我科学家培育出世界最大的试管水牛群

2005年8月31日，在广西水牛研究所，胚胎移植水牛正悠闲地享用美食。从2000年起，广西水牛研究所利用奶水牛的卵母细胞在体外培育成熟，经过体外受精和受精卵在体外培养成为囊胚后，移植到本地的母水牛体内“借腹怀胎”。4年来，广西水牛研究所在水牛体外授精和胚胎移植技术领域取得重大突破。目前已成功培育出28头试管水牛，生长发育正常。这些试管水牛是目前世界上最大的试管水牛群。     

水牛输卵管上皮细胞的培养

在水牛体外胚胎生产过程中,胚胎发育阻滞现象较为普遍,严重影响了体外生产胚胎的效率。与输卵管上皮细胞共培养可以促进早期胚胎的体外发育,克服发育中的阻断现象,增加可以发育到囊胚期胚胎的数量,使胚胎能在更合适的时间移植,以提高移植后的着床率。水牛输卵管上皮细胞的培养技术,是随着对水牛的体外受精的研究而开展起来的,如何培养出适用于共培养的输卵管单层上皮细胞,在很多文章中都也只有过概述。本实验就如何培养水牛输卵管上皮细胞,摸索建立了一套较为合适的水牛输卵管上皮细胞培养的模型,为水牛的胚胎工程工作提供参考数据。     

水牛卵母细胞孤雌激活及孤雌胚与体外受精胚发育比较

对MII期水牛卵母细胞进行人工诱导激活可以帮助人们间接判断体外成熟卵母细胞质量的优劣。并且，卵母细胞的充分激活也是提高核移植效率的关键因素之一。试验比较了水牛卵母细胞体外成熟时间对孤雌激活胚发育能力的影响以及不同化学激活方法对水牛卵母细胞孤雌激活效果的影响，并在相同条件下，对孤雌激活胚与体外受精胚的发育能力进行了比较。结果表明，水牛卵母细胞体外成熟27小时或30小时的囊胚发育率（19．0％或17．7％）明显高于体外成熟21小时或24小时的囊胚发育率（12．3％或13．8％）；Ion联合6-DMAP激活水牛卵母细胞的效果优于其他几组激活方法；在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚的发育能力存在着差异，其中卵裂率差异不显著，但孤雌激活胚的囊胚发育率显著高于体外受精胚（13．0％vs21．7％）。     

Ghrelin对水牛体外受精和孤雌激活胚胎体外发育的影响

本研究的目的是探讨Ghrelin对水牛体外受精和孤雌激活胚胎体外发育的影响.体外成熟的水牛卵母细胞经体外受精或离子霉素孤雌激活后.分别在舍0,0.5,5,50和500 μg/L Ghrelin的培养液中进行体外培养,观察各组胚胎的卵裂率和囊胚率.结果显示,在培养液中添加不同浓度的Ghrelin对体外受精和孤雌激活胚胎的卵裂率均无显著影响(P>0.05),但添加500 μg/L的Ghrelin显著提高体外受精胚胎的囊胚发育率(33.5% vs 13.7%,P<0.05),50 μg/L或500 μg/L的Ghrelin均显著提高孤雌激活胚胎的囊胚发育率(32.4%和34.6% vs 14.5%,P<0.05).结果表明,培养液中添加Ghrelin对胚胎的早期卵裂没有影响,但可促进水牛体外受精和孤雌激活胚胎囊胚的形成.     

猪卵母细胞体外受精中膜电位变化与超微结构关系的研究

应用细胞内微电极技术，测定了猪卵母细胞体外成熟和体外受精过程中膜电位的变化，并结合电镜技术探讨了膜电位变化与卵母细胞超微结构的关系。结果发现，猪卵母细胞在体外发育培养前，膜电位为较小的负值；体外发育培养后，膜电位随着体外发育自发变化，首先发生去极化，然后发生极性倒转，由负值转为正值，体外受精后，膜电位复极化为负值，且随着受精发育负值增大，超微结构结果表明，猪卵母细胞的膜电位变化与超微结构密切相关。     

水牛卵母细胞孤雌激活及孤雌胚与体外受精胚发育比较

比较了水牛卵母细胞体外成熟时间对孤雌激活胚发育能力的影响,以及不同化学激活方法对水牛卵母细胞孤雌激活效果的影响,并在相同条件下,对孤雌激活胚与体外受精胚的发育能力进行了比较.结果表明,水牛卵母细胞体外成熟27 h或30 h的囊胚发育率(19.0%、17.7%)明显高于体外成熟21 h或24h的囊胚发育率(12.3%、13.8%);Ion联合6-DMAP激活水牛卵母细胞的效果优于其他几组激活方法;在相同条件下,孤雌激活胚与体外受精胚的发育能力存在着差异,其中卵裂率差异不显著,但孤雌激活胚的囊胚发育率显著高于体外受精胚.     

