临床分离鸡源性大肠杆菌外膜蛋白型的研究

[目的]了解禽致病性大肠杆菌分离株的遗传相关性。[方法]对分离自保定、秦皇岛和北京3个地区规模化养鸡场的病死鸡体内的38株大肠杆菌,采用超声波裂解和N-十二烷基肌胺酸钠进行外膜蛋白(Omp)提取,利用SDS-PAGE进行Omp分型。[结果]38株大肠杆菌共有3个Omp型,其中Omp-1型为O78、O88、O2、O18、O93、O766个血清型分离株所共有,Omp-Ⅱ型多为O76血清型分离株,Omp-Ⅲ型为O93、O78、O88、O2分离株所共有。这表明同一血清型的菌株可能属于完全不同的Omp型,而血清学上毫不相关的分离株之间却可具有相同的Omp型。[结论]该研究证实了同一血清型的分离株之间可发生遗传分化,而不同血清型的分离株之间也可具有不同程度的遗传相关性。     

禽巴氏杆菌大肠杆菌融合二联弱毒菌株F4的培育

以恩诺沙星标记禽多杀性巴氏杆菌强毒株C48－1得到的耐药菌株C48－1（Enr^r,Chl^8) ,与禽大肠杆菌O78弱毒株O78（Chl^r,Enr^8) 作为亲本菌株，采用溶菌酶－EDTA法制备两亲本菌株原生质体，通过聚乙二醇（PEG）－新生磷酸钙促融系统进行两亲本菌株原生质体融合，得到16株双耐药融合菌株。选取融合菌株F4、F9进行初步的免疫试验，初步显示融合菌株F4是一株安全、具双联免疫效果的融合菌株。     

康宁木霉和白腐真菌原生质体融合子生物学特性的研究

为考察康宁木霉3.2774(Trichoderma.koningii 3.2774)和白腐真菌5.776(Phanerochaete chrysosporium 5.776)原生质体融合子生物学特性,采用同工酶聚丙烯凝胶电泳、插片培养、拮抗试验和生长曲线的测定,对康宁木霉和白腐真菌的融合子进行鉴定,结果表明:融合子酯酶同工酶电泳有不同于亲本的新酶带出现,融合子菌落与亲本之间存在拮抗,菌丝颜色不同,菌株生长速度慢于亲本菌株,这些生理生化性状上与亲本存在明显的差异,是一株融合双亲性状的新菌株。     

河北省南部鸡肝周炎大肠杆菌的分离及血清型鉴定

通过对2003年3月～2008年4月,自河北省邯郸市、邢台市、石家庄市、衡水市、沧州市等发病鸡场呈现典型肝周炎病变的病死鸡肝脏分离的132株致病性大肠杆菌进行了生化特性测定,O抗原血清型鉴定及药敏试验。结果表明132株均符合大肠杆菌生化特征,试验用55种大肠杆菌单因子阳性血清进行O血清型鉴定,确定了103株O血清型,占分离菌株数的78.03%(103/132)。选取O1、O21、O65、O78、O93血清型共15株菌株(每一血清型选取3株不同来源的菌株)做药敏试验,证实多数菌株对丁胺卡那霉素高敏,对头孢曲松中敏,而对磺胺甲硝唑耐受。     

灵武长枣果酒酿酒酵母与红酵母原生质体融合的研究

筛选酿酒酵母菌,并将其原生质体与红酵母原生质体进行融合,以期获得优良融合子.首先,从灵武长枣果皮上筛选分离出一株性能优良的酿酒酵母(YLLJ),然后用溶菌酶与蜗牛酶对其与红酵母菌的细胞壁进行酶解,制成原生质体,将两亲本原生质体按数量比1:1混合后,在促融合剂PEG作用下进行融合,融合子在高渗培养基上培养呈现黄色,既有酿酒能力又能产类胡萝卜素.     

