫卵囊后的第2小时,主要在空肠内发现有大量的子孢子。研究发现,柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫的绝大多数子孢子分别寄居在盲肠和空肠内,表明每种球虫子孢子侵袭部位的特异性在侵袭发生前就确定了。     

鸡胚接种柔嫩艾美耳球虫和堆形艾美耳球虫活卵囊的免疫保护试验

给18日龄鸡胚接种一定剂量的柔嫩艾美耳球虫(Eim eria tenella)和/或堆形艾美耳球虫(E.acervulina)孢子化卵囊,出雏后在无球虫环境中笼养,1~10日龄每天收集各组粪便样本,计数克粪便卵囊数(OPG),并于14日龄时以大剂量同源孢子化卵囊攻虫,以相对增重率(RWG)、饲料转化率(FCR)、相对卵囊产量(ROP)评价免疫保护效果。结果显示,以E.tenella或E.acervulina卵囊免疫18日龄鸡胚,其卵囊排出的潜隐期及达到峰值的时间与1日龄雏鸡接种组相一致,有相似的排卵囊曲线,提示其诱导免疫的建立是在出雏后开始建立的。攻虫后各免疫组的RWG由攻虫对照组的31.9%~51.7%提高到了76.5%~83.6%,RCR由攻虫对照组的4.11~4.89改善为2.72~2.96,ROP降至4.7%~23.5%。结果表明以一定剂量E.tenella和E.acervulina卵囊单独或混合经羊膜腔免疫18日龄鸡胚都可以建立起针对出雏后14日龄同源攻虫的良好免疫保护力。比较混合免疫E.tenella和E.acervulina卵囊组与单一接种E.tenella或E.acervulina卵囊组的免疫效果发现,混合免疫组的各项指标均稍优于后者。     

鸡柔嫩艾美耳球虫YL株多次传代后的致病性研究

为研究多次传代后的鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)YL株的致病性,分别以不同剂量的36代次柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊感染7日龄雏鸡,通过临床症状、死亡率、血便程度、潜隐期、盲肠病变、平均增重及每克粪便卵囊数(OPG)对其致病性进行评价.结果显示,不同剂量孢子化卵囊感染雏鸡均在感染后3d～4d出现血便,球...     

鸡球虫病诊断与治疗

鸡球虫病是一种肠道寄生性原虫病,是艾美耳属的多种球虫寄生在鸡肠粘膜内而引起。其中寄生在盲肠粘膜上皮细胞内的柔嫩艾美耳球虫的致病力最强,称为盲肠球虫;另一种是侵害小肠粘膜的毒害艾美白球虫,又称小肠型球虫。通过球虫卵囊传播,鸡吞食孢子化卵囊而感染,主要危害3月龄以内的幼鸡,特别是15～45日龄的鸡最易发生,暴发时常造成大批死亡。     

毒害艾美耳球虫未孢子化卵囊壁的分离与纯化

用毒害艾美耳球虫孢子化卵囊接种50只15日龄无球虫感染的雏鸡,感染后第6~12天,每隔12 h收集1次粪便,按常规方法分离卵囊。未孢子化卵囊经次氯酸钠溶液处理后,用1.1 mol/L蔗糖溶液漂浮法纯化卵囊。采用玻璃珠涡旋法破碎卵囊壁,最后用孔径10.0μm的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)膜过滤获得纯化的卵囊壁。研究结果为进一步研究毒害艾美耳球虫卵囊壁的结构及其蛋白组成奠定了基础。     

鸡球虫Eimeria tenella体外繁殖适应株的建立研究

本项目采用鸡球虫子孢子接种鸡胚、鸭否和小鸭,试图培养出鸡全外繁殖适应株,建立起球虫体外培养模型。实验结果表明Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ接种３批小鸭Ｅ．ｍａｘｉｍａ接种２批小鸭均未获成功。Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ接种３批共３１只鸭胚,也未见子孢子发育至卵囊。而Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ能在鸡胚中发育至卵囊。但初代次接种时,接种过量胚容易死亡。接种量过低,卵囊收获量减小。因此采用了加大接种剂量和增加接种胚数的方法,促使球虫逐渐适应鸡胚。直线传代至第８代,球虫已适应鸡胚,接种剂量由每胚４万条子孢子降至１万条,一直传至２４代,建立起一株Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ鸡胚适应株。     

复方海南霉素的药效试验

从某鸡场发生球虫病鸡的粪便中分离出柔嫩艾美耳球虫卵囊，经鸡体繁殖、复壮，待球虫孢子化后，配成100000个／mL的球虫卵囊液，各取一mL分别感染随机分为9组的16日龄健康岭南黄鸡苗，通过饲喂配有不同剂量抗球虫药。结果表明，复方海南霉素能提高抗球虫效果。     

中药治疗幼隼球虫病

幼隼球虫病是由原生动物门的球虫所引起的一种寄生原虫病,病原为艾美耳属的7种球虫,其中危害最大的有两种：柔嫩艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫,前者寄生于盲肠中,后者寄生于小肠黏膜中。在临床上往往是多种球虫混合感染。球虫寄生于肠上皮细胞内,球虫卵囊随病幼隼粪便排出体外,在温暖和潮湿的环境里,卵囊经1～3d发育成具有感染性的孢子化卵囊,内含成熟的子孢子。     

大量制备毒害艾美耳球虫配子体方法的研究

鸡经嗉囊接种毒害艾美耳球虫孢子化卵囊148 h后,从鸡小肠中段分离成熟的第二代裂殖子;经外科手术方法,将第二代裂殖子直接注入鸡盲肠内,使第二代裂殖子同步发育至配子体;手术后30 h剖检鸡,刮取盲肠黏膜,随后依次通过透明质酸酶消化、滤膜过滤、红细胞裂解、Percoll密度梯度离心等步骤,分离、纯化毒害艾美耳球虫配子体。结果显示,通过本方法分离、纯化的配子体纯度高、数量多,可用于基因转录组学、蛋白质组学、免疫学和疫苗等方面的研究。