水牛试管繁殖技术难度大

水牛试管繁殖技术是２０世纪８０年代前后发展起来的体外受精（invitrofertilizationIVF）技术的一个分支。IVF技术的要点是把几千万个精子和一个或数个卵子在体外结合，再把受精卵放回母体子宫内，让它发育成一个生命个体。这项技术自１９７８年取得成功之后，人类和大部分家畜都有了试管后代。但是，由于水牛的生殖生理特征，试管水牛繁殖技术仍是生物技术的一个难题。水牛的体外条件卵母细胞质量差、精子体外获能低，因而试管水牛的繁育比黄牛困难得多。尽管１９８２年美国科学家布兰基（Bracket）率先培育出世界上第一胎体外受精的黄…     

水牛卵母细胞孤雌激活及孤雌胚与体外受精胚发育比较

对MⅡ期水牛卵母细胞进行人工诱导激活可以帮助人们间接判断体外成熟卵母细胞质量的优劣,并且,卵母细胞的充分激活也是提高核移植效率的关键因素之一.试验比较了水牛卵母细胞体外成熟时间对孤雌激活胚发育能力的影响以及不同化学激活方法对水牛卵母细胞孤雌激活效果的影响,并在相同条件下,对孤雌激活胚与体外受精胚的发育能力进行了比较.结果表明,水牛卵母细胞体外成熟27h或30h的囊胚发育率(19.0%or 17.7%)明显高于体外成熟21h或24h的囊胚发育率(12.3%or 13.8%);Ion联合6-DMAP激活水牛卵母细胞的效果优于其他几组激活方法;在相同条件下,孤雌激活胚与体外受精胚的发育能力存在着差异,其中卵裂率差异不显著,但孤雌激活胚的囊胚发育率显著高于体外受精胚(13.0%vs.21.7%).     

体外受精温度、时间及卵子质量对延边黄牛受精卵体外发育的影响

本研究探讨了体外受精温度、时间及卵子质量对延边黄牛卵母细胞体外受精后体外发育的影响。试验结果表明，体外受精温度为39℃、体外受精时间12h时，卵裂率、囊胚发育率及囊胚孵化率最佳；卵子的质量对受精卵体外发育的影响很大。     

水牛卵母细胞孤雌激活及孤雌胚与体外受精胚发育比较

对MII期水牛卵母细胞进行人工诱导激活可帮助人们间接判断体外成熟卵母细胞质量的优劣,且卵母细胞的充分激活也是提高核移植效率的关键因素之一。本试验比较了水牛卵母细胞体外成熟时间对孤雌激活胚发育能力的影响及不同化学激活方法对水牛卵母细胞孤雌激活效果的影响,并在相同条件下,对孤雌激活胚与体外受精胚的发育能力进行了比较。结果表明,水牛卵母细胞体外成熟27h或30h的囊胚发育率（19.0%or 17.7%）明显高于体外成熟21h或24h的囊胚发育率（12.3%or 13.8%）;Ion联合6-DMAP激活水牛卵母细胞的效果优于其他激活方法;在相同条件下,孤雌激活胚的囊胚发育率显著高于体外受精胚（13.0%vs.21.7%）。     

不同时期鸡胚胎体外培养的比较研究

试验采用代用蛋壳体外培养方法进行了不同时期鸡胚胎换蛋壳培养的研究。结果显示：体外受精卵体外培养发育率为10％。X期胚胎体外培养的孵化率为1．2％；孵化1日龄的胚胎体外培养的孵化率为7．9％；直接去1／4壳的鸡胚孵化率为3．7％；鸡胚胎换蛋壳以后，添加6～8札的稀蛋白对换壳鸡胚发育比较适宜。     

我国第一头试管水牛在广西农业大学降生

由广西农业大学动物繁殖研究室副研究员蒋和生博士主持的水牛体外受精技术研究,在全室研究人员通力合作、共同努力下,采用完全体外化技术培养胚胎移植取得成功,受体母牛顺利怀孕,于1993年10月28日上午在广西农业大学良种牛南方繁育中心产下了一头母犊,这是全国首例。该例试管水牛初生重为28公斤,体长68厘米,体高58厘米,胸围72厘米。是从屠宰     

水牛繁殖生物技术研究进展

水牛的繁殖受诸多因素的影响。为提高其繁殖力 ,多种繁殖生物技术得到大量研究。水牛精子的稀释、冷冻及人工授精已基本程序化 ,并得到了广泛推广。通过超数排卵和胚胎移植的研究 ,获得了水牛胚胎移植的后代。水牛卵母细胞的采集、体外成熟、体外受精和受精胚的培养也得到大量研究 ,并成功产出体外受精水牛。在水牛胚胎冷冻和移植的研究方面也取得成功并产犊。细胞核移植、基因组和基因图谱等新兴生物技术在水牛上也得到初步研究。随着转基因等生物技术的进一步发展 ,水牛的遗传资源将得到更好的开发     