香菇和凤尾菇原生质体融合初探

选用经高温灭活的香菇原养型双核原生质体作供体亲本,以带有脯氨酸（Prol)营养缺陷型标记的凤尾菇单核原生质体为受体亲本,对其原生质体融合情况进行研究。结果发现,两亲本原生质体的融合再生率为0．106％,部分融合子菌丝细胞多核,无锁状联合。对该融合子再进行原生质体分离、再生,得到了具有新的生理特性的菌株材料。表明这种单双核原生质体融合是实现食用菌属间远缘杂交育种的有益探索。     

河南省部分地区鸡大肠杆菌的分离鉴定及耐药性研究

为了解河南省鸡场大肠杆菌的流行情况,对采自周口、商丘、安阳等6个地区的腹泻鸡病料进行病原的细菌学检验和药敏试验,经分离培养、形态染色镜检、生化试验、血清学试验和动物试验,共分离鉴定出11株鸡大肠杆菌,有5种血清型,分别为O14、O15、O24、O143、O157。动物试验结果表明,分离鉴定出的这5种血清型大肠杆菌均有致病性,且毒力不同,其中从周口、开封、鹤壁分离的菌株毒力强,死亡率均为100%。药敏试验结果表明,大部分菌株对链霉素、阿莫西林/棒酸敏感,对头孢唑啉、强力霉素、氨苄西林、磷霉素、呋喃妥因均存在不同程度的耐药现象,其中对强力霉素、氨苄西林、头孢唑啉严重耐药。     

仔猪黄白痢致病大肠杆菌的分离鉴定

从百色市郊区两个猪场10头临诊发生典型仔猪黄白痢猪只的肛试粪样及死亡猪只的心脏、肝脏、脾脏、小肠内容物分离出12株菌株,结合分离菌在分离培养基上的生长特性、菌落染色镜检、生化试验、致病性试验等结果,证实12株分离菌中有9株的致病力相当强,是引起仔猪黄白痢的致病菌株。用大肠杆菌单价O抗原血清鉴定,发现12株分离菌中有3株无法确定其血清型,而另外9株的血清型包括有O45、O141、O103、O8及K88等5个型,其中有4株属O45,占总数的33.3%。     

用原生质体融合技术选育谷氨酸高产菌株

用适当方法制得枯草杆菌BR151(Trp~-,Lys~-,Met~-)和黄色短杆菌ZAU89101(Bio~-)的原生质体,在DNase存在条件下,用40％聚乙二醇(PEG)做助融剂,进行两菌株的原生质体融合。融合率为2.69×10~(-5)～3.6×10~(-6)。随机挑选10株融合子进行生化及谷氨酸发酵实验,证实了融合子的杂种性质。融合子的细胞、菌落形态和大小、形成芽孢能力及谷氨酸发酵能力等性状均较亲本有不同程度的变异。通过摇瓶发酵实验获得一株谷氨酸产率为7.29％以上的融合子。经长时间培养,此菌株仍保持了稳定性,因而具有应用前景。     

运用原生质体融合技术培育香菇新品种

对应用原生质体融合技术改良香菇的性状和创造新菌株进行了尝试。首先经品比试验,选出亲本材料Ｌ８６７、Ｌ７６Ｇｒ０４、Ｌ９３４、Ｌ９３７,再进行原生质体的制备,融合及融合子的再生,验证,分获１４、２０、２８株融合后代。     

甘肃省某牛场奶牛子宫内膜炎病原菌的分离鉴定及其耐药性分析

为调查甘肃省某奶牛场奶牛子宫内膜炎的病原菌并选择治疗用敏感药物,采用细菌分离培养、革兰氏染色镜检和16SrDNA序列分析,对采集的子宫内膜分泌物样品进行细菌分离鉴定;同时采用K-B法测定这些分离株对抗菌药物的敏感性。结果表明,从10份样本分离得到12株细菌,其中,大肠杆菌7株、芽孢杆菌3株、链球菌1株、假单胞菌1株。大肠杆菌对诺氟沙星、恩诺沙星、庆大霉素、氟苯尼考均不耐药;大肠杆菌对头孢噻肟和卡那霉素的耐药率为14.29%,对四环素和氨苄西林的耐药率均为28.57%,对红霉素耐药率为57.14%。芽孢杆菌对卡那霉素、诺氟沙星、恩诺沙星、氟苯尼考、庆大霉素、四环素均不耐药,而对头孢噻肟、红霉素及氨苄西林的耐药率均为33.33%。大肠杆菌和芽孢杆菌对青霉素均完全耐药(100%)。链球菌对氨苄西林、氟苯尼考、头孢噻肟敏感,对青霉素中度敏感,对其他6种抗菌药物耐药。假单胞菌对青霉素和头孢噻肟耐药,对其他8种抗菌药物敏感。     

仔猪黄痢江西流行株微生物特性及耐药性的研究

从江西省数个集约化养猪场的仔猪黄痢中分离到 1 0个分离株 ,经形态染色、培养特性及生化反应鉴定为大肠埃希氏杆菌 (Escherichiacoli,E .coli)。随后对该 1 0株细菌进行了常规药物的敏感试验和耐药性质粒抽提 ,结果显示对复方新诺明 (SXT)、红霉素 (E)、四环素 (TE)、乙酰螺旋霉素 (Asp)等药物均不敏感 ,说明我省仔猪黄痢大肠杆菌的耐药性较普遍。 1 0株细菌的质粒DNA指纹图谱结果表明 ,都携带有 1到多个质粒 ,其中一个质粒是 1 0个菌株所共有的 ,6个株菌有相同的质粒图谱 ,另外各有两个菌株有相同的图谱 ,质粒图谱显示可分为 3个不同菌型。     

哈茨木霉菌HNA12在防控玉米黄曲霉毒素污染中的应用

为从源头控制真菌毒素污染,本实验开展了玉米黄曲霉毒素污染拮抗微生物高通量筛选及生物防治研究。从江苏、山东、山西和河南等主产区的健康玉米籽粒内分离到1 055株木霉菌,其中,10株木霉菌拮抗带宽超过8 mm,抑制率为36.5%~90.0%。活体实验发现,7株木霉对黄曲霉菌有较强的抑制作用,抑制率为44.2%~87.0%,对黄曲霉毒素污染的抑毒率为40.5%~85.0%。试验菌株中,HNA12、T40-3和T85-5对黄曲霉菌的防治效果最高,分别达到87.0%、68.8%和64.5%,HNA12、T21-1和T40-3抑毒率最强,分别达到85.0%、75.2%和68.5%。田间试验显示,菌株HNA12的促生率及抑毒率最高,分别达到10.5%及90.5%,生防潜力巨大。经形态学及分子生物学分析,菌株HNA12被鉴定为哈茨木霉。拮抗机制实验证明,菌株HNA12发酵产物及其蛋白提取物对黄曲霉菌生长有较强的抑制能力,可以作为微生物制剂开发应用。     

牛源大肠杆菌对喹诺酮类抗生素耐药相关基因的筛选及鉴定

为在大肠杆菌全基因组范围内筛选和鉴定与喹诺酮类抗生素耐药性相关的基因,通过对临床分离的13株大肠杆菌进行药敏试验,选择耐药谱较广泛的菌株作为研究对象,利用Mariner转座子对其基因组进行随机突变,获得转座子突变株文库,并以亲本菌株为对照筛选文库中对喹诺酮类抗生素敏感的突变体,通过套式PCR、核苷酸测序及序列比对确定突变株中转座子的插入位点及其破坏的基因。结果表明:从突变株文库中筛选得到22株分别对诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、萘啶酸敏感的突变株,其中7株对4种抗生素都敏感;插入位点分析发现,抗生素敏感突变株中被转座子破坏的基因包括ecs4206(磷酸核酮糖激酶)、ecs3959(β-D-半乳糖苷酶β亚基)、ecs3946(假定蛋白)和ecs1857(DNA结合转录调控因子)。筛选出的基因可被开发为控制或扭转大肠杆菌耐药性的作用靶点。     

鸽源大肠杆菌O157：非H7菌株的致病性和耐药性分析

为查明南京市某赛鸽公棚赛鸽出现腹泻、死亡的致病病原,本研究对采集的病料进行病原分离鉴定,分析致病菌的血清型、生物被膜表型、毒力基因、耐药菌谱,并对分离菌株进行了人工感染试验。研究表明:1)从患病鸽组织、拭子和粪便中分离出的细菌初步诊断为大肠杆菌O157;分离菌株在NA平板上长出白色、光滑的圆形菌落,在CT-SMAC平板上长出紫红色菌落。2)分离菌株的16S rRNA基因序列与大肠杆菌的相似性达98%~99%,命名为E.c.86246。3)血清学试验表明分离菌株为大肠杆菌O157:非H7菌株,动力试验进一步证实其为动力株。4)分离菌株携带tccp1014、eaeA和hly毒力基因,可导致雏鸡胃肠道出现不同程度的功能损伤,甚至导致死亡;其半数致死量为2.0×10⁵ CFU/mL,具有较强的致病性。5)分离菌株携带tetA、tetM、sul2、aadA1和bla_TEM 5种耐药基因,具有较弱的生物被膜形成能力,对四环素、氨基糖苷类等抗菌药物严重耐药,对阿莫西林、氧氟沙星和诺氟沙星敏感。综上,本研究分离的鸽源大肠杆菌O157:非H7菌株,具有动力性,有较强的致病性和一定的耐药性,为大肠杆菌O157的流行病学调查、致病机理分析和抗菌药物的精准施治提供理论依据和数据参考。     