我国水牛试管繁殖技术在世界领先

随着一头试管水牛目前在中国农科院广西水牛研究所诞生,由该所采用完全体外化受孕培养胚胎移植技术而受孕的7头母牛,共获得8头试管水牛.……     

水牛分离精子与不同来源卵母细胞体外受精的效果研究

本研究的目的是探讨水牛分离精子与不同来源(活体采卵或屠宰场卵巢采卵)卵母细胞体外受精的效果。活体采卵是选用20头空怀河流型母水牛(其中摩拉母牛12头,尼里-拉菲母水牛8头)每间隔3 d采卵1次,连续采卵5~6周,活体采集卵母细胞;屠宰场卵巢采卵是收集屠宰场水牛卵巢,用10 mL注射器连接18 G针头吸取水牛卵巢上可视的卵泡来收集卵母细胞。将收集的AB级水牛卵母细胞在相同的条件下进行体外成熟、然后用分离或未分离精子进行体外受精以及体外培养至囊胚。结果发现:活体采卵组和屠宰场收集的水牛卵母细胞组用分离精子受精分裂率和囊胚率没有差异(P>0.05);分离精子和未分离精子的体外受精分裂率和囊胚率也没有差异(P>0.05)。由此说明,水牛分离精子可以用于体外生产性控胚胎。     

氨基酸、维生素对水牛体外受精胚胎体外发育的影响

通过在培养液中添加不同浓度的氨基酸或维生素,探讨其对水牛体外受精(IVF)胚胎体外发育的影响.结果表明:(1)非必需氨基酸可显著提高水牛卵母细胞IVF后胚胎的分裂率,但对囊胚发育率无显著影响;(2)低浓度的必需氨基酸对水牛IVF胚胎的发育具有一定促进作用,但高浓度则有抑制作用;(3)维生素对水牛IVF胚胎发育则有促进作用.在培养液中添加维生素,水牛IVF胚胎的分裂率和第7天囊胚发育率显著提高.     

绵羊体外受精及胚胎发育分子调控研究进展

家畜体外受精研究最早的动物是绵羊。与其他动物体外受精过程一样,绵羊体外受精技术也包括卵母细胞体外成熟(IVM)、精子体外获能、体外受精(IVF)、受精卵体外培养(IVC)以及胚胎移植(ET)等过程。因此,绵羊胚胎的体外生产技术的效率受到了这些技术环节当中诸多因素的影响,并且动物胚胎的发育受到多种调控因子的调节。本文就当前绵羊体外受精技术环节中的相关影响因素以及胚胎发育分子调控的相关研究进展作一综述。     

牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术的研究进展

文章综述了十几年来牛的卵母细胞体外成熟和体外受精技术的研究进展，包括精子的体外获能、9日母细胞采集及成熟培养和体外受精、体外受精早期胚胎的培养等环节，并且对影响该技术的主要原因进行了分析，对体外受精在家畜育种中的应用提出了展望。     

小鼠体以精及胚胎发育的影响因素

为了完善小鼠体外受精和胚胎的体外培养系统，以M16为基础培养液，探讨了葡萄糖、磷酸盐、EDTA、谷氨酰胺及β－疏基乙醇等对小鼠体外受精和胚胎体外培养的影响。结果表明，在M16液中添加EDTA和L－谷氨酰胺（mM16液），小鼠的体外受精率由26％提高到51％；当在mM16液中去掉磷酸盐，或添加Hepes，或添加β－疏基乙醇，体外受精率由51％增至62％－74％；mM16液中添加Hepes，或去掉磷酸盐，可阻碍胚胎的体外发育，囊胚的抗张率由80％降至49％和58％，而在无糖mM16液中添加β－疏基乙醇，可显著地提高扩张囊胚率（91％）。以上结果表明、M16液中添加EDTA、谷氨酰胺和β－疏基乙醇后，适用于小鼠体外受精；同时去掉葡萄糖后，则适用于2细胞胚的体外培养。     

全国水牛专业技术培训班在水牛研究所举办

2000年6月16日至28日，广西水牛开发项目办公室和中国农科院广西水牛研究所联合举办了一期“全国水牛专业技术培训班”，来自云南省、贵州省、江西省以及广西区内的14名畜牧兽医技术人员和个体水牛场的技术人员参加培训。培训班聘请了广西大学、广西畜牧研究所、广西畜禽品种改良站和水牛研究所共九位高、中级专家担任授课老师，较系统地讲授了杂交水牛生产中的有关技术。学员们还在广西水牛研究所水牛场和广西品改站种公牛站进行了生产实习。按照教学计划，学员们还到广西灵山县文利镇和广西防城港市防城区等水牛开发项目示范点作了为期三天的考察调研。 　　举办此次培训班是为各地培养水牛技术骨干力量，以便不断开发南方各省的水牛资源，促进水牛奶业规模化发展，缓解南方奶源紧张的局面，增加农民收入，提高农村经济效益。