苜蓿中华根瘤菌与鹰嘴豆中慢生根瘤菌原生质体的融合研究

利用原生质体融合技术 ,以链霉素和青霉素分别作为苜蓿中华根瘤菌 (Sinorhizobium meliloti)10 2 F2 8和鹰嘴豆中慢生根瘤菌 (Mesorhizobium ciceri ) USDA3383的抗药性选择标记 ,成功地获得了 10 2 F2 8和USDA3383的属间融合子。该融合子可分别在双亲寄主植物上结瘤 ,其在细胞形态、大小和蛋白质电泳图谱上与亲本菌株均有所差异。融合子与 10 2 F2 8的 DNA同源性为 90 .8%,而与 U SDA3383的 DNA同源性为 15 .2 %。     

利用原生质体融合技术提高杂草生防菌对野燕麦的防效

选用对野燕麦有强致病力的候选优势菌株燕麦镰孢GD 2和多孢木霉HZ 31作为亲本,采用原生质体融合技术进行菌株改良,通过野燕麦种子萌发的抑制效果及温室抑草活性作用筛选出性状优异的融合子。结果表明,获得的3个性状各异的融合子进行离体生测后,融合子R2对野燕麦种子萌发的抑制效果显著高于燕麦镰孢GD 2,而与多孢木霉HZ 31的效果相当,盆栽致病力测定时融合子R1对野燕麦的鲜质量防效值高于双亲菌株,达68.03%。选用两种不同作用机制的生防菌株作为亲本进行融合,筛选获得防效优于亲本的微生物融合菌株R1。     

Fosfomycin Resistance in Avian Pathogenic Escherichia coli Isolates

Fosfomycin, a broad-spectrum antibiotic against both Gram-positive and Gram-negative bacteria, is very important in the clinic but many fosfomycin-resistant bacteria have been isolated from patients. In this study, the resistance mechanism of three fosfomycin-resistant avian pathogenic Escherichia coli (APEC) strains (JE1, IF7 and CD11) isolated from septicemic chickens were analyzed. The results showed that their fosfomycin-resistance mechanisms were different. An alteration in the glpT transport system was the main reason of the fosfomycin-resistance mechanisms of strain IF7. Compared with the control stain BL21, the capacity of fosfomycin-uptake was low in all these three stains (JE1>IF7>CD11). Sequence results of murA showed that there were more than 10 sites of nucleotide mutation, but only one amino acid mutation T116A showed in CD11. Real-time detection test showed that the expression level of the murA gene of the three stains was significantly increased (four times increase in strain CD11 and two times increase in strains JE1 and IF7). The transformation and recombinant test showed that the recombinant bacteria with the murA of JE1 and CD11 showed high minimal inhibitory concentration (MIC) against fosfomycin. From the results of this research, it showed that most of the fosfomycin-resistance mechanisms once showed in patient bacteria have appeared in the APEC strains and the fosfomycin-resistance mechanism of the three APEC isolates was different.     

深海泥样微生物菌群分离及生理生化性质研究

从海底泥样中初步分离出24个菌株,包括真菌、细菌,从24个菌株中选出9种进行菌体形态和生理生化性质研究,将9个菌株标记为1～9号。试验结果显示:从菌体形态观察,1～7、9号菌落边缘整齐,表面湿润粘稠不透明;生理生化性质研究都有很高的耐盐性,甲基红和V-P试验中全部是阴性菌株,1、2、3、6、7、9号菌是革兰氏染色阴性菌,5、6、9号菌能水解淀粉,3～9号菌能分解尿素,1～5、7、9号菌属于兼性厌氧型菌株。根据《伯杰细菌手册》初步鉴定:1、2、3、7、9号菌属肠杆菌科埃希氏菌属;4、5号菌属乳杆菌科;6号菌属盐杆菌科盐杆菌属;8号菌属真菌。